文库构建试剂盒SMART-Seq mRNA LP (with UMIs)酶试剂盒Takara Clontech

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文库构建试剂盒SMART-Seq mRNA LP (with UMIs)
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 634762 SMART-Seq® mRNA LP (with UMIs) 24 Rxns ¥20,124 文库构建试剂盒SMART-Seq mRNA LP (with UMIs) 文库构建试剂盒SMART-Seq mRNA LP (with UMIs) 文库构建试剂盒SMART-Seq mRNA LP (with UMIs)
Clontech 634765 SMART-Seq® mRNA LP (with UMIs) 96 Rxns ¥68,425 文库构建试剂盒SMART-Seq mRNA LP (with UMIs) 文库构建试剂盒SMART-Seq mRNA LP (with UMIs) 文库构建试剂盒SMART-Seq mRNA LP (with UMIs)
Clontech 634766 SMART-Seq® mRNA LP (with UMIs) 4×96 Rxns ¥246,329 文库构建试剂盒SMART-Seq mRNA LP (with UMIs) 文库构建试剂盒SMART-Seq mRNA LP (with UMIs) 文库构建试剂盒SMART-Seq mRNA LP (with UMIs)
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整合UMI的单细胞/微量样本的mRNA全长分析
SMART-Seq mRNA LP (with UMIs)
· 更可靠的数据 — 添加UMI,可以获得更高准确性的基因或转录本检测数;
· 高灵敏度 — 可用于10 pg-100 ng的总RNA或1-1000个细胞起始;
· 单管操作流程 — 包含完整的cDNA合成和文库构建流程,分别在单管中进行,减少样品损失的同时降低手动操作误差;
· 无缝衔接Illumina测序 — 本试剂盒不含index,可搭配使用Unique Dual Index (UDI) kits(单独销售)
· 完整的流程搭配特别开发Cogent™ NGS Analysis Pipeline (CogentAP)Cogent NGS Discovery Software (CogentDS)可以完成测序数据分析。
 
■ 产品说明:

SMART-Seq mRNA LP (with UMIs)是一款mRNA-Seq文库构建试剂盒。该试剂盒使用高灵敏度的SMART-Seq技术,并添加了UMI(unique molecular identifier),可以进行高准确性的Ultra low RNA全长转录组分析。它优化用于从10 pg-100 ng的高品质total RNA(RIN≥8)或1-1000个完整细胞起始生成高质量的测序文库。

该试剂盒使用oligo(dT)引物起始,并在TSO上添加UMI来校正PCR错误和扩增偏差,从而获得更高准确性的基因或转录本检测数。该试剂盒基于SMART技术(Switching Mechanism at 5′ End of RNA Template)优化改良,提供全长转录本信息,支持分析转录本异构体、融合基因、点突变等。另外,TSO中整合了LNA(locked nucleic acid)技术,提升了模板转换效率。相比较其他方法,有更高灵敏度和更高的基因检测数。

该试剂盒采用Takara Bio Group专利性的文库构建技术(U.S. Patents 7,803,550, 8,399,199, 8,728,737, 9,598,727, 10,196,686, 10,208,337, 和11,072,823),利用特别的茎环形接头构建高品质Illumina文库。另外,搭配使用的双端特殊index(UDI),可以提供完整的从样品到cDNA合成到文库构建的实验体验。同时搭配特别开发的Cogent NGS生物信息学分析软件,能直接对下机数据进行分析(*科研及盈利机构在用该试剂盒建库后,均可免费使用Cogent NGS分析测序数据!)

该试剂盒也可以与小型高通量的自动化液体工作站兼容。

如果是降解样本,选择随机引物起始,推荐使用: SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v3 – Pico Input Mammalian

 
■ 流程概要:
文库构建试剂盒SMART-Seq mRNA LP (with UMIs)
 
 
产品详情请点击:文库构建试剂盒SMART-Seq mRNA LP (with UMIs)
 
 
 

 

页面更新:2023-07-26 16:16:30

mRNA体外转录试剂盒Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System酶试剂盒Takara Clontech

