Tth Argonaute 蛋白 (TtAgo) #M0665S 50 pmol-NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – Argonaute 蛋白

Tth Argonaute 蛋白 (TtAgo)                              收藏

Tth Argonaute 蛋白 (TtAgo)                                #M0665S 50 pmol

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#M0665S
50 pmol
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特性

TtAgo 来自嗜热栖热菌,是一种可编辑的核酸内切酶,在 5’ 磷酸化的单链 DNA(ssDNA) 指导下能够切割底物靶序列,在底物与向导 DNA 互补序列的磷酸二酯键处产生断裂。

·所需 5’ 磷酸化 ssDNA 长度短,仅 16 -18 nt,成本低,可用 NEB T4 PNK 进行磷酸化

·向导/靶标序列的选择不受相邻序列限制

·对 ssDNA 和大多数双链 DNA(dsDNA)底物活性较高(在 dsDNA 底物上产生切刻),对 ssRNA 底物也有一定活性

·适用于体外应用

·参考 Tth Argonaute (TtAgo) 实验的优化指南

 

概述

 TtAgo 是一种来自革兰氏阴性嗜热栖热菌(Thermus thermophiles)的原核 argonaute 蛋白,在 5′-磷酸化单链 DNA(16 – 18 nt)指导下,可发挥 DNA 介导的核酸内切酶作用。在二价 Mg2+(或Mn2+)金属离子存在时,该酶具有类 RNase H 活性(见产品使用说明 #1),并在与 DNA 向导链第 10 和 11 个碱基互补的碱基处切割底物。

 
TtAgo 工作示意图
Tth Argonaute 蛋白 (TtAgo)                                #M0665S 50 pmol
TtAgo 在 65-85℃ 时具有活性(见产品使用说明 #2),对 ssDNA 活性最高,其次是 dsDNA,对单链 RNA(ssRNA)底物活性最低。该酶与单链向导 DNA 协同作用时,不会切割 dsDNA ,而只是切刻与向导 DNA 链互补的底物 DNA 链。该酶对双链 RNA(dsRNA)底物无活性。切割后的 5’ 和 3’ 末端产物可进行下游连接(1)。结果表明,在某些情况下,反应中加入热稳定单链 DNA 结合蛋白(ET-SSB,NEB #M2401)和/或热稳定解旋酶有助于切割 dsDNA 底物。
 
无向导 DNA 的 TtAgo 会通过 “剪切” 来降解 dsDNA,这被认为是 TtAgo 从入侵的或外源 DNA 中自发产生向导 DNA 的机制。(2)为防止这种非特异性活性的产生,向导 DNA 的摩尔量应超过 TtAgo 量的 5 倍。此外,向导链要与 TtAgo 一起在 ~75℃ 条件下孵育 10-30 分钟,形成核蛋白复合物后再加入底物进行反应。更多详细信息,请参阅操作步骤、说明书和使用说明。
 
TtAgo 适用于体外应用。
 
随酶提供的试剂
ThermoPol 反应缓冲液套装
 
浓度
1 µM
 
来源
TtAgo 纯化自携带革兰阴性嗜热栖热菌(Thermus thermophilus)克隆基因的大肠杆菌菌株,该克隆基因是 N 端含 6X His 标记的融合基因。
 

 

保存温度

-20°C
 
质保声明 
TtAgo 蛋白经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请联系我们。
 
参考文献
1. Hunt, E. A., Evans Jr, T. C., & Tanner, N. A. (2018). Single-stranded binding proteins and helicase enhance the activity of prokaryotic argonautes in vitro. PloS One. 13 (8), e0203073.
2. Swarts, D., Szczepaniak, M., Sheng, G., Chandradoss, S., Zhu, Y., & Timmers, E. et al. (2017). Autonomous Generation and Loading of DNA Guides by Bacterial Argonaute. Molecular Cell.. 65 (6), 985-99.