Human IL-1β ELISA Kit

Human IL-1β ELISA Kit别名检验原理产品组成检测范围使用方法背景说明储存/保存方法注意事项

概述
别名
人IL-1βELISA试剂盒,catabolin, IL1 beta, IL-1 beta, IL-1, IL1B, IL-1b, IL1-BETA, IL-1F2, IL1F2IL-1 beta, interleukin 1, beta, interleukin-1 beta, preinterleukin 1 beta, pro-interleukin-1-beta,人白介素1βElisa试剂盒
检验原理
本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测技术。特异性抗人IL-1β抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入标准品、待测样本和生物素化的检测抗体,经过孵育,样本中存在的IL-1β与固相抗体和检测抗体结合,形成免疫复合物。洗涤去除未结合的物质后,加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(Streptavidin-HRP)。洗涤后,加入显色底物,避光显色。加入终止液终止反应,在450nm波长(参考校正波长540nm或570nm)测定吸光度值。
产品组成
请在试剂盒有效期内使用(新老产品随机发货)

组成 规格 拆封后,稀释或重溶的试剂有效期
Human IL-1β Microplate 1块 将未使用的板条放回带有干燥剂的铝箔袋中密封后,可在2-8℃储存30天
Human IL-1β标准品 2支 溶解后,计算用量分装,可在-20°C储存14天
Human IL-1β检测抗体 1支 浓缩体积溶解后,可在2-8°C储存14天
40×SA-HRP 1支 40×浓度可在2-8°C储存;1×工作浓度不建议保存
10×浓缩稀释用缓冲液 1瓶 开封后,可在2-8°C储存30天
显色液 1瓶
终止液 1瓶
20×浓缩洗涤缓冲液 1瓶
封板膜 3张 常温储存,为避免污染,不可重复使用
检测范围
3.9pg/mL-250pg/mL
使用方法
需自备试验器材
1. 酶标仪(可测量450nm检测波长的吸收值及540nm或570nm校正波长的吸收值)
2. 高精度加液器及一次性吸头
3. 蒸馏水或去离子水
4. 洗瓶(喷瓶)、多通道洗板器或自动洗板机
5. 500mL量筒

一、实验前准备
1. 样品搜集及储存
①细胞培养上清:颗粒物应通过离心去除;立刻检测样本。样本收集后若不及时检测,建议按一次使用量分装,冻存于-20℃冰箱内,避免反复冻融。样本可能需要用稀释剂(1×)稀释。
②血清:使用血清分离管(SST)收集样本,样品室温放置30分钟。离心15分钟,转速为1000g。立即取出血清,并立即检测。样本收集后若不及时检测,建议按一次使用量分装,冻存于≤-20℃冰箱内,避免反复冻融。样本可能需要用稀释剂(1×)稀释。
③血浆:使用EDTA、肝素或柠檬酸作为抗凝血剂收集血浆,在收集后30分钟内离心15分钟,转速为1000g,并立即检测。样本收集后若不及时检测,建议按一次使用量分装,冻存于≤-20℃冰箱内,避免反复冻融。样本可能需要用稀释剂(1×)稀释。
2. 试剂配制(使用前请将所有试剂和样本放置于室温,静置 15 分钟。建议所有的实验样本和标准品做复孔检测
①1×洗涤液配制:试剂盒中的浓缩洗涤液为20×母液,使用前需使用蒸馏水稀释为1×工作液。例:取10mL浓缩洗涤液+190mL蒸馏水定容至200mL,实际操作时可先计算使用量,再进行配制。
②1×稀释用缓冲液配制:试剂盒中的浓缩稀释用缓冲液为10×母液,使用前需使用蒸馏水稀释至1×工作液。例:取3mL浓缩稀释用缓冲液+27mL蒸馏水定容至30mL。实际操作时可先依据样本稀释倍数,计算所需的稀释用缓冲液用量,再进行配制。
③检测抗体:将干粉离心至管底,使用110uL稀释用缓冲液(1×)溶解,室温静置5分钟后得到100×母液;使用前需稀释为1×工作液。按照每孔用量100uL计算所需体积。例:使用了10个孔,则取10uL的100倍工作浓度的检测抗体,使用稀释用缓冲液(1×)定容至1mL,得到1mL的1×工作浓度的检测抗体。
④SA-HRP:SA-HRP为40×母液,使用前需使用稀释缓冲液(1×)稀释配制成1×工作液,每孔所需量为100uL。例:使用了10个孔,则取25uL的40×母液+975uL稀释用缓冲液(1×)定容至1mL,得到1mL的1×工作浓度的检测抗体。
⑤显色剂:按每孔100uL,计算当次试验所需要用量,取出相应体积的显色剂,避光;取出的显色剂仅供当日使用。
⑥标准品:冻干标准品用稀释用缓冲液(1×)重溶,重溶体积1000uL,得到浓度为250pg/mL标准品母液。轻轻震摇至少5分钟,其充分溶解。每个稀释管中加入300uL稀释用缓冲液(1×)。将标准品母液参照下图做系列稀释,每管须充分混匀后再移液到下一管。没有稀释的标准品母液可用作标准曲线最高点(250pg/mL),稀释用缓冲液(1×)可用作标准曲线零点(0pg/mL)。

