GenomONE® E仙台病毒包膜细胞融合试剂细胞培养用试剂-Wako富士胶片和光

GenomONE® EX仙台病毒包膜细胞融合试剂
GenomONE®-CF EX含有仙台病毒包膜和缓冲液，可促使细胞融合。适用于贴壁或者悬浮状态的任何细胞。
仅仅需要30分钟就可完成融合细胞及制造混合动力的操作。

GenomONE^® EX仙台病毒包膜细胞融合试剂

 

　　GenomONE^®–CF EX含有仙台病毒包膜和缓冲液，可促使细胞融合。适用于贴壁或者悬浮状态的任何细胞。仅仅需要30分钟就可完成融合细胞及制造混合动力的操作。

 

◆用途

●肿瘤疫苗·癌症免疫研究

●癌细胞和树突细胞融合等

●再生医疗·细胞治疗研究

●脏器来源细胞和干细胞融合等

●单克隆抗体的制备

●抗原B细胞和髓过氧化物酶细胞融合

●分生·分化·育种研究

●对脱核未受精卵的核移植（核置换）

●其他

●PEG&电融合的使用介绍

 

◆HVJ Envelope（HVJ-E）：

 

　　HVJ包膜是*灭活和纯化仙台病毒（HVJ*），即只留下细胞膜融合能力的衣壳蛋白包膜。仙台病毒的HN蛋白可与细胞膜外的唾液酸受体结合，通过F蛋白的作用，引起细胞膜融合。在HVJ-E中，仙台病毒的基因组RNA已经*失活，在人类和实验动物体内不存在感染或增殖。因而不需要特殊的操作和设备，它可以安全地在普通的实验室使用。

*HVJ：日本仙台病毒

 

◆HVJ-E细胞融合原理

在低温（0 – 8℃)条件下，每一个细胞与数百个以上的HVJ – E接触，HVJ – E与细胞膜上的唾液酸受体结合，通过细胞表面吸附（步骤1），细胞通过HVJ-E相互连接（步骤2），形成细胞彼此聚集的状态。当该细胞/ HVJ-E的复合物加热到37℃时，细胞膜干扰就会进一步扩大，细胞膜内膜结构也暂时改变。这种变化是短暂的，随后会立即返回到正常结构，但是在这个期间，细胞膜利用强疏水性结合力进行相互融合（步骤3）。

 

步骤一	步骤二	步骤三

 

◆应用方法

 

悬浮法	电镀法

 

◆悬浮细胞融合案例

 

同种细胞融合

异种细胞融合

 

　　荧光标记的红（* 1）细胞和绿色荧光标记（* 2）细胞（每1.0×10⁵个）在融合缓冲液50 μL混合后，加入HVJ-E冰敷5分钟，随后37℃下反应15分钟后，融合细胞（黄色）进行了观察。

 

◆黏着态和悬浮态细胞融合案例

 

在粘合状态BHK-21（红）和在浮动状态（绿色）的P19细胞的融合

胶粘状态的HeLa S3（红）在浮动状态（绿色）的P19细胞的融合

 

　　荧光标记的（* 1）中的红，附着的细胞在12孔平板，绿色荧光标记（* 2）中，添加预先准备的HVJ-E，来处理漂浮细胞1×10⁵个的悬浮液（融合缓冲污染），并在室温下离心（1000转），每个板5分钟。随后孵育37℃15分钟后，更换增殖用的培养基继续细胞培养。观察3个小时后的融合细胞（黄色）。

 

◆和PEG法的比较

 

　　红色荧光标志(* 1）的ratMSC（骨髓由来老鼠间叶系细胞）和绿色荧光标识的老鼠原代培养心肌细胞2×10⁵个融合缓冲液50　μL中混合后，添加HVJ – E，冰浴5分钟，然后37℃孵育反应15分钟，观察融合细胞（黄色）。1 – 2日培养后，观察到粘着的融合细胞。在PEG法中融合紧接之后细胞毒性强烈，融合细胞的数量很少。

 

◆安全性说明

HVJ-E失活的确认（确认无感染性病毒的存在）

 

1.	细胞增值实验（荧光灶单元（FFU）法） 处理LLC-MK2细胞，一到两天后，病毒生长性的HVJ融合蛋白F抗体通过荧光抗体法测定，已证实未检测到病毒蛋白。<制造阶段实验>
2.	受精卵生长试验（血凝单位测定） 处理受精卵，3天后的病毒增殖，包括在HVJ表面的HN蛋白的红血细胞聚合活性（HAU）测量作为指标，已经证实，没有看到病毒的生长。<制造阶段实验>
3.	小鼠感染性研究 鼻腔给药小鼠和未处理小鼠（SIX周）在相同笼中饲养，通过测定血清中的抗HVJ抗体滴度进行了个体之间感染性的检测。其结果是，在非给药的情况下未观察到抗体滴度增加，表明未感染HVJ-E。
4.	动物个体的遗传基因导入实验 小鼠、大鼠等实验动物的各种药物实验（肺、气管、肝和静脉等）。已证实*没有病毒感染或是可疑的事例。

 

产品编号	产品名称	产品规格
388-18721	GenomONE® -CF 细胞融合试剂套装（1支套装）	1 set
384-18723	GenomONE® -CF 细胞融合试剂套装（4支套装）	4 sets
382-18724	GenomONE® -CF 细胞融合试剂套装（16支套装）	16 sets

GenomONE^® EX仙台病毒包膜细胞融合试剂