RIPA裂解液(弱)

RIPA裂解液(弱)

货号:BL652A

规格: 100ml

品牌:biosharp

商品详情:

RIPA Lysis BufferMild

RIPA裂解液(弱)

产品编号

产品名称

规格

BL652A

RIPA裂解液(弱)

100 ml

 

产品简介

RIPA裂解液是一种经典的细胞组织快速裂解液,对动物细胞膜、胞浆、胞核成分均有较强的裂解作用,裂解得到的蛋白样品可以用于常规的WesternIP等。RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation AssayRIPA裂解液的配方有很多种,根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。

RIPA裂解液(弱)的主要成分为50 mM Tris-HclpH7.4),150mM NaCl1% NP-400.25% sodium deoxycholate,以及Sodium OrthovanadateSodium FluorideEDTA等。本产品需要和常规的蛋白酶抑制剂一起使用,以达到更好的提取效果;本产品含有磷酸酶抑制剂,可用于提取磷酸化蛋白。

RIPA裂解液(弱)裂解得到的蛋白样品,可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

 

使用说明

1、使裂解液充分融解,混匀,取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM,根据具体实验需求可选择加入蛋白酶抑制剂。

2、根据样品的类型进行如下操作:

对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(若血清中的蛋白没有干扰,可不洗)。按照6孔板每孔加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。用移液器吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。

对于悬浮细胞:离心收集细胞,去除培养基,用手指把细胞用力弹散,按照6孔板每孔细胞加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应无明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管后再裂解。大团的细胞较难裂解充分,而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。

对于组织样品:把组织剪切成细小的碎片。按照每20mg组织加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)使用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。

3、样品充分裂解后,4℃ 10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western blot、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞加150ul裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200或250ul。

注意:RIPA裂解液(弱)的裂解产物中经常会出现透明胶状物,其主要成分为基因组DNA,当检测的目标蛋白不与基因组DNA紧密结合,可以直接离心裂解产物,取上清液用于后续实验;如果目的蛋白与基因组DNA结合非常紧密,可通过超声处理打碎打散透明胶纸物,随后离心取上清用于后续实验。

注意事项

1、为取得最佳的使用效果,尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。

2、需自备PMSF。

3、裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

4、可能需要通过一些预实验来摸索最佳的适合您实验条件的裂解液。

5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

保存条件

-20℃保存,一年有效。加入蛋白酶抑制剂后建议适量分装 -20℃冻存,避免反复冻融。

货号 BL652A
规格 100ml
品牌 biosharp
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