Human IL-1β ELISA Kit

二、操作步骤
1. 准备好所有需要的试剂和标准品;
2. 从已平衡至室温的密封袋中取出微孔板,未用的板条请放回铝箔袋内,重新封口;
3. 向微孔板中加入300uL洗涤液,静置浸泡30秒,弃掉洗液在吸水纸上将微孔板拍干,请立即使用不要让微孔板干燥;
4. 分别将不同浓度标准品,实验样本或者质控品加入相应孔中,每孔100uL。用封板胶纸封住反应孔,室温孵育2小时;
5. 将板内液体吸去,使用洗瓶、多通道洗板器或自动洗板机洗板。每孔加洗涤液300uL,然后将板内洗涤液吸去。重复操作3次。每次洗板尽量吸去残留液体会有助于得到好的实验结果。最后一次洗板结束,请将板内所有液体吸干或将板倒置,在吸水纸拍干所有残留液体;
6. 在每个微孔内加入100uL检测抗体。用封板胶纸封住反应孔,室温孵育2小时;
7. 重复第5步洗板操作;
8. 在每个微孔内加入100uLSA-HRP,室温孵育20分钟。注意避光;
9. 重复第5步洗板操作;
10. 在每个微孔内加入100uL显色液,室温孵育5-30分钟,注意避光;
11. 在每个微孔内加入50uL终止液,孔内溶液颜色会从蓝色变为黄色。如果溶液颜色变为绿色或者颜色变化不一致,请轻拍微孔板,使溶液混合均匀;
12. 加入终止液后30分钟内,使用酶标仪测量450nm的吸光度值,设定540nm或570nm作为校正波长。如果没有使用双波长校正,结果准确度可能会受影响;
13. 计算结果:将每个标准品和样品的校正吸光度值(OD450-OD540/OD570)、复孔读数取平均值,然后减去平均零标准品OD值。使用计算机软件作四参数逻辑(4-PL)曲线拟合创建标准曲线。另一种方法是,可以通过绘制标准品浓度做对数与相应OD值对数生成曲线,并通过回归分析确定最佳拟合线。这个过程可生成一个足够使用但不太精确的数据拟合。若样本经过稀释,计算浓度时应乘以稀释倍数。

Human IL-1β ELISA Kit

注:提供的标准曲线数据仅供参考,应根据同次试验所绘标准曲线计算样本含量。

三、试剂盒参数
1. 回收率:在细胞培养基样本中掺入不同水平的Human IL-1β,测定其回收率。回收率范围在85-107%,平均回收率在97%。
2. 灵敏度:Human IL-1β的最低可测剂量(MDD)一般小于1pg/mL。最低可测值是根据20个标准曲线零点吸光值的平均值加两倍标准差计算得到的相对应浓度。
3. 校正:此ELISA试剂盒经大肠杆菌表达的高纯度重组Human IL-1β蛋白所校正。
4. 线性:5个不同的样本中掺入高浓度的Human IL-1β,然后用稀释剂(1×)将样本稀释到检测范围内,测定其线性。

稀释倍数 平均值/期待值(%) 范围(%)
1:2 102 98-107
1:4 103 101-107
1:8 106 103-110
1:16 107 105-113

5. 特异性:此ELISA法可检测天然及重组Human IL-1β蛋白。将以下因子用稀释剂(1×)配制成 50ng/mL的浓度来检测与Human IL-1β的交叉反应。将50ng/mL的干扰因子掺入中间范围的重组Human IL-1β对照品中,来检测对Human IL-1β的干扰。没有观察到明显的交叉反应或干扰。浓度125pg/mL的重组人IL-1β前体(aa1-269)有3.8%交叉反应性,浓度62.5pg/mL的重组大鼠IL-1β有6.3%交叉反应性。

重组人蛋白 重组小鼠蛋白 重组大鼠蛋白 重组猪蛋白
IL-1α IL-1α IL-1α IL-1α
  IL-1β   IL-1β

四、常见问题解析
1. 白板(显色完成后,无颜色出现)

序号 可能原因 解决方案
1 试剂盒储存不当;不同试剂盒试剂混用 购买新试剂盒,注意储存条件;不可混用
2 赋予温度低,时间短 如果温度偏低,则延长孵育时间喝显色时间
3 错加、漏加试剂 严格按照说明书步骤添加正确试剂
4 用于配置溶液的容器不干净,或水有问题 使用干净容器以及合格的蒸馏水
5 洗板过程中浸泡时间长,洗板次数太多,洗板冲击力大 严格按照说明书操作
6 试剂温度不均一 所有试剂要室温平衡30分钟
7 检测抗体和/或HRP浓度太低 参照说明书,不可随意稀释

2. 花板(空白、阴性阳性对照正常,但标本孔OD值明显偏高)

序号 可能原因 解决方案
1 洗涤次数少,不充分 按照说明书要求洗涤
2 底物3,3′,5,5′-四甲基联苯胺(TMB)被金属离子或氧化剂污染或曝光 配制时使用干净容器以及合格的蒸馏水;避光保存
3 孵育温度高和/或时间过长 控制孵育和最后酶促反应的温度和时间
4 加样时未更换枪头,造成交叉污染 每个样都更换枪头
5 附近孔交叉污染 垂直拍板,使用合适的拍板纸,避免孔内进入纸屑
6 样本存在内源性干扰物质 推测可能的感染物质,并进行对应处理
7 样本溶血、贮存过久、凝集不全、被细菌污染、采血管中添加物影响 避免溶血、污染、过久储存等现象

