SABC(兔IgG)-POD kit
英文名称 | SABC(Rabbit IgG)-POD Kit |
储存条件 | -20℃,避光,有效期1年 |
单位 | 盒 |
规格 | 100T |
操作步骤:(以石蜡切片为例)
1、切片常规脱蜡至水(三次二甲苯,三次乙醇)。
2、3% H2O2室温处理5-10分钟以灭活内源性过氧化物酶,蒸馏水洗3次。
3、可选步聚:
c、跳过此步,直接进入下一步。
4、滴加5% BSA封闭液,室温20分钟,甩去多余液体, 免洗。
5、用稀释液将一抗按一定比例稀释(稀释后的一抗4℃可保存一周),也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗37℃ 孵育1小时左右或20℃ 孵育2小时左右,也可4℃过夜。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次,每次2分钟(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳性染色强度不够时,可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时,可降低一抗浓度和缩短孵育时间)。
6、根据用量,用稀释液将Bio-羊抗兔IgG浓缩液按1:50-100稀释成工作液(1mL稀释液加入10-20μL Bio-羊抗小鼠IgG浓缩液混匀,此工作液4℃可保存一周)。 滴加Bio-羊抗兔IgG工作液, 20-37℃孵育30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次,每次2分钟。
7、根据使用量,用稀释液将SABC-POD浓缩液按1:100稀释成工作液(1mL稀释液加入10μL SABC-POD浓缩液混匀,此工作液4℃可保存一周)。滴加SABC-POD工作液,20-37℃孵育30分钟。PBS (pH7.2-7.4)洗涤4次,每次5分钟。
8、DAB显色:根据用量,用PBS(pH7.2-7.4)配制,按1mL PBS加入50μL 20×DAB显色液A,加入50μL 20×DAB显色液B 。充分混匀后滴加到切片上,室温显色,镜下控制反应时间,一般在5-30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。
9、苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。 对于细胞爬片,固定后,PBS漂洗两次,再用0.5% Triton X-100室温孵育20分钟,PBS漂洗两次,3% H2O2处理15分钟;PBS漂洗两次,接上述第4步。对于冰冻切片,固定后,PBS漂洗两次,接上述第二步。