mRNA体外转录专用载体Template Vector (BspQ I) for T7 mRNA Synthesis酶试剂盒Takara Clontech

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mRNA体外转录专用载体Template Vector (BspQ I) for T7 mRNA Synthesis
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Takara 6146 Template Vector (BspQ I) for T7 mRNA Synthesis 10 μl ¥618 mRNA体外转录专用载体Template Vector (BspQ I) for T7 mRNA Synthesis mRNA体外转录专用载体Template Vector (BspQ I) for T7 mRNA Synthesis mRNA体外转录专用载体Template Vector (BspQ I) for T7 mRNA Synthesis
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Template Vector (BspQ I) for T7 mRNA Synthesis用于制备Poly(A)尾区域无冗余序列的mRNA
· 用于构建mRNA体外转录模板质粒的载体
· 使用IIS型限制性内切酶BspQ I可得到Poly(A)尾区域无冗余序列的线性化模板,能够提高mRNA的翻译效率
· 与In-Fusion® Snap Assembly Master Mix结合使用,可轻松快速地进行克隆
 
■ 制品说明
Template Vector (BspQ I) for T7 mRNA Synthesis是用于使用TriLink 公 司 的 帽 类 似 物 [CleanCap Reagent AG 或 CleanCap Reactive AG(3’OMe)]构建体外转录 (IVT)mRNA的模板质粒。线性化的载体中包含T7启动子、转录起始序列(AGG)、5’-UTR(untranslated region)和3’-UTR、Poly(A)序列(141碱基),因此只需要对目标基因编码序列(Coding sequence: CDS)进行In-Fusion无缝克隆,便可构建体外转录的模板质粒(图1)。随后用IIS型限制酶BspQ I消化,得到的线性化质粒模板用于合成Poly(A)尾无冗余序列的mRNA(图2),获得的mRNA可用于人类、小鼠或其他哺乳动物细胞。使用线性化的模板质粒,通过Takara IVTpro T7 mRNA Synthesis Kit(Code No. 6144)进行体外转录(IVT),即可便捷地制备高产量的mRNA。
关于模板质粒的设计和方案的细节,请结合本产品的数据,参考Cloning Kit for mRNA Template(Code No. 6143)的使用说明书。
mRNA体外转录专用载体Template Vector (BspQ I) for T7 mRNA Synthesis
 
mRNA体外转录专用载体Template Vector (BspQ I) for T7 mRNA Synthesis
图2:Linearized Template Vector (BspQ I)的BspQ I酶切位点周围序列、线性化后的末端结构和IVT RNA序列图像
Type IIS限制酶BspQ I的识别序列(红框)和切割位点(蓝箭头)。切割位点位于识别序列的外侧。
通过在BspQ I处进行切割,可以制备Poly(A)尾区域无冗余序列的mRNA合成模板。
 
■ 用途
制备Poly(A)尾区域无冗余序列的mRNA合成模板
 
■ 制品内容
Linearized Template Vector (BspQ I)(50 ng/μl) 10 μl
FLuc Control Fragment (BspQ I)(100 ng/μl) 10 μl
 
■ 使用注意
· 构建质粒模板时,需要In-Fusion无缝克隆试剂。请购买In-Fusion Snap Assembly Master Mix(Code No. 638943/638944/638947~638949)。
· 关于模板质粒的设计和方案细节,请参阅Cloning Kit for mRNA Template (Code No. 6143)的使用说明书。此时,请确认想要克隆的目标基因的CDS序列中不存在BspQ I位点。若出现BspQ I位点存在于CDS中的情况,为确保氨基酸序列不会发生变化,可以通过使用不同的密码子(例:从丙氨酸密码子的“GCU”变为“GCC”等)来改变DNA序列。
· 当dsDNA模板、试剂、试管或微量移液器枪头被RNase污染时,合成的RNA产量会降低或者出现片段化。在实验过程中应采取预防措施以避免RNase污染,例如戴一次性手套和使用专门用于RNA实验的试管和微量移液器枪头。
 
■ 保存
-20℃
 
■ 试剂盒以外的其它必要试剂(主要试剂)
· In-Fusion Snap Assembly Master Mix(Code No. 638943/638944/638947~638949)
· 感受态细胞
  E. coli HST08 Premium Competent Cells(Code No. 9128)
  Takara Stable Competent Cells(Code No. 9132)等
· SOC培养基
· LB (luria bertani)培养基
· LB /卡那霉素(50 μg/ml)平板
 
■ 序列信息
· Linearized Template Vector (BspQ I) :2,962 bp
序列信息(fasta格式):点此进行下载
· FLuc Control Fragment (BspQ I) :1,683 bp
序列信息(fasta格式):点此进行下载
 
■ 载体信息Linearized Template Vector (BspQ I)
 
mRNA体外转录专用载体Template Vector (BspQ I) for T7 mRNA Synthesis
 
NeoR/KanR: 53~847
Ori: 1,172~1,760
CMV enhancer: 1,861~2,240
CMV promoter: 2,241~2,444
 
T7 promoter sequence: 2,489~2,505
Transcription start sequence (AGG): 2,506~2,508
5’UTR: 2,509~2,559
Upstream In-Fusion region (15 bp): 2,545~2,559
 
In-Fusion cloning site (linearized site): between 2,559 and 2,560
 
Downstream In-Fusion region (15 bp): 2,560~2,574
3’UTR: 2,560~2,672
Poly(A)141 : 2,673~2,813
BspQI: 2,810
 
Poly(A) Forward Primer: 2,570~2,589
Poly(A) Reverse Primer: 2,904~2,923
 
<T7启动子序列后的详细信息>
mRNA体外转录专用载体Template Vector (BspQ I) for T7 mRNA Synthesis
 
 

页面更新:2024-03-21 09:40:52