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mRNA体外转录试剂盒Takara IVTpro mRNA Synthesis System
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara 6141 Takara IVTpro mRNA Synthesis System 1 Kit ¥4,973 mRNA体外转录试剂盒Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System mRNA体外转录试剂盒Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System mRNA体外转录试剂盒Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System
Takara 6143 Cloning Kit for mRNA Template 10 Rxns ¥1,531 mRNA体外转录试剂盒Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System mRNA体外转录试剂盒Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System mRNA体外转录试剂盒Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System
Takara 6144 Takara IVTpro T7 mRNA Synthesis Kit 20 Rxns ¥3,442
¥2926
mRNA体外转录试剂盒Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System mRNA体外转录试剂盒Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System mRNA体外转录试剂盒Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System
Takara 6146 Template Vector (BspQ I) for T7 mRNA Synthesis 10 μl ¥618 mRNA体外转录试剂盒Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System mRNA体外转录试剂盒Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System mRNA体外转录试剂盒Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System

*红字为促销价格,促销时间: 2024年3月1日-2024年4月30日

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一款合成高质量、高产量mRNA的体外转录(IVT)试剂盒
·通过体外转录(IVT)合成带有Cap结构和Poly(A)序列的mRNA;※ Cap类似物不包含在本产品中
·优化的T7 RNA聚合酶用于IVT反应,RNA合成效率高、产量大;
·独立包装的NTPs,方便修饰NTPs替换,且不影响mRNA产量;
·采用In-Fusion无缝克隆,轻松构建模板质粒DNA;
·使用氯化锂(LiCl)溶液进行RNA纯化,可立即进行下游应用。
 
■ 制品说明
Takara IVTpro mRNA Synthesis System是能够简便、高效合成带有Cap结构和Poly(A)序列的mRNA的体外转录试剂盒。它包含以下两种制品:
① Cloning Kit for mRNA Template(Code No. 6143):
本试剂盒用于将模板DNA无缝克隆到预线性化载体(包含在本试剂盒中)中构建用于体外转录反应的模板质粒。预线性化载体中包含T7 启动子、转录起始序列 (AGG)、5′-UTR(非编码区)、3′-UTR、和105-base Poly(A) 序列。试剂盒还包含用于将目标DNA无缝克隆到预线性化载体的In-Fusion Snap Assembly Master Mix和FLuc对照片段(包括15 bp,3′ In-Fusion sequence;FLuc CDS;和15 bp,5′ In-Fusion sequence)。
 
② Takara IVTpro T7 mRNA Synthesis Kit(Code No. 6144):
本试剂盒以含有 T7 启动子序列的双链 DNA 为模板,使用优化的高效T7 RNA聚合酶,通过体外转录可合成大量mRNA。除此以外,还包含用于IVT反应后消化模板DNA的DNase I和用于纯化mRNA的氯化锂 (LiCl) 溶液。真核细胞翻译蛋白质需要RNA的5’端有Cap结构,本试剂盒配合使用CleanCap Reagent AG(TriLink公司的Cap类似物)可以高效制备具有Cap结构的mRNA。另外,试剂盒包含单独的NTPs,方便优化或使用修饰NTPs如假尿苷替换,而且不会明显降低mRNA的产量。使用本产品,每次反应(20 μl 反应体系)可以合成高达 200μg 或更多的RNA。可以根据需要放大反应体系,即使使用10倍(200μl)反应体系也不影响mRNA预期产量(请参考说明书实验例)。※Cap类似物不包含在本产品中,请另外准备CleanCap Reagent AG (TriLink公司)。
 
mRNA体外转录试剂盒Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System
 
使用Takara IVTpro 系统合成 mRNA时,通过In-Fusion方法克隆目标基因(GOI)后,使用不会在 Poly (A) 下游留下额外序列的限制性内切酶切割是非常重要的。强烈建议使用 Hind III(Code No. 1060A/B)对用于mRNA合成的质粒进行线性化(请参考说明书和载体图谱信息)。
 
■ 用途
· 用于体外转录(IVT)模板质粒DNA的构建
· 配合使用TriLink公司的CleanCap Reagent AG体外转录合成mRNA
· 使用其它Cap类似物如Anti-Reverse Cap Analog (ARCA)合成带帽结构的mRNA
(* 请注意,使用ARCA时,需要设计与本产品不同的模板序列。)
· 用于长链非编码RNA(Long non-coding RNA)的合成
· 向导RNA(guide RNA)的合成
· siRNA前体的合成
· 用于RT-qPCR的RNA标准模板的合成
· RNA探针的合成
 