五、实验流程图

Human IL-1β ELISA Kit
背景说明
白细胞介素-1(IL-1)蛋白家族成员中包括经典的IL-1α和IL-1β。IL-1受体拮抗剂(IL-1RA)、IL-18、IL-33和IL-1F5-F10,IL-1α和IL-1β有相同的细胞表面结合受体,形式相同的生物学功能。健康人未刺激的细胞是不产生IL-1的,只有皮肤角质形成细胞、一些上皮细胞,以及中枢神经系统的某些细胞是例外。但在响应炎症因子、感染、或微生物内毒素时,IL-1在巨噬细胞和其他类型细胞表达急剧增加。IL-1β在免疫和炎症应答、骨重塑、发热、碳水化合物代谢、GH/IGF-1的生理过程中起重要作用。多种疾病与IL-1表达失调或延时表达相关,其中包括败血症、类风湿关节炎、炎性肠道疾病、急性和慢性髓细胞白血病、胰岛素依赖型糖尿病、动脉粥状硬化、神经损伤和老年退化有关的疾病。
IL-1α和IL-1β是结构相关的多肽,在氨基酸水平约有25%的同源性。两者都是先合成为31kDa前体,然后裂解为大约17.5kDa的成熟蛋白。由Caspase-1/ICE对IL-1β的前体切割是炎症反应的关键步骤。尽管IL-1α和IL-1β都不含有一个典型的疏水信号肽,但有证据表明,它们可以经非经典途径分泌到胞外。未处理的IL-1α部分可在细胞膜上展示,并可能保留生物活性。与IL-1β前体不同,IL-1β前体与成熟的IL-1β相比,具有很少或根本不具有生物活性。IL-1β前体与成熟的IL-1β都运至胞外。
IL-1α和IL-1β通过免疫球蛋白超家族受体与IL-1RA结合发挥其效应。80kDa的I型跨膜受体(IL-1RI)在多种细胞中表达,包括T细胞、成纤维细胞、角质形成细胞、内皮细胞、滑膜衬里细胞、软骨细胞和肝细胞。68kDa的II型跨膜受体(IL-1RII)在B细胞、中性粒细胞和骨髓细胞中表达。IL-1RI和IL-1RII的胞外区域享有28%的同源性。但其他区域有显著不同:II型受体的胞内域只有29个氨基酸,而I型受体的胞内域有213个氨基酸。IL-1RII似乎对IL-1信号没有响应,其功能是作为诱骗受体从而削弱IL-1的作用。IL-1受体配体蛋白(IL-1RAcP)与IL-1RI相互作用是IL-1RI信号传导所必需的。IL-1RA是分泌型分子,是IL-1的竞争性抑制剂。可溶性IL-1RI和IL-1RII存在于人的血浆、关节液、及几种细胞株的条件培养基中。此外,牛痘病毒编码类似于可溶性IL-1RII的IL-1结合蛋白。
性能
储存/保存方法
未开封试剂盒,2-8°C储存。
注意事项
1. 请在试剂盒有效期内使用。
2. 不同试剂盒及不同批号试剂盒的组分不能混用。
3. 样本值若大于标准曲线的最高值,应将样本用稀释剂(1×)稀释后重新检测;若细胞培养上清液样本需分布稀释,除最后一步用稀释剂(1×)稀释外,其它中间稀释可采用细胞培养基。
4. 检测结果的不同可由多种因素引起,包括实验人员的操作、移液器的使用方式、洗板技术、反应时间或温度、试剂盒的储存等。
5. 试剂盒中的终止液是酸性溶液,使用时请做好眼镜、手、面部及衣服的防护。
6. 仅供科研使用,不可用于体外诊断。

Human IL-2 ELISA Kit

Human IL-2 ELISA Kit别名检验原理产品组成检测范围使用方法背景说明储存/保存方法注意事项

概述
别名
aldesleukin, IL2, IL-2, IL-2lymphokine, interleukin 2, interleukin-2, involved in regulation of T-cell clonal expansion, T cell growth factor, T-cell growth factor, TCGF,人白介素2Elisa试剂盒
检验原理
本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测技术。特异性抗人IL-2抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入标准品、待测样本和生物素化的检测抗体,经过孵育,样本中存在的IL-2与固相抗体和检测抗体结合,形成免疫复合物。洗涤去除未结合的物质后,加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(Streptavidin-HRP)。洗涤后,加入显色底物,避光显色。加入终止液终止反应,在450nm波长(参考校正波长540nm或570nm)测定吸光度值。
产品组成
请在试剂盒有效期内使用(新老产品随机发货)

组成 规格 拆封后,稀释或重溶的试剂有效期
Human IL-2 Microplate 1块 将未使用的板条放回带有干燥剂的铝箔袋中密封后,可在2-8℃储存30天
Human IL-2标准品 2支 溶解后,计算用量分装,可在-20°C储存14天
Human IL-2检测抗体 1支 浓缩体积溶解后,可在2-8°C储存14天
40×SA-HRP 1支 40×浓度可在2-8°C储存;1×工作浓度不建议保存
10×浓缩稀释用缓冲液 1瓶 开封后,可在2-8°C储存30天
显色液 1瓶
终止液 1瓶
20×浓缩洗涤缓冲液 1瓶
封板膜 3张 常温储存,为避免污染,不可重复使用
检测范围
15.6pg/mL-1000pg/mL
使用方法
需自备试验器材
1. 酶标仪(可测量450nm检测波长的吸收值及540nm或570nm校正波长的吸收值)
2. 高精度加液器及一次性吸头
3. 蒸馏水或去离子水
4. 洗瓶(喷瓶)、多通道洗板器或自动洗板机
5. 500mL量筒

