免疫检查点疗法(PD-1 & PD-L1)
随着癌细胞是如何逃避免疫杀伤的机制逐渐清晰，大大推动了癌症免疫治疗的演進。特别是在不同免疫检查点的研究上，像是PD-1和CTLA-4通路，其抑制T细胞抗肿瘤活性的功能，提供了新的干预治疗机会。研究人员也利用抑制这些检查点，使T细胞发挥杀伤肿瘤细胞的作用。值得兴奋的是除放疗和化疗可以趋动抗肿瘤的T细胞外，抑制免疫检查点和其他免疫调节方法也可以结合传统的方式，使一些恶性肿瘤的临床疗效得到最佳化。
GeneTex 一次帮大家整理好相关抗体及路径图。
http://www.genetex.com/Web/News/NewsList.aspx?id=395
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小鼠CIA，免疫方案及乳滴聚结实验
小鼠：选择一种品系的小鼠
DBA/1 (DBA)小鼠 或 C57BL/6 (B6)小鼠
l 7-8周小鼠
l SPF级动物房
l 高脂饮食
推荐佐剂和胶原蛋白：选择1种佐剂+ 1种胶原蛋白
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货号 |
佐剂 |
货号 |
骨胶蛋白 |
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7002 |
Incomplete Freund’s Adjuvant (IFA) (DBA – Booster only) |
20011 |
Chick Type II Collagen, Lyophilized (DBA or B6) |
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7008 |
Complete Freund’s Adjuvant (CFA), 1 mg/ml (DBA) |
20012 |
Chick Type II Collagen, 2 mg/ml Solution (DBA or B6) |
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7001 |
Complete Freund’s Adjuvant (CFA), 4 mg/ml (DBA) |
20021 |
Bovine Type II Collagen, Lyophilized (DBA) |
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7023 |
Complete Freund’s Adjuvant (CFA), 5 mg/ml (B6) |
20022 |
Bovine Type II Collagen, 2 mg/ml Solution (DBA) |
免疫方案
方案1: 单一免疫 (DBA mice)
Day 0: 皮下注射:胶原乳剂加CFA: 4mg /ml结核分枝杆菌
Day 0 – 28: 每7天给关节炎评分
Day 28 – 56: 每2-3天给关节炎评分：关节炎发病率90 – 100%
Day 56: 实验结束。
或
方案 2: 加强免疫
Day 0: 皮下注射:含CFA的胶原乳剂:1mg /ml (DBA)或5mg /ml结核分枝杆菌(B6)
Day 0 – 28: 每7天给关节炎评分
Day 21: 皮下注射(加强剂):胶原乳剂配合IFA (DBA)或CFA：5mg /ml结核分枝杆菌(B6)
Day 28 – 56: 每2-3天给关节炎评分：关节炎发病率90 – 100% (DBA)，50-70% (B6)
Day 56: 实验结束。
用匀浆器准备乳剂：不要使用两个注射器方法
步骤*:
1. 准备材料 (图1. Homogenizer blade浆式匀浆器 (a), 带有三通旋塞的10mL注射器 (b) 和1 ml Hamilton 注射器 (c)).
2. 锁开关。
3. 保持在冰上(图2)。
4. 注射器中加入CFA。
5. 逐滴滴入等量的胶原蛋白溶液(图3)。
6. 以10,000 – 30,000 rpm混合2分钟。搅拌时，上下移动注射器。
7. 将注射器放入冰中冷却5分钟。
8. 以10,000 – 30,000 rpm混合2分钟。搅拌时，上下移动注射器。
9. 用乳滴试验评价乳剂
10. 用三通旋塞将乳剂转移到Hamilton注射器中。
乳滴聚结实验
免疫：
注射器中的乳剂 (没有气泡!) (b) 注射针 (25或27-gauge x 5/8”) (c) 限制装置
不要使用腹腔注射（IP）(a) 或 静脉注射 IV (b) 的方式注射小鼠
更多详情请咨询Chondrex代理商-上海金畔生物
免疫疗法无效的可能原因-β-catenin
虽然使用新的免疫治疗方法(例如，利用抗CTLA-4，PD-1和PD-L1的抗体)来对抗恶性肿瘤令人振奋，但你知道实际上只有一部分的患者有临床反应吗?研究表示，主要的问题在于CD8+T细胞是否浸润到肿瘤微环境中，发挥T细胞抗肿瘤反应。在Nature Letter文章中，研究黑色素瘤的Spranger等人发现Wnt/β-catenin信号通路被激活，会削弱T细胞对肿瘤的反应，也就是抑制 beta-catenin可以提高免疫治疗的效果。
美国GeneTex提供WNT/β-catenin通路的专一性抗体，快来研究相关标的是否还有其他惊人的作用吧~