■ 制品内容(6141、6144 mRNA体外转录试剂盒Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System
Cloning Kit for mRNA Template(Code No. 6143)(10次反应)
 
产品组分 体积量 件数/Kit
1. Linearized Template Vector (50 ng/μl)  10 μl 1
2. FLuc Control Fragment (100 ng/μl) *1  10 μl 1
3. 5X In-Fusion Snap Assembly Master Mix  20 μl 1
 
*1:由 In-Fusion 序列 (15 bp) + FLuc-CDS + In-Fusion 序列 (15 bp) 组成的对照片段 (1,683 bp)
 
Takara IVTpro T7 mRNA Synthesis Kit(Code No. 6144)(20次量、20 μl反应体系)
 
产品组分 体积量 件数/Kit
1. 10X Transcription Buffer  40 μl 1
2. 10X ATP  40 μl 1
3. 10X CTP  40 μl 1
4. 10X GTP  40 μl 1
5. 10X UTP  40 μl 1
6. 10X Enzyme Mix  40 μl 1
7. Nuclease-Free Water  1 ml 3
8. DNase I  80 μl 1
9. Lithium Chloride Precipitation Solution  600 μl 1
10. Positive Control Template (FLuc) (0.5 μg/μl)2  10 μl 1
 
*2:由T7 启动子 + 5’UTR + FLuc-CDS + 3’UTR + Poly (A) 序列组成的线性质粒DNA。
 
■ 实验操作注意事项
· 本制品是通过IVT反应合成RNA的试剂。如果双链DNA模板、试剂、试管、微量移液器吸头或反应中使用的其他材料混入RNase污染,会导致使用本试剂盒获得的RNA收量降低或片段化。在反应中使用专用试管和微量移液器吸头,并戴上新的一次性手套以防止RNase污染。
· 10X Enzyme Mix 不要剧烈搅拌。
· 使用前将Lithium Chloride Precipitation Solution在室温下融化。融解后,如果充分混合后仍可见沉淀,可37℃保温溶解。如果仍有沉淀物,请直接使用,对性能没有影响。
 
■ 保存
-20℃
 
■ 试剂盒以外的其它必要试剂(主要试剂)
· CleanCap Reagent AG(TriLink公司)
· 修饰NTPs
· 限制酶(Hind III等等)
 
■ 序列信息 FLuc Control Fragment
序列信息(fasta格式):点此进行下载
该序列与Positive Control Template(FLuc)中2,685~4,367(1,683 bp)的序列相同。
 
■ 序列信息 Linearized Template Vector
序列信息(fasta格式):点此进行下载
Linearized Template Vector(2,921 bp)
 
mRNA体外转录试剂盒Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System
 
NeoR/KanR: 53~847
Ori: 1,172~1,760
CMV enhancer: 1,861~2,240
CMV promoter: 2,241~2,444
 
T7 promoter sequence: 2,489~2,505
Transcription start sequence (AGG): 2,506~2,508
5’UTR: 2,509~2,559
Upstream In-Fusion region (15 bp): 2,545~2,559
 
In-Fusion cloning site (linearized site): between 2,559 and 2,560
 
Downstream In-Fusion region (15 bp): 2,560~2,574
3’UTR: 2,560~2,672
Poly(A)105: 2,673~2,777
Restriction enzyme sites for plasmid linearization: 2,776~2,801(Hind III, Xho I, Sal I, Avr II, BamH I)
 
Poly(A) Forward Primer: 2,570~2,589
Poly(A) Reverse Primer: 2,863~2,882
 
<T7启动子后序列的详细信息>
mRNA体外转录试剂盒Takara IVTpro&trade; mRNA Synthesis System
 
■ 载体信息 Positive Control Template(FLuc)
序列信息(fasta格式):点此进行下载
 
Positive Control Template(FLuc)(4,574 bp)
mRNA体外转录试剂盒Takara IVTpro&trade; mRNA Synthesis System
 
NeoR/KanR: 193~987
Ori: 1,312~1,900
CMV enhancer: 2,001~2,380
CMV promoter: 2,381~2,584
 
