Mouse IL-1β ELISA Kit别名检验原理产品组成检测范围使用方法背景说明储存/保存方法注意事项
概述 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
别名 |
catabolin, IL1 beta, IL-1 beta, IL-1, IL1B, IL-1b, IL1-BETA, IL-1F2, IL1F2IL-1 beta, interleukin 1, beta, interleukin-1 beta, preinterleukin 1 beta, pro-interleukin-1-beta
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
检验原理 |
本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测技术。特异性抗小鼠IL-1β抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入标准品、待测样本和生物素化的检测抗体,经过孵育,样本中存在的IL-1β与固相抗体和检测抗体结合,形成免疫复合物。洗涤去除未结合的物质后,加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(Streptavidin-HRP)。洗涤后,加入显色底物,避光显色。加入终止液终止反应,在450nm波长(参考校正波长540nm或570nm)测定吸光度值。
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
产品组成 |
请在试剂盒有效期内使用(新老产品随机发货)
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
检测范围 |
15.6pg/mL-1000pg/mL
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
使用方法 |
需自备试验器材
1. 酶标仪(可测量450nm检测波长的吸收值及540nm或570nm校正波长的吸收值) 2. 高精度加液器及一次性吸头 3. 蒸馏水或去离子水 4. 洗瓶(喷瓶)、多通道洗板器或自动洗板机 5. 500mL量筒 一、实验前准备 二、操作步骤 注:提供的标准曲线数据仅供参考,应根据同次试验所绘标准曲线计算样本含量。 三、试剂盒参数
5. 特异性:此ELISA法可检测天然及重组Mouse IL-1β蛋白。将以下因子用稀释剂(1×)配置成50ng/mL的浓度来检测与Mouse IL-1β的交叉反应。将50ng/mL的干扰因子掺入中间范围的重组Mouse IL-1β对照品中,来检测对Mouse IL-1β的干扰。没有观察到明显的交叉反应或干扰。
四、常见问题解析
2. 花板(空白、阴性阳性对照正常,但标本孔OD值明显偏高)
五、实验流程图 |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
背景说明 |
白细胞介素1(IL-1)蛋白家族包含经典成员IL-1α、IL-1β和IL-1ra,以及IL-18、IL-33和IL-1F5-10。IL-1α和IL-1β结合于相同的细胞表面受体,共享生物学功能。除了皮肤角质形成细胞、一些上皮细胞以及中枢神经系统的某些细胞之外,健康小鼠未刺激的细胞不产生IL-1。但是,作为对炎症物质、感染或微生物内毒素的应答,巨噬细胞以及其他多种细胞会大量产生IL-1。在免疫应答与炎症反应、骨重建、发热、糖代谢、生长激素/IGF-1的生理学过程中,IL-1β起着关键作用。在一系列的病理条件下,包括败血症、类风湿性关节炎、炎性肠病、急性和慢性髓性白血病、胰岛素依赖型糖尿病、动脉粥样硬化、神经损伤以及衰老有关的疾病,一直伴有IL-1的异常或持续产生。
IL-1α和IL-1β具有结构上相关的多肽,在氨基酸水平上的同源性大约为25%。它们均被合成为31kDa大小的前体,然后裂解为成熟的蛋白质,分子量大约为17.5kDa。Caspase-1/ICEI裂解IL-1β前体是炎症反应中的一个关键步骤。IL-1α和IL-1β都不含有典型的疏水性信号肽,但有证据表明这些因子可通过非经典通路分泌。一部分未加工的IL-1α可在细胞膜上出现,并可能存有生物学活性。与IL-1α前体不同,IL-1β前体与成熟体相比几乎不具备生物学活性。未加工和成熟的IL-1β均可从细胞输出。 IL-1α和IL-1β通过与IL-1ra结合的免疫球蛋白超家族受体发挥作用。表达80kDa的跨膜I型受体(IL-1RI)的细胞包括:T细胞、成纤维细胞、角质细胞、内皮细胞、滑液内层细胞、软骨细胞和肝细胞。表达68kDa的跨膜II型受体(IL-1RII)的细胞包括:B细胞、中性粒细胞和骨髓细胞。这两种IL-1受体的胞外域具有大约28%的同源性,但显著差异则体现在其胞内域:II型受体的胞内域仅有29个氨基酸,而I型受体的胞内域却有217个氨基酸。IL-1RII对于IL-1不产生信号,可能做一个诱骗受体减弱IL-1功能。IL-1受体辅助蛋白(IL-1RAcP)与IL-1RI相关,为IL-1RI信号转导所必需。IL-1ra是一个分泌性分子,起到IL-1竞争性抑制剂的作用。在人血浆、关节滑液以及多种人细胞系的条件培养基中可以检出可溶性IL-1RI和IL-1RII。此外,类似于可溶性IL-1RII的IL-1结合蛋白能够由牛痘和牛痘病毒编码产生。 |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
性能 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
储存/保存方法 |
未开封试剂盒,2-8°C储存。
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
注意事项 |
1. 请在试剂盒有效期内使用。
2. 不同试剂盒及不同批号试剂盒的组分不能混用。 3. 样本值若大于标准曲线的最高值,应将样本用稀释剂(1×)稀释后重新检测;若细胞培养上清液样本需分布稀释,除最后一步用稀释剂(1×)稀释外,其它中间稀释可采用细胞培养基。 4. 检测结果的不同可由多种因素引起,包括实验人员的操作、移液器的使用方式、洗板技术、反应时间或温度、试剂盒的储存等。 5. 试剂盒中的终止液是酸性溶液,使用时请做好眼镜、手、面部及衣服的防护。 6. 仅供科研使用,不可用于体外诊断。 |