Reference:
1. Nature. 2015 Jul 9;523(7559):231-5
2. 更多资讯链结
http://crm.itpison.com/Var/Elite/9c222ff2-6b03-4db3-9768-d35bdc97e9fc/BACKUP/HTML/506082716.htm
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动物免疫之——佐剂篇
InvivoGen公司可提供多种佐剂， 并且InvivoGen的佐剂均为疫苗级别的，确保无菌和无内毒素。
佐剂的分类—常用的佐剂可分为以下4类
● 无机佐剂：如氢氧化铝，明矾等；
● 有机佐剂：微生物及其产物如分枝杆菌（结核杆菌、卡介苗）、短小杆菌、百日咳杆菌、内毒素、细菌提取物（胞壁酰二肽）等；
● 合成佐剂：如人工合成的双链多聚核苷酸（双链多聚腺苷酸、尿苷酸）、左旋咪唑、异丙肌苷等；
● 油剂：如弗氏佐剂、花生油乳化佐剂、矿物油、植物油等。
● 其中，弗氏佐剂是目前动物实验中最常用的一种佐剂。
明矾和乳剂
明矾和乳剂，通过将抗原固定在注射部位，让其缓慢释放从而达到持续刺激免疫系统的作用。这些佐剂可使抗原在注射部位长久存在，增强抗原递呈细胞（APCs）的募集和活化。明矾可与抗原结合形成多分子聚合物，从而促进其被APCs的摄取。
明矾（Alum ）
用于人类疫苗接种最常用的一种佐剂，存在于多种疫苗中，包括白喉-百日咳-破伤风三联苗、人乳头瘤病毒疫苗和肝炎病毒疫苗。明矾可引起强烈的Th2细胞应答，但是对于需要Th1细胞调节的免疫应答来清除的病原体是无效的。
完全弗氏佐剂(Complete Freund’s Adjuvant,CFA)
由热灭活的结核分支杆菌、石蜡油和羊毛脂混合而成， 具有TLR2, TLR4, and TLR9的配体，主要引起Th1细胞免疫应答；而不完全弗氏佐剂（Freund’s Incomplete Adjuvant ,IFA)和CFA相比，缺少结核分枝杆菌这一成分，主要诱导Th2细胞免疫应答。在大多数实验中，CFA被用于初次免疫，IFA被用于后续的免疫中。
AddaVax™
一种基于鲨烯的水包油纳米乳剂，其构成与诺华专利佐剂MF59®相似。主要通过募集和活化APC，刺激巨噬细胞和粒细胞产生细胞因子和趋化因子发挥作用。
| 产品名称 | 产品描述 | 品牌 |
| AddaVax™ | Squalene-Oil-in-water Th2 response | InvivoGen |
| Alhydrogel® 2% | Aluminium hydroxide gel Th2 Response | InvivoGen |
| CFA | Complete Freund’s Adjuvant Th1 response | InvivoGen |
| IFA | Incomplete Freund’s adjuvant Th2 response | InvivoGen |
| 产品货号 | 产品名称 | 品牌 |
| 7015 | Complete Freund’s Adjuvant, 3 mg/ml | Chondrex |
| 7001 | Complete Freund’s Adjuvant, 4 mg/ml | Chondrex |
| 7002 | Incomplete Freund’s Adjuvant | Chondrex |
Bioporto人免疫球蛋白E(Human IgE)
什么是DIA HE1 IgE？
DIA HE1 IgE是经过亲和纯化的完整人IgE（含κ轻链)抗体，通过一种单克隆杂交瘤体外培养产生，这种特有的生产方式可避免其他同型免疫球蛋白污染，来源于多发性骨髓瘤患者的IgE，其批次之间可能差异性较大，单克隆细胞来源的IgE具有很好的批间一致性。人IgE广泛应用于研究过敏症状和制造诊断试剂盒，同时主要作为IgE定量检测实验的标准品和用于内部控制和质量检测。
DIA HE1人IgE应用：
BioPorto DIA HE1 IgE–广泛应用于科研和制造业：
用于：标准品，酶联免疫检测，诊断，细胞免疫，定量分析，
内部质控，微阵列/生物传感器，细胞刺激/激活，免疫组织化学。
BioPorto DIA HE1 IgE产品优势：
低内毒素水平，各批次质量稳定，极高的可重复性，无同型免疫球蛋白污染，纯度＞90%，有/无叠氮化物两种形式产品提供。
BioPorto DIA HE1 IgE制备：
人IgE来源于单克隆细胞系，通过Protein L层析纯化，SDS-PAGE检测其纯度>90％。
BioPorto DIA HE1 IgE规格：
我们能提供100μL、1mL或者客户定制规格的DIA HE1 人IgE ：
Bioporto从单克隆细胞系中纯化得到的成分单一高纯度的人IgE，将会大大的增强您研究和生产的可靠性。
注：仅用于体外试验或IVD原料。
免疫细胞化学实验操作指南
该免疫细胞化学实验方法仅供参考，由于每个实验使用的试剂不同，并且涉及不同的物种，组织类型及实验应用，实验人员设计应根据具体情况设计实验步骤和改良。
所需试剂
PBS 洗涤液. 磷酸盐缓冲液 (PBS). 使用 10x PBS, pH 7.2 (0.2M 磷酸钾, 1.5M NaCl). 用适量去离子水稀释到1x.