一、实验前准备
1. 样品收集及储存
①细胞培养上清:颗粒物应通过离心去除;立刻检测样本。样本收集后若不及时检测,建议按一次使用量分装,冻存于-20℃冰箱内,避免反复冻融。样本可能需要用稀释剂(1×)稀释。
②血清:使用血清分离管(SST)收集样本,样品室温放置30分钟。离心15分钟,转速为1000g。立即取出血清,并立即检测。样本收集后若不及时检测,建议按一次使用量分装,冻存于≤-20℃冰箱内,避免反复冻融。样本可能需要用稀释剂(1×)稀释。
③血浆:使用EDTA、肝素或柠檬酸作为抗凝血剂收集血浆,在收集后30分钟内离心15分钟,转速为1000g,并立即检测。样本收集后若不及时检测,建议按一次使用量分装,冻存于≤-20℃冰箱内,避免反复冻融。样本可能需要用稀释剂(1×)稀释。
2. 试剂配制(使用前请将所有试剂和样本放置于室温,静置 15 分钟。建议所有的实验样本和标准品做复孔检测
①1×洗涤液配制:试剂盒中的浓缩洗涤液为20×母液,使用前需使用蒸馏水稀释为1×工作液。例:取10mL浓缩洗涤液+190mL蒸馏水定容至200mL,实际操作时可先计算使用量,再进行配制。
②1×稀释用缓冲液配制:试剂盒中的浓缩稀释用缓冲液为10×母液,使用前需使用蒸馏水稀释至1×工作液。例:取3mL浓缩稀释用缓冲液+27mL蒸馏水定容至30mL。实际操作时可先依据样本稀释倍数,计算所需的稀释用缓冲液用量,再进行配制。
③检测抗体:将干粉离心至管底,使用110uL稀释用缓冲液(1×)溶解,室温静置5分钟后得到100×母液;使用前需稀释为1×工作液。按照每孔用量100uL计算所需体积。例:使用了10个孔,则取10uL的100倍工作浓度的检测抗体,使用稀释用缓冲液(1×)定容至1mL,得到1mL的1×工作浓度的检测抗体。
④SA-HRP:SA-HRP为40×母液,使用前需使用稀释缓冲液(1×)稀释配制成1×工作液,每孔所需量为100uL。例:使用了10个孔,则取25uL的40×母液+975uL稀释用缓冲液(1×)定容至1mL,得到1mL的1×工作浓度的检测抗体。
⑤显色剂:按每孔100uL,计算当次试验所需要用量,取出相应体积的显色剂,避光;取出的显色剂仅供当日使用。
⑥标准品:冻干标准品用稀释用缓冲液(1×)重溶,重溶体积1000uL,得到浓度为1000pg/mL标准品母液。轻轻震摇至少5分钟,其充分溶解。每个稀释管中加入300uL稀释用缓冲液(1×)。将标准品母液参照下图做系列稀释,每管须充分混匀后再移液到下一管。没有稀释的标准品母液可用作标准曲线最高点(1000pg/mL),稀释用缓冲液(1×)可用作标准曲线零点(0pg/mL)。

Human IL-2 ELISA Kit

二、操作步骤
1. 准备好所有需要的试剂和标准品;
2. 从已平衡至室温的密封袋中取出微孔板,未用的板条请放回铝箔袋内,重新封口;
3. 向微孔板中加入300uL洗涤液,静置浸泡30秒,弃掉洗液在吸水纸上将微孔板拍干,请立即使用不要让微孔板干燥;
4. 分别将不同浓度标准品,实验样本或者质控品加入相应孔中,每孔100uL。用封板胶纸封住反应孔,室温孵育2小时;
5. 将板内液体吸去,使用洗瓶、多通道洗板器或自动洗板机洗板。每孔加洗涤液300uL,然后将板内洗涤液吸去。重复操作3次。每次洗板尽量吸去残留液体会有助于得到好的实验结果。最后一次洗板结束,请将板内所有液体吸干或将板倒置,在吸水纸拍干所有残留液体;
6. 在每个微孔内加入100uL检测抗体。用封板胶纸封住反应孔,室温孵育2小时;
7. 重复第5步洗板操作;
8. 在每个微孔内加入100uLSA-HRP,室温孵育20分钟。注意避光;
9. 重复第5步洗板操作;
10. 在每个微孔内加入100uL显色液,室温孵育5-30分钟,注意避光;
11. 在每个微孔内加入50uL终止液,孔内溶液颜色会从蓝色变为黄色。如果溶液颜色变为绿色或者颜色变化不一致,请轻拍微孔板,使溶液混合均匀;
12. 加入终止液后30分钟内,使用酶标仪测量450nm的吸光度值,设定540nm或570nm作为校正波长。如果没有使用双波长校正,结果准确度可能会受影响;
13. 计算结果:将每个标准品和样品的校正吸光度值(OD450-OD540/OD570)、复孔读数取平均值,然后减去平均零标准品OD值。使用计算机软件作四参数逻辑(4-PL)曲线拟合创建标准曲线。另一种方法是,可以通过绘制标准品浓度做对数与相应OD值对数生成曲线,并通过回归分析确定最佳拟合线。这个过程可生成一个足够使用但不太精确的数据拟合。若样本经过稀释,计算浓度时应乘以稀释倍数。

Human IL-2 ELISA Kit

注:提供的标准曲线数据仅供参考,应根据同次试验所绘标准曲线计算样本含量。

三、试剂盒参数
1. 回收率:在细胞培养基样本中掺入不同水平的人IL-2,测定其回收率。回收率范围在102-104%,平均回收率在103%。
2. 灵敏度:人IL-2的最低可测剂量(MDD)一般小于3.24pg/mL。最低可测值是根据20个标准曲线零点吸光值的平均值加两倍标准差计算得到的相对应浓度。
3. 校正:此ELISA试剂盒经大肠杆菌表达的高纯度重组人IL-2蛋白所校正。
4. 线性:4个不同的样本中掺入高浓度的人IL-2,然后用稀释剂(1×)将样本稀释到检测范围内,测定其线性。

稀释倍数 回收率(%)
1:1 106
1:2 98
1:4 121
1:8 83

5. 特异性:此ELISA法可检测天然及重组人IL-2蛋白。将以下因子用稀释剂(1×)配制成 50ng/mL的浓度来检测与人IL-2的交叉反应。将50ng/mL的干扰因子掺入中间范围的重组人IL-2对照品中,来检测对人IL-2的干扰。没有观察到明显的交叉反应或干扰。

重组人蛋白 重组小鼠蛋白
IL-2sRα IL-2
IL-2Rβ IL-4
IL-2Rγ  
IL-4  

四、常见问题解析
1. 白板(显色完成后,无颜色出现)

序号 可能原因 解决方案
1 试剂盒储存不当;不同试剂盒试剂混用 购买新试剂盒,注意储存条件;不可混用
2 赋予温度低,时间短 如果温度偏低,则延长孵育时间喝显色时间
3 错加、漏加试剂 严格按照说明书步骤添加正确试剂
4 用于配置溶液的容器不干净,或水有问题 使用干净容器以及合格的蒸馏水
5 洗板过程中浸泡时间长,洗板次数太多,洗板冲击力大 严格按照说明书操作
6 试剂温度不均一 所有试剂要室温平衡30分钟
7 检测抗体和/或HRP浓度太低 参照说明书,不可随意稀释

2. 花板(空白、阴性阳性对照正常,但标本孔OD值明显偏高)