T7 promoter sequence: 2,629~2,645
Transcription Start Sequence (AGG): 2,646~2,648
5’UTR: 2,649~2,699
FLuc CDS: 2,700~4,352
3’UTR: 4,353~4,465
Poly(A)105: 4,466~4,570 (FLuc Control Fragment-derived sequence: 2,685~4,367)
 
Linearized site by Hind III (5′ overhangs) : 4,569 (4,573)
mRNA体外转录试剂盒Takara IVTpro&trade; mRNA Synthesis System
 
<T7启动子后序列的详细信息>
mRNA体外转录试剂盒Takara IVTpro&trade; mRNA Synthesis System
 
 

页面更新:2024-01-25 14:29:42

mRNA体外转录专用载体Template Vector (BspQ I) for T7 mRNA Synthesis酶试剂盒Takara Clontech

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mRNA体外转录专用载体Template Vector (BspQ I) for T7 mRNA Synthesis
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara 6146 Template Vector (BspQ I) for T7 mRNA Synthesis 10 μl ¥618 mRNA体外转录专用载体Template Vector (BspQ I) for T7 mRNA Synthesis mRNA体外转录专用载体Template Vector (BspQ I) for T7 mRNA Synthesis mRNA体外转录专用载体Template Vector (BspQ I) for T7 mRNA Synthesis
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Template Vector (BspQ I) for T7 mRNA Synthesis用于制备Poly(A)尾区域无冗余序列的mRNA
· 用于构建mRNA体外转录模板质粒的载体
· 使用IIS型限制性内切酶BspQ I可得到Poly(A)尾区域无冗余序列的线性化模板,能够提高mRNA的翻译效率
· 与In-Fusion® Snap Assembly Master Mix结合使用,可轻松快速地进行克隆
 
■ 制品说明
Template Vector (BspQ I) for T7 mRNA Synthesis是用于使用TriLink 公 司 的 帽 类 似 物 [CleanCap Reagent AG 或 CleanCap Reactive AG(3’OMe)]构建体外转录 (IVT)mRNA的模板质粒。线性化的载体中包含T7启动子、转录起始序列(AGG)、5’-UTR(untranslated region)和3’-UTR、Poly(A)序列(141碱基),因此只需要对目标基因编码序列(Coding sequence: CDS)进行In-Fusion无缝克隆,便可构建体外转录的模板质粒(图1)。随后用IIS型限制酶BspQ I消化,得到的线性化质粒模板用于合成Poly(A)尾无冗余序列的mRNA(图2),获得的mRNA可用于人类、小鼠或其他哺乳动物细胞。使用线性化的模板质粒,通过Takara IVTpro T7 mRNA Synthesis Kit(Code No. 6144)进行体外转录(IVT),即可便捷地制备高产量的mRNA。
关于模板质粒的设计和方案的细节,请结合本产品的数据,参考Cloning Kit for mRNA Template(Code No. 6143)的使用说明书。
mRNA体外转录专用载体Template Vector (BspQ I) for T7 mRNA Synthesis
 
mRNA体外转录专用载体Template Vector (BspQ I) for T7 mRNA Synthesis
图2:Linearized Template Vector (BspQ I)的BspQ I酶切位点周围序列、线性化后的末端结构和IVT RNA序列图像
Type IIS限制酶BspQ I的识别序列(红框)和切割位点(蓝箭头)。切割位点位于识别序列的外侧。
通过在BspQ I处进行切割,可以制备Poly(A)尾区域无冗余序列的mRNA合成模板。
 
■ 用途
制备Poly(A)尾区域无冗余序列的mRNA合成模板
 
■ 制品内容
Linearized Template Vector (BspQ I)(50 ng/μl) 10 μl
FLuc Control Fragment (BspQ I)(100 ng/μl) 10 μl
 
