91154-91154 CAR-T细胞培养基-T淋巴细胞培养基

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91154 CAR-T细胞培养基是BalanCD HEK293系统的理想补充。经过加州和东京培养基研发团队的集体努力，2016年，Irvine Scientific上市了zui新一代BalanCD HEK293培养基，一种化学限定的、无动物源的培养基，用于生产基因治疗和免疫治疗所需的病毒载体，以及瞬时转染表达所需的蛋白。所有产品都使用严格的原材料控制体系并在cGMP条件下生产，以确保一致性和可靠性

近年来，肿瘤免疫治疗技术突飞猛进，以嵌合抗原受体修饰T细胞（CAR-T）为代表的基因修饰细胞产品陆续进入临床。细胞治疗类产品获得的突破性进展和国外CAR-T细胞治疗产品的批准上市，为晚期肿瘤患者的治疗带来新希望。国内多家CAR-T获得临床试验批件，为了保证临床应用的正常，安全，有序的开展，相应的细胞治疗的法规也越来严格。在细胞培养过程中，应尽量避免使用动物或人来源的物质，比如应尽量避免血清的使用，培养基应该选择最高质量界别的培养基。Irvine Scientific  91154 CAR-T细胞培养基是全球shou个无血清、无动物源、化学成分限定的T细胞培养基 。PRIME-XV®T cell CDM无疑是T细胞治疗领域（尤其是CAR-T细胞治疗）的趋势培养基。

91154 CAR-T细胞培养基订购信息

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PRIME-XV®T cell CDM

化学成分限定的T细胞培养基 91154 1L/瓶 2～8℃

91154 CAR-T细胞培养基产品特点

  1. 无血清成分
  2. 无异种蛋白
  3. 化学成分明确
  4. 不需要额外添加血清或者白蛋白，支持T细胞体外活化及扩增培养；
  5. T细胞（CAR-T）培养性能明显优于市面上的无血清培养基；
  6. GMP条件下生产以及DMF备案

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91154 CAR-T细胞培养基提供zui佳性能

  1. 在平板、细胞培养袋和G-Rex中支持活跃的T细胞生长，同时维护其功能
  2. 提供批量到批次的一致性。
  3. 消除未定义成分对T细胞表型的影响
  4. 支持目标T细胞类型(如Th)的极化1T调节细胞

制备用于T细胞活化的平板

  1. 用浓度为1μg/ mL的抗人CD3（克隆UCHT1）和抗人CD28（克隆CD28.2）抗体在37℃oC下涂覆2小时或在2-8℃下过夜oC用Parafilm®来防止蒸发。
  2. 吸出涂层溶液。
  3. 在加入细胞之前用PBS洗涤两次。

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制备T细胞

  1. 在使用前，在37oC下平衡足够量的PRIME-XV T细胞CDM至少15分钟。
  2. 通过在37oC水浴中温和搅拌小瓶1分钟，解冻新鲜的冷冻保存的PBMC小瓶。
  3. 小心地将小瓶的全部内容物转移到含有预热的10mL PRIME-XV T Cell CDM的15mL锥形管中。
  4. 将细胞以200g旋转10分钟。
  5. 小心吸出上清液，留下覆盖细胞沉淀的最小体积的培养基。
  6. 补充PRIME-XV T细胞CDM，相当于200 U / mL（11,000 IU / mL）的IL-2。
  7. 用补充的PRIME-XV T细胞CDM重悬细胞沉淀，并将细胞以100,000细胞/ mL的密度转移到包被的平板上。
  8. 91154-91154 CAR-T细胞培养基-T淋巴细胞培养基将细胞在37℃oC和5％CO 孵育。
  9. 每2至3天培养，用含有相当于200U / mL（11,000IU / mL）IL-2的PRIME-XV T细胞CDM进食。 饲料量应至少为原始培养体积的70％。

注意：应根据细胞密度和生长情况调整摄食事件和体积的频率，以避免过度融合。

 

收获T细胞

  1. 使用细胞刮刀轻轻地从培养皿中取出T细胞。
  2. 用温度平衡的PRIME-XV T Cell CDM洗涤。
  3. 细胞准备好进行分析，存储或重新种植。

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G-Rex 6孔培养板中T细胞扩增的方案

第0天：T细胞的电镀和活化

  1. 在使用前，在37℃下平衡足够量的PRIME-XV T Cell CDM至少15分钟。注意：为避免温度循环，请确定平衡前所需的总体积。
  2. 将小瓶在37°C水浴中轻轻搅拌1分钟，解冻一小瓶冷冻细胞。 或者，使用新鲜分离或收获的细胞。
  3. 小心地将小瓶的全部内容物转移到含有10mL PRIME-XV T Cell CDM的15mL锥形管中。
  4. 将细胞以200g旋转10分钟。
  5. 小心吸出上清液，留下覆盖细胞沉淀的最小体积的培养基。
  6. 补充适当体积的PRIME-XV T细胞CDM，相当于200 U / mL（11,000 IU / mL）的IL-2。
  7. 将5×106PBMCs /孔置于35mL完全培养基中。
  8. 添加以下可溶性激活抗体：

LEAF纯化的抗人CD3浓度为10μg/ mL（克隆UCHT1）LEAF纯化的抗人CD28浓度为5μg/ mL（克隆CD28.2）

  1. 将细胞在37℃和5％CO2的培养箱中孵育。

第3天：继续刺激

  1. 以200 U / mL（11,000 IU / mL）添加额外的IL-2。

第7天：媒体交流

  1. 通过从井的顶部边缘缓慢移液，移除25mL废介质，小心避免意外吸入细胞。
  2. 轻轻旋转或重新悬浮剩余的液体，使细胞均匀分散细胞计数。
  3. 加入30 mL新鲜培养基补充剂，IL-2，200 U / mL（11,000 IU / mL）。

第10天：继续刺激

  1. 以200 U / mL（11,000 IU / mL）添加额外的IL-2。第14天：收获细胞
  2. 通过从井的顶部边缘缓慢移液，移除25mL废介质，小心避免意外吸入细胞。
  3. 轻轻旋转或重新悬浮剩余的液体，使细胞均匀分散细胞计数。
  4. 以剩余体积收获细胞。

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主营：干细胞、细胞冻存、细胞治疗、试剂耗材 相关板块的产品，以“传递科学价值，服务科学研究”为宗旨，经过近五年的努力推广，在全中国代理的BD科研产品、OriGen干细胞冻存袋等产品已经成功销往：上海市、北京市、重庆市、天津市、广东省的广州市、深圳市、珠海市、江西省的南昌市、四川省的成都市、绵阳、浙江省的杭州市、宁波、温州、江苏省的南京市、苏州、无锡、泰州、湖南省的长沙、陕西省的西安市、杨凌、甘肃省的兰州、宁夏的银川、新疆的乌鲁木齐、广西省的南宁市、山东省的济南、青岛、东北三省 辽宁省的沈阳市、大连市、吉林省的长春市、黑龙江省的哈尔滨市等中国绝大部分省市和自治区。