甲醛固定. 用PBS稀释到 4%.
抗体稀释液. 制备100ml 的PBS 洗涤液，加入1ml 与二抗宿主同物种的正常血清.
生物素化的二抗. 在抗体稀释液中制备生物素化的二抗溶液. 使用抗一抗宿主的生物素化的二抗.
链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶. 在PBS缓冲液中制备链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶溶液.
DAB 底物.
苏木精复染色以及固定介质.
步骤
将细胞生长于显微镜载玻片，或盖玻片，或细胞培养板上。除去培养基液，用冰冷的PBS小心清洗细胞3次。用含4%甲醛的PBS溶液于冰上固定细胞30分钟，使用的甲醛溶液应与最初培养基液体积相等。弃去固定液，用PBS冲洗3次每次5分钟。如需要，可在含1% H2O2 的PBS溶液中孵育5分钟，以除去内源的过氧化物酶活性。用PBS清洗固定的细胞3次，每次5分钟。
用抗体稀释液制备适宜浓度的一抗溶液。移去细胞上的缓冲液。加入足够量的一抗使其覆盖细胞。室温下孵育一抗60分钟。如果一抗与抗原的亲和力较低，可于4?C下过夜孵育。移去一抗溶液。用PBS清洗3次，每次5分钟。
移去细胞上的缓冲液。加入稀释的生物素化的二抗，室温下孵育30分钟。最佳的稀释度每个批次二抗有所不同。用PBS清洗3次，每次5分钟。
移去细胞上的缓冲液。加入稀释的链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶，室温下孵育30分钟。移去溶液。 用PBS清洗3次，每次5分钟。
移去缓冲液。加入DAB底物，孵育大概10分钟或者直到反应颜色足够深。
移去溶液。用蒸馏水清洗3次，每次2分钟。用苏木精复染色，根据浓度和所需颜色深度的不同，染色1至5分钟。用蒸馏水清洗3次，每次2分钟。用100%的乙醇给细胞脱水4次，每次2分钟。用二甲苯清洗细胞4次每次2分钟。加入2~3滴固定介质，固定好盖玻片使之风干。
在显微镜下观察细胞。阳性反应应是可见的棕色沉淀。细胞核应显浅蓝色。
如需购买相关产品，请联系上海金畔生物
Bioxcell免疫细胞特异性标志物抗体
Bioxcell是高性价比体内研究抗体生产商，拥有超过十五年单克隆抗体和重组蛋白生产及定制经验。其生产的抗体纯度高、内毒素低、无防腐剂，非常适用于体内临床前研究。而且产品性价比高，可提供100mg甚至50g的大包装。
下面是Bioxcell免疫细胞特异性标志物抗体列表，如需了解更多的Bioxcell产品及咨询技术问题，请联系Bioxcell全国代理商上海金畔生物。
| 细胞类型 | 标靶 | 产品货号 | 细胞类型 | 靶标 | 产品编号 |
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CD3e
TCRβ Thy1.2(CD90.2) Thy1(CD90) Thy1(CD90) |
BE0001-1
BE0102 BE0066 BE0212 BE0076 |
 |
CD8α
CD8α CD8α CD8α Cd8β |
BE0004-1
BE0061 BE0117 BE0118 BE0223 |
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B220 CD19 |
BE0067
BE0150 |
 |
CD4
CD4 |
BE0003-1 BE0119 |
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CD2(IL-2Rα) |
BE0012 |  |
Vγ2 TCR | BE0168 |
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NK1.1 | BE0036 |  |
Thy1.2(CD90.2) | BE0066 |
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Ly6G Ly6G(Gr-1) |
BE0075-1 BE0075 |
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CSF1R(CD115)
F4/80 |
BE0213 BE0206 |
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IL-5 | BE0198 |  |
CD317(PDCA-1) | BE0255 |
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Ly6G(Gr-1) GSF1R F4/80 |