■ 使用注意
· 构建质粒模板时,需要In-Fusion无缝克隆试剂。请购买In-Fusion Snap Assembly Master Mix(Code No. 638943/638944/638947~638949)。
· 关于模板质粒的设计和方案细节,请参阅Cloning Kit for mRNA Template (Code No. 6143)的使用说明书。此时,请确认想要克隆的目标基因的CDS序列中不存在BspQ I位点。若出现BspQ I位点存在于CDS中的情况,为确保氨基酸序列不会发生变化,可以通过使用不同的密码子(例:从丙氨酸密码子的“GCU”变为“GCC”等)来改变DNA序列。
· 当dsDNA模板、试剂、试管或微量移液器枪头被RNase污染时,合成的RNA产量会降低或者出现片段化。在实验过程中应采取预防措施以避免RNase污染,例如戴一次性手套和使用专门用于RNA实验的试管和微量移液器枪头。
 
■ 保存
-20℃
 
■ 试剂盒以外的其它必要试剂(主要试剂)
· In-Fusion Snap Assembly Master Mix(Code No. 638943/638944/638947~638949)
· 感受态细胞
  E. coli HST08 Premium Competent Cells(Code No. 9128)
  Takara Stable Competent Cells(Code No. 9132)等
· SOC培养基
· LB (luria bertani)培养基
· LB /卡那霉素(50 μg/ml)平板
 
■ 序列信息
· Linearized Template Vector (BspQ I) :2,962 bp
序列信息(fasta格式):点此进行下载
· FLuc Control Fragment (BspQ I) :1,683 bp
序列信息(fasta格式):点此进行下载
 
■ 载体信息Linearized Template Vector (BspQ I)
 
mRNA体外转录专用载体Template Vector (BspQ I) for T7 mRNA Synthesis
 
NeoR/KanR: 53~847
Ori: 1,172~1,760
CMV enhancer: 1,861~2,240
CMV promoter: 2,241~2,444
 
T7 promoter sequence: 2,489~2,505
Transcription start sequence (AGG): 2,506~2,508
5’UTR: 2,509~2,559
Upstream In-Fusion region (15 bp): 2,545~2,559
 
In-Fusion cloning site (linearized site): between 2,559 and 2,560
 
Downstream In-Fusion region (15 bp): 2,560~2,574
3’UTR: 2,560~2,672
Poly(A)141 : 2,673~2,813
BspQI: 2,810
 
Poly(A) Forward Primer: 2,570~2,589
Poly(A) Reverse Primer: 2,904~2,923
 
<T7启动子序列后的详细信息>
mRNA体外转录专用载体Template Vector (BspQ I) for T7 mRNA Synthesis
 
 

页面更新:2024-03-21 09:40:52

甲基化酶mRNA Cap 2’-O-Methyltransferase酶试剂盒Takara Clontech

上海金畔生物科技有限公司代理Takara酶试剂盒全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

甲基化酶mRNA Cap 2’-O-Methyltransferase
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara 2470A mRNA Cap 2′-O-Methyltransferase 2,500 U ¥705 甲基化酶mRNA Cap 2’-O-Methyltransferase 甲基化酶mRNA Cap 2’-O-Methyltransferase 甲基化酶mRNA Cap 2’-O-Methyltransferase
Takara 2470B(A×4) mRNA Cap 2′-O-Methyltransferase 10,000 U ¥2,679 甲基化酶mRNA Cap 2’-O-Methyltransferase 甲基化酶mRNA Cap 2’-O-Methyltransferase 甲基化酶mRNA Cap 2’-O-Methyltransferase
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■ 制品内容(Code No. 2470A)甲基化酶mRNA Cap 2’-O-Methyltransferase
mRNA Cap 2’-O-Methyltransferase (50 U/μl) 2,500 U  
10× Capping Buffer 100 μl  
S-adenosylmethionine (SAM) (32 mM) 100 μl  
 
■ 制品说明
mRNA Cap 2’-O-Methyltransferase是一种来源于牛痘病毒的甲基化酶,该酶特异性地甲基化5’端具有7-甲基鸟苷酸结构的Cap-0 RNA第一个核苷酸的2’-O,从而产生Cap 1 RNA。
已知Cap-1 RNA有助于抑制体内先天免疫应答并促进翻译。该产品还包括反应缓冲液和作为甲基供体的S-adenosylmethionine (SAM),可以把Cap 0 高效的转化成Cap 1 RNA。此外,和Vaccinia Capping Enzyme (Code No. 2460A/B)一起使用,可以经一步反应把未加帽的RNA(5’-三磷酸RNA)加帽生成Cap 1 RNA。
 
