SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(1X)

SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(1X)

¥35.00

货号:BL1010A

规格:10ml

品牌:biosharp

商品详情:

产品简介:

SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(SDS-PAGE Sample Loading Buffer, 1×),是一种经过改良的以溴酚蓝为染料的蛋白上样缓冲液。可以直接用于细胞或组织样品的裂解,并用于后续常规的SDS-PAGE蛋白样品的上样。使用该产品直接裂解蛋白样品的优点是比较便捷;缺点是裂解好的蛋白样品不能用常规的蛋白定量方法测定蛋白浓度。这样蛋白上样量的均一性就较难控制,需要借助考马斯亮蓝等的染色结果或Western的检测结果,来调整上样量。当细胞量或组织用量能控制得比较均一时,使用本裂解液直接裂解获取蛋白样品会比较便捷。

本缓冲液已经含有还原剂DTT,有轻微刺激性气味。

 

使用方法:

1、在常温或不超过37℃的水浴中溶解SDS-PAGE上样缓冲液(1×)。水浴溶解后立即常温存放,尽量避免长时间置于水浴中。

2对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液清洗一遍。按照6孔板每孔(细胞数量~2.5×106)加入150-250ulSDS-PAGE上样缓冲液(1×)的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使SDS-PAGE上样缓冲液(1×)和细胞充分接触。通常SDS-PAGE上样缓冲液(1×)接触细胞1-2秒后就会被裂解。裂解后的样品收集到1.5 ml离心管内。

3对于悬浮细胞:450g4℃离心5分钟收集细胞,弃上清,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板(细胞数量~2.5×106)每孔细胞加入150-250ulSDS-PAGE上样缓冲液(1×),再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。

4组织样品:

 把组织剪切成细小的碎片。

 按照每20mg组织加入150-250ul SDS-PAGE上样缓冲液(1×)的比例加入缓冲液。

注:如裂解不充分可适当添加上样缓冲液,如需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少上样缓冲液的用量。

    ③ 用玻璃匀浆器匀浆或者用27#针头抽打5-10次,直至充分裂解。

    ④ 充分裂解后,将样品收集到1.5 ml离心管内。

注:如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈涡旋震荡使样品裂解充分。

595-100℃加热10分钟,以充分变性蛋白。

6样品冷却到常温后,12000 rpm离心2分钟,上清即可直接上样到SDS-PAGE凝胶加样孔内。通常电泳至蓝色染料到达胶的底端处附近即可停止电泳。

 

注意事项:

1、裂解时如裂解不充分可以适当添加上样缓冲液,如需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少上样缓冲液的用量。

2、样品加热前通常会发现蛋白样品内有粘稠的半透明状物体,通常在上样缓冲液内加热8-10分钟后消失。如果起始时细胞或组织的用量较大,基因组DNA含量较高,加热10分钟后有可能仍然比较粘稠或者有粘稠状的半透明物体。此时需要再煮沸10分钟或者补加适量的蛋白上样缓冲液后再煮沸5分钟。充分煮沸后一方面可以使结合在基因组DNA上的蛋白充分释放,同时会导致基因组DNA的部分断裂从而使粘稠感消失,这样就不会影响后续的上样操作。

3、SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(1X)必须完全溶解后再使用。建议根据使用量和频率分装冻存,应避免反复冻融。

4、本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品。

5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

有效期

-20℃保存一年

货号 BL1010A
规格 10ml
品牌 biosharp