序号 可能原因 解决方案
1 洗涤次数少,不充分 按照说明书要求洗涤
2 底物3,3′,5,5′-四甲基联苯胺(TMB)被金属离子或氧化剂污染或曝光 配制时使用干净容器以及合格的蒸馏水;避光保存
3 孵育温度高和/或时间过长 控制孵育和最后酶促反应的温度和时间
4 加样时未更换枪头,造成交叉污染 每个样都更换枪头
5 附近孔交叉污染 垂直拍板,使用合适的拍板纸,避免孔内进入纸屑
6 样本存在内源性干扰物质 推测可能的感染物质,并进行对应处理
7 样本溶血、贮存过久、凝集不全、被细菌污染、采血管中添加物影响 避免溶血、污染、过久储存等现象

五、实验流程图

Human IL-2 ELISA Kit
背景说明
人白细胞介素2(IL-2),又称为T细胞生长因子(TCGF),是一个分子量为15-18kDa的具有不同糖基化的α螺旋多肽,属于常见的γ链(γc)细胞因子家族成员。它以单体存在,半衰期很短(<30min)。人IL-2的前体有153个氨基酸,其中包含一个20个氨基酸的信号序列,和一个133个氨基酸的成熟多肽。IL-2成熟蛋白包含一个在3位苏氨酸可O型糖基化的位点和三个半胱氨酸,其中的两个半胱氨酸所形成的链内二硫键是IL-2活性所必不可少的。成熟的人IL-2氨基酸序列与犬、大鼠、猫和猕猴的IL-2同源性分别为73%、66%、78%和97%。虽然人IL-2与高度多态的小鼠IL-2仅有60%的氨基酸同源性,但人IL-2对小鼠细胞也具有生物活性。据报道分泌IL-2的细胞包括γδT细胞、活化的常规CD4+和CD8+T细胞、神经元、小胶质细胞、造血干细胞。
IL-2受体(IL-2R)由三个亚基构成,即一个55kDa的CD25/IL-2Rα链、一个70kDa的CD122/IL-2Rβ链,以及一个65kDa的CD132/γc链。IL-2先与CD25结合,形成的二亚基复合物再招募CD122和CD132,形成具有四个亚基的信号复合物。除了能与IL-2形成复合物,CD122/IL-2Rβ也可同IL-15形成四亚基信号复合物。CD132/ɣc亦可成为IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21信号的受体。
体外研究表明,IL-2在T细胞活化和扩增中起重要作用。在体内,IL-2是调节性T细胞(Treg)发育、维持和功能的关键,而调节性T细胞可为自身免疫性疾病提供保护。此外,IL-2也可通过调节T细胞贩运基因的表达和Th2型细胞因子的产生,从而促进其靶器官自身免疫性炎症。在CD8+T细胞亚群中,IL-2是获得最佳一级反应和分化到终端效应细胞的必要关键。IL-2也促进了CD8+T细胞的发育和激活成为记忆细胞。
性能
储存/保存方法
未开封试剂盒,2-8℃储存。
注意事项
1. 请在试剂盒有效期内使用。
2. 不同试剂盒及不同批号试剂盒的组分不能混用。
3. 样本值若大于标准曲线的最高值,应将样本用稀释剂(1×)稀释后重新检测;若细胞培养上清液样本需分布稀释,除最后一步用稀释剂稀释外,其它中间稀释可采用细胞培养基。
4. 检测结果的不同可由多种因素引起,包括实验人员的操作、移液器的使用方式、洗板技术、反应时间或温度、试剂盒的储存等。
5. 试剂盒中的终止液是酸性溶液,使用时请做好眼镜、手、面部及衣服的防护。
6. 仅供科研使用,不可用于体外诊断。

Human IL-2 ELISA Kit(Plus)

Human IL-2 ELISA Kit(Plus)

检测原理:

本试剂盒采用双抗体夹心 ELISA 技术。特异性 ant- Human IL-2 capture antibody 预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中依次加入标准品、待测样本和生物素标记的检测抗体, 充分振荡混匀后置于室温下进行为时 2 小时的孵育过程,样本中存在的  IL-2  与固相抗体和检测抗体结合。充分洗涤以除去游离及未结合的成分后,加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(Streptavidin-HRP,SA-HRP)。再次洗涤后,加入 TMB   显色底物,于室温下避光孵育以显色。颜色反应的深浅与样本中 IL-2   的浓度成正相关。加入终止液终止反应,使用酶标仪于 450 nm 检测波长(校正波长 570-630 nm)条件下测定吸光度值。

检测类型:双抗夹心法

 

形式:预包被96孔板

 

检测样本类型:细胞上清液,血清,血浆

 

上样量:100 μl

 

试剂盒组分:预包被96孔板、标准品、IL-2检测抗体、标准品稀释液、检测缓冲液、TMB显色底物、洗涤液、终止液、SA-HRP、封板膜和说明书一份。

 

灵敏度:0.36 pg/mL

 

检测范围: 7.18-500pg/ml

 

回收率范围: 86-97%

 

保存方法:2-8℃

 

标准曲线图:

 Human IL-2 ELISA Kit(Plus)

 

背景:

白细胞介素2 (IL-2)是 15 kDa 的糖蛋白,在人类中,由位于4 号染色体 q26 – 28 区域的单基因编码。它是免疫系统中的一类信号分子,调控对具有免疫功能的白血球 (白细胞,通常是淋巴细胞)的活性。IL-2 是机体对微生物感染的天然应答,区别外来和自身抗原。IL-2 通过与 IL-2 受体来发挥功能,其受体由3 条链组成,分别为α 链 (CD25)、β 链 (CD122)和γ 链 (CD132)。

监测血清中的 IL-2 含量为多种病理状态提供更详细的视角,包括癌症、传染病、移植排斥、多发性硬化症、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮和 I 型糖尿病等。

 

Human IL-8/CXCL8 ELISA Kit

Human IL-8/CXCL8 ELISA Kit

检测原理:

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测技术。特异性抗人IL-8抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入标准品、待测样本和生物素化的检测抗体,经过孵育,样本中存在的IL-8与固相抗体和检测抗体结合,形成免疫复合物。洗涤去除未结合的物质后,加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(Streptavidin-HRP)。洗涤后,加入显色底物,避光显色。加入终止液终止反应,在450 nm波长(参考校正波长540nm570nm)测定吸光度值。

检测类型:双抗夹心法

形式:预包被96孔板

检测样本类型:细胞上清液,血清,血浆

上样量:100ul

试剂盒组分:

预包被96孔板、标准品、IL-8检测抗体、稀释用缓冲液、显色液(AB)、洗涤液、终止液、SA-HRP、封板膜和说明书一份。

灵敏度:7.8pg/mL

检测范围:31.2 – 2,000 pg/mL

回收率范围:96-118%

保存方法:2-8

标准曲线图

 Human IL-8/CXCL8 ELISA Kit

背景:

白细胞介素-8IL-8,也称GCP-1NAP-1CXCL8)是属于α型或CXC家族的8-9kDa的趋化因子,可与肝素结合。目前为止,共发现了15种人的CXC家族蛋白,大小在8-12kDa之间。绝大多数位于人类4号染色体,都具有典型的三β折叠层/一个α螺旋结构,多数在N端显示Glu-Leu-Arg三肽基序。人IL-8先合成为一个99氨基酸前体,其中包含一个20氨基酸的信号序列,和一个79个氨基酸的成熟区域。它可作为单体、同源二聚体、及与CXCL4/PF4形成的异源二聚体在体内循环。IL-8单体被认为是最具有生物活性的,而异源二聚体可能会增强PF4的活性。在氨基酸水平,成熟的人IL-8与猪和犬分别有65%70%的同源性。在啮齿动物中,IL-8的相应基因尚未发现。通过选择性剪接和差别蛋白水解产生了多种IL-8亚型。选择性剪接发生在C-端,那里有一个11个氨基酸替代(位置在aa#92-99)。蛋白酶水解作用可能是一个细胞的特定事件,它在IL-8N-端产生截断。例如,成纤维细胞和血管内皮细胞将第21和第22氨基酸切断,形成IL-8,而单体细胞和淋巴细胞在第21-25氨基酸切割,产生IL-8。这些短式IL-8一般来说具有更高的生物活性,尤其是针对CXCR 1IL-8受体的活性增高。大约15%IL-8在前体Arg27位发生了瓜氨酸化,这可提高IL-8的半衰期和促使白血球增多。很多类型的细胞都分泌IL-8,其中包括单核细胞和中性粒细胞、成纤维细胞和角质形成细胞、肥大细胞、内脏平滑肌细胞、树突状细胞、II型大肺泡细胞和内皮细胞。

IL-8受体有两个,都属于G蛋白耦联受体蛋白:CXCR1/IL-8RACXCR2/IL-8RB,二者之间的氨基酸序列享有77%同源性。CXCR1分子量为45-50kDa,几乎完全由IL-8独享;CXCR2分子量为35-40kDa,由所有的CXC趋化因子所共有。CXCR1CXCR2分别形成组成型同源二聚体,这似乎是它们的功能性构型。当同一个细胞表达时,异源二聚体也会形成;但当它与IL-8结合后便会被解体。CXCR2对低浓度IL-8有响应,且主要与趋化和MMP-9释放有关。与此相反,CXCR1对高浓度IL-8有响应,并与呼吸爆发及磷脂酶D2的激活有关。因此,在中性粒细胞CXCR2被认为可引导中性粒细胞迁移到炎症部位,然后引发CXCR1介导的抗菌活性。

IL-8最著名的功能是它在免疫细胞中的促炎作用。从本质上讲,IL-8是由暴露于炎性刺激因子的多种细胞类型分泌。对于单核细胞/巨噬细胞来说,微生物的暴露引起IL-8的释放;随后,CXCR2介导的趋化作用将中性粒细胞迁移到抗原攻击的部位,并伴随下一步抗菌活性的激活及启动。IL-8可增强骨髓M-CSF的作用,从而引起粒细胞的成熟和释放。IL-8的这两个功能相辅相成。有报道说,IL-8对肿瘤相关的内皮细胞具有血管生成功能。此时,肿瘤源性的IL-8可以采取一种旁分泌方式激活血管内皮细胞的CXCR1CXCR2CXCR1CXCR2都与PI3-K/AktRasGTP信号通路相关,参与细胞的存活和增殖。此外,IL-8正调节VEGFR2EGFR属于介导细胞生长和迁移的受体络氨酸激酶。

APC Mouse anti-Human CD45 Antibody(9.4)

APC Mouse anti-Human CD45 Antibody(9.4)描述宿主反应种属应用形式浓度类型克隆号同种型储存/保存方法存储溶液标记

概述
描述
对照抗体推荐:#JP20156
宿主
Mouse
反应种属
Human
应用
Flow cytometry
性能
形式
liquid
浓度
10 ul/T
类型
Monoclonal Antibody
克隆号
9.4
同种型
Mouse IgG2a
储存/保存方法
Store at 4°C. Do not freeze. Light sensitive material.
存储溶液
Phosphate-buffered solution, pH 7.4, containing 0.09% sodium azide and 0.2% (w/v) BSA
标记
APC

FITC Mouse anti-Human CD45 Antibody(9.4)

FITC Mouse anti-Human CD45 Antibody(9.4)描述宿主反应种属应用形式浓度类型克隆号同种型储存/保存方法存储溶液标记

概述
描述
对照抗体推荐:#JP20150
宿主
Mouse
反应种属
Human
应用
Flow cytometry
性能
形式
liquid
浓度
10 ul/T
类型
Monoclonal Antibody
克隆号
9.4
同种型
Mouse IgG2a
储存/保存方法
Store at 4°C. Do not freeze. Light sensitive material.
存储溶液
Phosphate-buffered solution, pH 7.4, containing 0.09% sodium azide and 0.2% (w/v) BSA
标记
FITC