■ 用途
Cap 1 mRNA的制备
 
■ 保存
-20℃
 
■ 来源
Escherichia coli carrying a plasmid containing the gene for vaccinia virus mRNA cap 2’-O-methyltransferase
 
■ 性质
分子量:约40 kDa
 
■ 活性定义
37℃条件下,1小时内甲基化10 pmol Cap 0 RNA所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。
 
■ 使用注意
1. 混匀时,不要剧烈振荡。
2. 如果试剂、试管或微量移液器吸头被RNase污染,就会导致RNA产量减少或降解。在实验过程中应采取预防措施以避免RNase污染,如戴一次性手套以及使用专用于RNA实验的试管及微量移液器吸头。
 
 

页面更新:2024-04-01 15:52:26

NEBNext® 高输入量 Poly(A) mRNA 分离模块 #E3370S 24 次反应-NEB酶试剂 New England Biolabs

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs(NEB)酶试剂全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品资料 – 用于二代测序的 NEBNext® 试剂 – 适用于所有测序平台/模块和酶

NEBNext® 高输入量 Poly(A) mRNA 分离模块                              收藏

货 号
规 格
价 格(元)
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上海库存
广州库存
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#E3370S
24 次反应
5,939.00

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产品特点:

高输入量:5 – 50 µg 总 RNA(不含 DNA)

较小体积的洗脱液
更快速的实验流程
自动化兼容
 

概述:

 NEBNext® 高输入量 Poly(A) mRNA 分离模块可以从高输入量(每 0.2 ml 反应含 5 – 50 µg)的已分离的总 RNA 中提取完整的 poly(A)+ RNA。该技术的原理是将 Oligod(T)25 与顺磁性磁珠偶联后,以此为固相支持物直接结合 poly(A)+ RNA。利用此方法可以进行多个样本的手动处理,也适用于自动化高通量应用。此外,磁性分离技术可得到较小体积的完整 RNA 洗脱液,不需要再从洗脱液中沉淀 poly(A)+ RNA。因此在 1 小时内就能分离得到体现原始样品中 mRNA 种群特性的完整 poly(A)+ RNA。

起始量低于 5 µg 时,推荐使用 NEBNext® Poly(A) mRNA 磁性分离模块(NEB #E7490)
 

产品描述:

 NEBNext® 高输入量 Poly(A) mRNA 分离模块                               #E3370S 24 次反应

针对不同起始量样本,NEBNext® 高输入量 Poly(A) mRNA 分离模块均可提供一致的表达水平

A.使用 NEBNext® 高输入量 Poly(A) mRNA 分离模块从 50 μg 或 5 μg 含有 ERCC RNA 和 Spike-In RNA Variants (SIRV Set 4, Lexogen®)的总通用人类参考(UHR)RNA(Agilent®)中富集 Poly(A) RNA。使用 Qubit® RNA High Sensitivity Assay Kit(Invitrogen®)评估总产量。Poly(A) RNA 通常约占总 RNA 的 1 – 5%。
B.使用 Agilent 的 Bioanalyzer® 分别追踪以下三种 RNA:总 UHR RNA、从 50 μg 起始总 RNA 中富集到的 poly(A) RNA 和从 5 μg 起始总 RNA 中富集到的 poly(A) RNA。
C.以 40 ng(50 μg 起始量)或 8 ng(5 μg 起始量)经 poly(A) 富集后的 RNA 为样本,使用 NEBNext® Ultra II RNA 链特异性文库制备试剂盒制备文库后在 Illumina® NextSeq® 550 平台进行测序并测定转录本丰度。每个文库抽取 600 万 Reads。
 NEBNext® 高输入量 Poly(A) mRNA 分离模块                               #E3370S 24 次反应
 
