E-64；N-(反式-环氧丁二酰基)-L-亮氨酸-4-胍基丁基酰胺
| MDL | MFCD00080261 |
| EC | EINECS 613-978-4 |
| 别名 | E-64蛋白酶抑制剂;E64;proteinaseinhibitore64 |
| 英文名称 | E-64 |
| CAS | 66701-25-5 |
| 分子式 | C15H27N5O5 |
| 分子量 | 357.41 |
| 纯度 | ≥98% |
| 单位 | 支 |
| 生物活性 | E-64 是一种有效的不可逆的半胱氨酸蛋白酶 (cysteine proteases) 抑制剂，抑制 papain 的 IC50 为 9 nM[1]。 |
| IC50 | 9 nM (Papain)[1] |
| In Vitro | E-64是组织蛋白酶B特异性抑制剂，其与木瓜蛋白酶，肌动蛋白，组织蛋白酶L和组织蛋白酶K的结合模式已在原子水平上进行了综述。 E-64已被广泛用作许多半胱氨酸蛋白酶的有效和不可逆（共价型）抑制剂，如木瓜蛋白酶，无花果蛋白酶，猕猴桃素，组织蛋白酶B和L [1]。将S.cervi成体寄生虫在Kreb’s Ringer碳酸氢盐（KRB）维持培养基中在37℃，5％CO 2和5,10,20和40μM浓度的E-64下孵育8小时。 E-64显示寄生虫的运动性和活力的浓度和时间依赖性降低（EC50 =16μM）[2]。 |
| In Vivo | 发现CD4和CD19的广谱表达存在于胰岛和胰腺淋巴结（PLN）中，并且抗-Serpin B13 mAb暴露引起显著的转变，其有利于表达低至中等量的这些标志物的细胞。然而，在蛋白酶抑制剂E-64（E64）存在下接受抗丝氨酸蛋白酶抑制剂B13 mAb的动物中，这种转变被消除，其在所用的实验条件下保持其阻断活性[3]。给Dahl盐敏感（SS）大鼠喂食8％高盐NaCl饮食并静脉内输注不可逆半胱氨酸组织蛋白酶抑制剂E-64（1mg /天）或载体（对照）。对照组和E-64输注组均发生明显的高血压和肾脏损害，两组之间没有观察到平均动脉压和高血压相关白蛋白尿的差异[4]。 |
| 激酶实验 | 使用Z-Arg-Arg-4mβNA作为底物测定组织蛋白酶B活性，稍作修改。将粗提物在含有1mM EDTA和5mM DTT的50mM乙酸钠缓冲液（pH5.0）中于37℃预温育5分钟。加入底物（终浓度，100μM）使最终测定体积为1mL。将反应混合物在37℃下孵育30分钟。通过加入等体积的含有Fast Garnet GBC盐（1mg/mL），10mM pHMB和50mM EDTA，pH6.0的终止试剂终止反应。产物β-萘胺（β-NA）的萃取用正丁醇进行。在完全分层后，在正丁醇层中测量吸光度，并使用β-萘胺溶液的摩尔消光系数在520nm下以31.5M/cm每秒计算活性。一个酶活性单位定义为在37℃下每分钟释放1μmolβNA的酶量。通过绘制不同浓度的E-64和组织蛋白酶B活性的％抑制之间的图来计算半数最大抑制浓度（IC 50）。这里，IC50表示将寄生性组织蛋白酶B活性抑制一半所需的E-64浓度[2]。 |
| SMILES | O=C([C@H]1O[C@@H]1C(N[C@H](C(NCCCCNC(N)=N)=O)CC(C)C)=O)O |
| 靶点 | Cysteine Protease inhibitor |
| 动物实验 | 小鼠[3] NOD/LtJ和BDC2.5 T细胞受体（TCR）转基因NOD小鼠用于研究用抗丝氨酸蛋白酶抑制剂B13单克隆抗体（mAb）治疗的效果。用抗血清素B13 mAb（100μg/注射）在10天的时间内静脉内注射4周龄雌性NOD/LtJ小鼠4次。此外，在同一时期，一些动物也以10mg/kg /天腹膜内注射蛋白酶抑制剂E64数天。用稀释剂（含有10％DMSO的无菌PBS溶液）和对照IgG处理对照小鼠。含有E64或DMSO的溶液在使用前立即制备。在最后一次注射后24小时，杀死小鼠，并将来自其淋巴器官和胰岛的细胞进行FACS分析。大鼠[4]使用7周龄雄性Dahl盐敏感大鼠（SS/JrHsdMcwi）。简而言之，8周龄麻醉的SS大鼠的左股动脉和静脉导管插入。两个导管都固定并从颈后部外置，并且动脉管线连接到与血压换能器对齐的肝素化盐水输注泵，并且静脉管线连接到盐水输注泵。使用系绳旋转系统允许动物360°移动。该制剂允许在有意识的，自由活动的大鼠中进行慢性静脉输注和动脉血压测量。在将两组转换为8.0％NaCl饮食并同时加入E-64（1mg /天; 280mM DMSO储备液）或载体（DMSO在盐水中）对照之前，获得稳定的基线血压4天。到静脉导管。通过平均在大鼠睡眠周期的开始3小时期间每分钟采集的MAP来计算每日MAP。 |
| 数据来源文献 | [1]. Matsumoto K, et al. Structural basis of inhibition of cysteine proteases by E-64 and its derivatives. Biopolymers. 1999;51(1):99-107. [2]. Wadhawan M, et al. Inhibition of cathepsin B by E-64 induces oxidative stress and apoptosis in filarial parasite. PLoS One. 2014 Mar 25;9(3):e93161. [3]. Baldzizhar R, et al. Anti-serpin antibody-mediated regulation of proteases in autoimmune diabetes. J Biol Chem. 2013 Jan 18;288(3):1612-9. [4]. Blass G, et al. Chronic cathepsin inhibition by E-64 in Dahl salt-sensitive rats. Physiol Rep. 2016 Sep;4(17). pii: e12950 |
| 规格 | 5mg 10mM*1mL in DMSO 10mM*1mL in Water 10mg 25mg |
E-64 是一种有效的不可逆的半胱氨酸蛋白酶 (cysteine proteases) 抑制剂。同样也抑制木瓜蛋白酶、钙蛋白酶和cathepsins B、H，但不抑制丝氨酸蛋白酶或天冬氨酸蛋白酶。可在丝虫的寄生虫中诱导氧化应激和凋亡。
使用本产品的应用案例（仅供参考）
In Vitro
Western blotting. （14 µM E-64）
MCF-7 cells were treated with the aforementioned CoCl2 concentrations for 24 h and cells were lysed with ice-cold radioimmunoprecipitation assay buffer (150 mM NaCl, 1.0% NP-40, 0.1% Triton X-100, 0.5% sodium deoxycholate, 0.1% SDS and 50 mM Tris-HCl, pH 8.0) and protease inhibitors (AEBSF at 2 mM, Aprotinin at 0.3 µM, Bestatin at 116 µM, E-64 at 14 µM, Leupeptin at 1 µM and EDTA at 1 mM; Beijing Jinpan Science & Technology Co., Ltd., Beijing, China).
来源文献：Li Q, Ma R, Zhang M. CoCl2 increases the expression of hypoxic markers HIF-1α, VEGF and CXCR4 in breast cancer MCF-7 cells. Oncol Lett. 2018 Jan;15(1):1119-1124. doi: 10.3892/ol.2017.7369. Epub 2017 Nov 8. PMID: 29391899; PMCID: PMC5769392.