MTT 法又称 MTT 比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀 酸脱氢酶能使外源性 MTT 还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。在一定细胞数范围内，MTT 结晶形成的量与细胞数成正比，吸光度越大，表示细胞活性越强，说明药物毒性越小。该方法已广泛用于一些生物活性因子 的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度 高、经济。

1、将细胞板放置于无菌操作台中。 2、在细胞板中每孔加入10%体积的 MTT溶溶剂。 【MTT溶液的配制：用5ml MTT溶剂溶解25mg MTT，配制成5mg/ml的MTT溶液。配制后即可使用，或直接-20℃避光保存，也可以根据需要适当分装后-20℃避光保存。】 3、将细胞板放回培养箱中继续孵育3 – 4小时。做对比试验时，孵育时间需一致。 4、孵育后将细胞板从培养箱中拿出，按照下面的方法溶解产生MTT甲臜结晶物。 （1）如果是贴壁细胞，则弃去培养基。加入与初始体积等量的Formazan Solvent。每孔的溶解液体积可能不同，但为了方便比较，总体积须保持一致。 （2）如是非贴壁细胞或培养基的去除会造成MTT甲臜丢失，则直接在培养基中加入与初始体积等量的溶解 液。 （3）加入 Formazan Solvent 后，须在 1 小时内完成读数。 5、在摇床中温和地振荡可增强溶解。某些情况下，尤其是细胞密度较高时，需要反复吹打使 MTT 甲臜结 晶物完全溶解。 6、分光光度计测定 OD570 和参考波长 OD690。 7、96 孔板可以在配备合适滤光片的酶标仪上进行检测。 8、其他类型的多孔板则需用合适大小的比色皿或读板器进行分光光度检测。

1、由于使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发的问题。一方面，由于96孔板周围一圈最容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加PBS，水或培养液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。 2、若所用受试化合物与MTT能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用PBS冲2~3遍后，再加入含MTT的培养液。 3、Formazan的生成不仅与活细胞数成正比，也受作用时间的影响，因此样品较多时测定的结果可能随时间而变。 4、本品含有致癌物质，避免与皮肤和眼睛接触，请小心操作。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 5、本产品只用于科研，不可应用于临床或诊断。

MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit,MTT kit

2~8℃，避光保存，有效期12个月。