BE0075
BE0213 BE0206 |
详情请咨询 Bio X cell中国代理-上海金畔生物
Cayman chemical公司免疫与炎症研究试剂
Cayman chemical公司成立于1980年，总部位于美国密歇根州。该公司汇集了众多生化合成领域的专家，为各研究领域的科学家们提供各种生化研究工具，如为癌症，氧化损伤，表观遗传学，神经科学，炎症，代谢等许多研究领域提供检测试剂盒，用于检测类花生酸、自由基生物标志物、环核苷酸、细胞因子、激素和一氧化氮，以及各种高质量的生化制品，包括类花生酸、一氧化氮试剂、小分子抑制剂以及各种相关的脂类、脂肪酸、酶和抗体。
金畔作为国内代理商，已代理Cayman品牌15余年，为国内众多科研院校及工业客户提供了长期的优质服务。本资料为综合筛选的Cayman热销品类展示，如您需要更多资讯，请联系我们！
免疫与炎症研究产品
| 产品名称 | 货号 | 说明 |
| Resolvin D1 ELISA Kit | 500380 | 脂类炎症介质检测 |
| Maresin 1 ELISA Kit | 501150 | 脂类炎症介质检测 |
| Leukotriene B4 EIA Kit | 520111 | 脂类炎症介质检测 |
| Lipoxin A4 ELISA Kit | 590410 | 脂类炎症介质检测 |
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Prostaglandin E2 EIA Kit – Monoclonal |
514010 | 脂类炎症介质检测 |
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Prostaglandin E2 Express EIA Kit |
500141 | 脂类炎症介质检测 |
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Anti-Ovalbumin IgE (mouse) EIA Kit |
500840 | 过敏 |
| BAY-u3405 | 10156 | 过敏 |
| Histamine EIA Kit | 589651 | 过敏 |
| 产品名称 | 货号 | 说明 |
| Phagocytosis Assay Kit
(IgG FITC) |
500290 | 天然免疫-吞噬作用 |
| 2’3′-cGAMP ELISA Kit | 501700 | 天然免疫-STING |
| Cyclic di-GMP ELISA Kit | 501780 | 天然免疫-STING |
| Cyclic di-AMP ELISAKit | 501960 | 天然免疫-STING |
| COX-2 (human
recombinant) |
60122 | 环氧合酶活性及
抑制剂检测 |
| COX(ovine/human) Inhibitor
Screening Assay Kit |
560131 |
环氧合酶活性及 抑制剂检测 |
|
COX-1 (human recombinant) |
17616 |
环氧合酶活性及 抑制剂检测 |
更多Cayman产品详情，请咨询代理商-上海金畔生物
免疫级牛II型胶原蛋白
免疫级牛II型胶原蛋白，仅供科研使用
产品信息
货号：20021
描述：高纯度II型胶原蛋白
应用：可用于多种用途，如作为SDS-gel胶原蛋白分析的标准，MMP-1、MMP-8和MMP-13的底物，以及在某些物种和菌株的实验动物中作为免疫动物诱导胶原诱导关节炎(CIA)的抗原。
规格：10mg
提供形式：冻干粉
来源：牛关节软骨
分子量：300 kDa
纯度：>99% by SDS-PAGE, 不含胃蛋白酶和蛋白聚糖。
储存条件：4℃避光
稳定性：2年
注：可溶于酸性缓冲液(最大4mg /ml)，但难以溶于中性缓冲液。为了将本品溶于中性缓冲液中，首先将胶原蛋白溶于0.01M或0.05M的乙酸中，（浓度为1-4 mg/ml），然后将胶原蛋白溶液加入所需的中性缓冲液中，如2-10 X TrisNaCl (NaCl终浓度为0.15-0.2M)或在4℃下对1X中性缓冲液透析。注1: 为避免中性条件下纤维的形成，溶液需在冰上。注2: II型胶原的理化性质不同于I型胶原，溶解在中性缓冲液中的II型胶原在37℃孵育下不能形成稳定的凝胶。为了制备II型胶原蛋白凝胶，可能需要额外的成分，如I型胶原蛋白或其他物质。
更多详情请咨询Chondrex代理商-上海金畔生物
免疫组织化学背景小知识
什么是免疫组织化学