GLP-1 (9-36) amide (human, bovine, guinea pig, mouse, porcine, rat)

GLP-1 (9-36) amide (human, bovine, guinea pig, mouse, porcine, rat)CAS号: 161748-29-4分子式: C140H214N36O43分子量: 3089.5描述来源序列纯度储存/保存方法别名外观

产品描述
描述
GLP-1 (9-36) is the result of the rapid degradation of GLP-1 (7-36)amide, by the enzyme dipeptidyl peptidase IV (DPP-4), which is widely expressed in a number of sites, including the endothelial cells of small gut arterioles. GLP-1 (9-36) accounts for the majority of GLP-1 that reaches the system circulation. Whereas GLP-1 (7-36) amide stimulates glucose-dependent insulin secretion and inhibits glucagon secretion, GLP-1(9-36)amide administration had no effect on glucose clearance or insulin secretion in humans. GLP-1(9-36)amide however was shown to exert cardioprotective actions in rodent hearts.
来源
synthesis
序列
H-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-NH2
纯度
≥ 95%
储存/保存方法
-20°C,有效期2年。
基本信息
别名
EGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR – NH2
外观
White to off-white powder

分子结构图

GLP-1 (9-36) amide (human, bovine, guinea pig, mouse, porcine, rat)

Human MMP-9 ELISA Kit

Human MMP-9 ELISA Kit

检测原理:

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测技术。特异性抗人MMP-9抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入标准品、待测样本和生物素化的检测抗体,经过孵育,样本中存在的MMP-9与固相抗体和检测抗体结合,形成免疫复合物。洗涤去除未结合的物质后,加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(Streptavidin-HRP)。洗涤后,加入显色底物,避光显色。加入终止液终止反应,在450 nm波长(参考校正波长540nm570nm)测定吸光度值。

检测类型:双抗夹心法

形式:预包被96孔板

检测样本类型:细胞上清液,血清,血浆

上样量:100ul

试剂盒组分:

预包被96孔板、标准品、MMP-9检测抗体、稀释用缓冲液、显色液(AB)、洗涤液、终止液、SA-HRP、封板膜和说明书一份。

灵敏度:0.156ng/mL

检测范围:31.2 – 2,000 pg/mL

回收率范围:85-104%

保存方法:2-8

标准曲线图

 Human MMP-9 ELISA Kit

背景:

基质金属蛋白酶(MMPs)也被称为matrixins,是锌钙依赖性蛋白水解酶家族成员,可分解细胞外基质(ECM),在不同的亚细胞环境中,参与多种分子的加工过程。MMPs在众多生理学进程中发挥重要功能,例如胚胎发育、形态发生、繁殖以及组织重构。也参与炎症以及自身免疫疾病,例如关节炎、癌症和心血管疾病。新合成的MMPs的量主要在转录水平被调节,已经存在的MMPs的蛋白水解活性,不仅受控于酶原的活性,也受控于内源性抑制剂对酶活性的抑制,例如α2-巨球蛋白,以及金属蛋白酶组织抑制剂(TIMPs)。

MMP-9(也称明胶酶B92kDa IV型胶原酶、92kDa明胶酶、V型胶原酶)作为糖基化酶原被分泌出来。酶原的活化涉及到N-末端前体区域的蛋白水解去除,最终形成82kDa的活性酶。活性人MMP-9与小鼠和大鼠的MMP-9分别有72%74%的氨基酸序列同源性。除了锌结合位点,催化结构域还包含三个连续的纤连蛋白II型同源单位,可结合明胶。富含脯氨酸的铰链区将催化结构域连接到C-末端血红素样结构域。在体外实验中,酶原经4-氨基苯基乙酸乙酯(APMA)处理后,不仅能产生活性酶,还能产生活性与其相当的C-末端截短形式。MMP-9可降解ECM中的成分,尤其对变性胶原(明胶)有非常高的特异性。MMP-9也可裂解IIIIVVXI型胶原,以及弹性蛋白、巢蛋白-1 和玻连蛋白。MMP-9还可裂解多种趋化因子和生长因子(例如IL-1βCXCL8/IL-8CXCL7CXCL4CXCL1Latent TGF-β、膜结合TNF-αVEGFFGF basic),β-淀粉样蛋白、P物质、髓鞘碱性蛋白。此动作可提高或降低这些可溶性因子的生物活性,也可使它们从与ECM的联合中被释放出来。MMP-9也可通过各种各样的膜蛋白触发信号通路,或是诱导它们从细胞膜上脱落从而抑制信号通路(例如CD44E-钙黏蛋白、整合素、ICAM-1IL-2 Rα)。

MMP-9由多种正常细胞和转化细胞产生,包括中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、星形胶质细胞、纤维原细胞、破骨细胞、软骨细胞、角化细胞、内皮细胞和上皮细胞。它影响生理性和病理性的血管生成和血管重构。活化的中性粒细胞释放MMP-9前体,不结合TIMP-1,允许促血管生成的FGF-2ECM中释放出来。MMP-9TIMP-1的复合物不能诱导FGF-2的释放。中性粒细胞来源的MMP-9可加剧炎症反应,通过产生来自胶原多肽来诱导额外的中性粒细胞MMP-9的释放。MMP-9在骨形成和重构、甲基苯丙胺诱导行为敏化与应答、神经元突触重构的调控、着床过程中的滋养层入侵、丝氨酸蛋白酶抑制剂α1的活化中也发挥重要作用。MMP-9介导的粘附分子的脱落对于肿瘤细胞的侵袭也有直接作用。

MMP-9的循环水平在许多炎症失调疾病中有所升高,包括管腔内血栓的形成、动脉粥样硬化、克罗恩氏病、丙型肝炎病毒感染、结肠直肠癌以及杜氏肌营养不良。MMP-9TIMP-1的比例在多发性硬化症血清和囊性纤维化痰中升高,但在巨细胞病毒感染的血清中降低。游离MMP-9的水平、MMP-9与脂质运载蛋白-2/NGAL复合物的水平分别在卵巢癌患者、子宫尿道感染患者的尿液中升高。