免疫组织化学(Immunohistochemistry)或免疫细胞化学(immunocytochemistry), 是应用免疫学基本原理—抗原抗体反应, 即抗原与抗体特异性结合的原理, 通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质), 对其进行定位、定性及定量的研究技术。
免疫组化将免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来, 借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用, 在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体及受体等)。
免疫组化标本
实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类, 前者包括石蜡切片和冰冻切片, 后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。
其中石蜡切片是制作组织标本最常用、最基本的方法, 对于组织形态保存好, 且能作连续切片, 有利于各种染色对照观察; 还能长期存档, 供回顾性研究。石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响, 但可进行抗原修复, 是免疫组化中首选的组织标本制作方法。
免疫组化检测方法
>>直接法
直接法又称一步法, 采用带标记的抗体(如FITC)直接作用于组织切片上的抗原。该技术仅需一种抗体, 流程简短、快速。但因为没有信号放大系统, 直接法灵敏度不高。随着间接法的引入, 直接法应用逐渐减少。
>>PAP法
PAP(peroxidase anti-peroxidase), 即过氧化物酶-抗过氧化物酶法。该法是间接法的进一步改进, 涉及第三层过氧化物酶标记的过氧化物酶抗体。该抗体与第二层未标记抗体结合。因为过氧化物酶分子不是通过化学方法与IgG结合而是通过免疫结合, 故灵敏度高出100-1000倍。PAP法一抗的稀释倍数增高, 可减少非特异性的背景染色。
>>ABC法
ABC(avidin-biotin-complex)代表的是亲和素-生物素-过氧化物酶复合物。利用亲和素分别连接生物素标记的第二抗和生物素标记的酶。但是此法注意内源性生物素活性的消除, 以减少非特异性的染色。
>>间接法
间接法涉及一个未标记的一抗(第一层，直接跟组织抗原反应)和一个标记的二抗(第二层, 与一抗反应)。因为二抗可跟一抗上多个不同的抗原位点结合, 放大信号, 从而提高了该法的灵敏度。当二抗标记上荧光染料, 如FITC、罗丹明、德克萨斯红等, 即是间接免疫荧光法。当二抗标记上酶, 如过氧化物酶、碱性磷酸酶或葡萄糖氧化酶, 即是间接免疫酶法。
>>SP法
SP(streptavidin-perosidase)法, 即链亲和素-过氧化物酶连结法, 是采用生物素标记的第二抗体与链亲和素连接的过氧化物酶及底物色素混合液来测定细胞或组织中的抗原。链亲和素是一种金黄色葡萄球菌细胞壁分离的蛋白质, 它能与各种动物的IgG的Fc段结合, 在免疫组化中可作为桥连抗体或标记抗体。最大的优点是不受种属的特异性限制。此法还具有染色时间短、灵敏度高、背景染色淡等优点, 分子量小, 易于穿透组织。
※ ABC法 VS SP法
ABC法的’三抗’是SABC复合物即链酶亲和素-生物素-过氧化物酶复合物
SP法的’三抗’是过氧化物酶直接与链酶亲和素相连的, 没有通过生物素的中介连接
免疫组化常用染色方法
根据标记物的不同分为免疫荧光法、免疫酶标法和免疫胶体金技术。
| >>免疫荧光法 | >>免疫酶标法 | >>免疫胶体金法 |
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免疫荧光染色是最早出现的免疫组化的染色方法。基于抗原抗体的免疫反应, 结合抗原的带荧光标记的抗体在荧光显微镜下通过特殊波段的激发从而发出荧光, 以此定位结合抗原的位置。免疫荧光因其高灵敏性、特异性、简便性, 被广泛应用于医学分析和诊断。 |
在免疫酶染色法中, 酶标记的抗体与组织或细胞内的特异性抗原相结合。加入酶显色底物后, 形成不可溶性物质, 通过显微镜 可观察定位。 |
免疫胶体金法采用胶体金作为标记物, 这种特殊的金属离子呈胶体形式, 可快速稳定地结合蛋白质。此外, 胶体金几乎不影响天然蛋白质的生物活性。因此胶体金是一种理想的材料, 用于结合一抗、二抗或其他蛋白的IgG部位, 从而定位组织或培养细胞上的特定抗原。由于胶体金离子的大小和电子密度不同, 免疫胶体金法可适用于免疫电子显微镜或光学显微镜下单或多标记检测。 |
更多详情请联系Vectorlabs代理商——上海金畔生物