PE Mouse anti-Human CD45 Antibody(9.4)

PE Mouse anti-Human CD45 Antibody(9.4)描述宿主反应种属应用形式浓度类型克隆号同种型储存/保存方法存储溶液标记

概述
描述
对照抗体推荐:#JP20153
宿主
Mouse
反应种属
Human
应用
Flow cytometry
性能
形式
liquid
浓度
10 ul/T
类型
Monoclonal Antibody
克隆号
9.4
同种型
Mouse IgG2a
储存/保存方法
Store at 4°C. Do not freeze. Light sensitive material.
存储溶液
Phosphate-buffered solution, pH 7.4, containing 0.09% sodium azide and 0.2% (w/v) BSA
标记
PE

Human IL-10 ELISA Kit

Human IL-10 ELISA Kit

检测原理:

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测技术。特异性抗人IL-10抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入标准品、待测样本和生物素化的检测抗体,经过孵育,样本中存在的IL-10与固相抗体和检测抗体结合,形成免疫复合物。洗涤去除未结合的物质后,加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(Streptavidin-HRP)。洗涤后,加入显色底物,避光显色。加入终止液终止反应,在450 nm波长(参考校正波长540nm570nm)测定吸光度值。

检测类型:双抗夹心法

形式:预包被96孔板

检测样本类型:细胞上清液,血清,血浆

上样量:100ul

试剂盒组分:

预包被96孔板、标准品、IL-10检测抗体、稀释用缓冲液、显色液(AB)、洗涤液、终止液、SA-HRP、封板膜和说明书一份。

灵敏度:3.9pg/mL

检测范围:31.2 – 2,000 pg/mL

回收率范围:88-110%

保存方法:2-8

标准曲线图

Human IL-10 ELISA Kit

背景:

人白细胞介素10IL-10),又称为细胞生长因子合成抑制因子(CSIF),是IL-10α螺旋家族的成员,该家族还包括IL-19IL-20IL-22IL-24IL-26/ak155IL-10可由多种活化的造血细胞、肝星状细胞、角质形成细胞和胎盘滋养叶细胞分泌。人类IL-10对小鼠细胞有活性,而小鼠IL-10不能作用于人的细胞。成熟的人IL-10与马IL-1086%的氨基酸序列同源性,与牛、犬、猫、豚鼠、小鼠、绵羊、猪和大鼠IL-10的同源性在72-80%之间。它包含两个链内二硫键,以非共价结合的同源二聚体形式表达,分子量36kDa

IL-10通过由II型细胞因子IL-10受体亚基αβ异源二聚体复合物介导其生物活性。IL-10受体α亚基是一个110kDa的跨膜糖蛋白,主要表达于淋巴细胞、NK细胞、巨噬细胞、单核细胞、星形胶质细胞、肠上皮细胞、滋养层细胞和活化的肝星状细胞,而75kDa的跨膜受体β则广泛表达。IL-10二聚体结合两个IL-10 Rα链,激发两个IL-10 Rβ链的加入。IL-10 Rβ不直接结合IL-10,但为信号转导所需要。IL-10 Rβ还与IL-20 RαIL-22 Rα1IL-28 Rα形成IL-22IL-26IL-28IL-29的受体复合物。

IL-10参与的免疫调节包括抑制作用和刺激作用。它通过抑制Th1细胞和Th17细胞的扩增和活化,促进M2型巨噬细胞发挥抗炎作用。免疫调节T细胞(Treg)和调节性B 细胞对IL-10表达的调节对Treg增殖有重要意义。然而,在肿瘤环境中,IL-10抑制Treg及髓源性抑制细胞的增殖。IL-10诱导CD8 T细胞在肿瘤中的积累和活化。IL-10通过限制关节炎的组织损伤,促进肌肉损伤后再生发挥保护作用,但它可能导致病毒感染的持久性。IL-10水平在干燥综合征(唾液)、原发性中枢神经系统淋巴瘤(脑脊液)、卵巢癌(血清和腹水)中升高。其水平在心脏病复发或子娴前期患者血清和男性不育患者精液中降低。

IL-1α和IL-1β是结构相关的多肽,在氨基酸水平约有25%的同源性。两者都是先合成为31kDa前体,然后裂解为大约17.5kDa的成熟蛋白。由Caspase-1/ICEIL-1β的前体切割是炎症反应的关键步骤。尽管IL-1α和IL-1β都不含有一个典型的疏水信号肽,但有证据表明,它们可以经非经典途径分泌到胞外。未处理的IL-1α部分可在细胞膜上展示,并可能保留生物活性。与IL-1β前体不同,IL-1β前体与成熟的IL-1β相比,具有很少或根本不具有生物活性。IL-1β前体与成熟的IL-1β都运至胞外。

IL-1α和IL-1β通过免疫球蛋白超家族受体与IL-1RA结合发挥其效应。80kDaI型跨膜受体(IL-1RI)在多种细胞中表达,包括T细胞、成纤维细胞、角质形成细胞、内皮细胞、滑膜衬里细胞、软骨细胞和肝细胞。68kDaII型跨膜受体(IL-1RII)在B细胞、中性粒细胞和骨髓细胞中表达。IL-1RIIL-1RII的胞外区域享有28%的同源性。但其他区域有显著不同:II型受体的胞内域只有29个氨基酸,而I型受体的胞内域有213个氨基酸。IL-1RII似乎对IL-1信号没有响应,其功能是作为诱骗受体从而削弱IL-1的作用。IL-1受体配体蛋白(IL-1RAcP)与IL-1RI相互作用是IL-1RI信号传导所必需的。IL-1RA是分泌型分子,是IL-1的竞争性抑制剂。可溶性IL-1RIIL-1RII存在于人的血浆、关节液、及几种细胞株的条件培养基中。此外,牛痘病毒编码类似于可溶性IL-1RIIIL-1结合蛋白。