针对不同的起始样本类型,使用 NEBNext® 高输入量 Poly(A) mRNA 分离模块后残留的核糖体 RNA 均很低
使用 Dynabeads® mRNA Purification Kit(Invitrogen)、Poly(A) Purist™ MAG (Invitrogen) 和 NEBNext® 高输入量 Poly(A) mRNA 分离模块分别从 50 μg 人类通用参考 RNA(UHR, Agilent)、小鼠肾脏组织总 RNA 和酿酒酵母(酵母)总 RNA 中富集 Poly(A) RNA。小鼠肾脏组织总 RNA 和酿酒酵母(酵母)总 RNA 提取采用 Monarch® Total RNA Miniprep Kit。
A.总 RNA 和 poly(A) 富集 RNA 的代表性 Bioanalyzer 结果。
B.通过三次重复(UHR 和 小鼠 poly(A) 样本)和两次重复(总 RNA 和酵母 poly(A) RNA 样本)测序实验确定总 RNA 和 poly(A) 富集 RNA 样本中核糖体 RNA(rRNA)所占百分比,并计算标准偏差。以 40 ng poly(A) 富集 RNA 为样本,使用 NEBNext® Ultra™ II RNA 链特异性文库制备试剂盒制备文库后在 Illumina® NextSeq® 550 平台进行测序。每个文库抽取 600 万 Reads。
 NEBNext® 高输入量 Poly(A) mRNA 分离模块                               #E3370S 24 次反应
使用 NEBNext® 高输入量 Poly(A) mRNA 分离模块提取的 RNA,可以为 nanopore 测序制备更高产量、更高 mapping 率的文库
以使用推荐方法从人类通用参考 RNA(UHR)中富集的 400 ng Poly(A) RNA 作为起始样本,在 GridION® 测序仪(Oxford Nanopore Technologies®)上进行 Direct RNA 测序(ONT #SQK-RNA002)。以使用推荐方法从人类通用参考 RNA(UHR)中富集的 100 ng Poly(A) RNA 作为起始样本,在 GridION® 测序仪上进行 Direct cDNA 测序(ONT #SQK-DCS109)。
A.使用 Qubit dsDNA High Sensitivity Assay Kit (Invitrogen) 评估文库产量;图示为带有标准偏差的重复结果的平均值。
B.图示为 Direct RNA 和 Direct cDNA 测序重复样本的平均 mapping 率,带有标准偏差。
 NEBNext® 高输入量 Poly(A) mRNA 分离模块                               #E3370S 24 次反应
 
使用 NEBNext® 高输入量 Poly(A) mRNA 分离模块,可以为 direct RNA 和 cDNA 测序提供高质量的起始 poly(A) mRNA
以使用 NEBNext® 高输入量 Poly(A) mRNA 分离模块从 UHR RNA 中富集的 poly(A) RNA 为起始样本制备文库,随后在 Nanopore Technologies 平台进行 Direct RNA (A) 和 Direct cDNA (B) 测序,图中所示为前 1000 个转录本 5´➝3´ 的转录本覆盖度。

 

NEBNext Poly(A) mRNA 磁性分离模块 #E7490L 96 次反应-NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – 用于二代测序的 NEBNext® 试剂 – 适用于所有测序平台/模块和酶

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#E7490L
96 次反应
3,299.00

#E7490S
24 次反应
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概述

NEBNext Poly(A) mRNA 磁性分离模块可以从分离的总 RNA 中提取完整的 poly(A)+ RNA。这个技术的原理是将 Oligod(T)25 与 1 μm 顺磁性磁珠偶联后,以此为固相支持物直接结合 poly(A)+ RNA。利用此方法可以进行多个样本的分离,也适用于自动化高通量分离。此外,磁性分离技术可得到较小体积的完整 RNA 洗脱液,不需要再从洗脱液中沉淀 poly(A)+ RNA。因此在 1 小时内就能分离得到体现原始样品中 mRNA分布特性的完整 poly(A)+ RNA。 

mRNA 磁性分离模块包括

– NEBNext Oligo d(T)25 磁珠

– NEBNext RNA 结合缓冲液(2X)

– NEBNext 洗脱缓冲液

– 无核酸酶污染的水
– NEBNext Tris 缓冲液 

NEBNext RNA 文库制备试剂——订购信息

NEBNext Poly(A) mRNA 磁性分离模块                               #E7490L 96 次反应

NEBNext Poly(A) mRNA 磁性分离模块                               #E7490L 96 次反应

RNA限制酶mRNA Interferase™ -MazF酶试剂盒Takara Clontech

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RNA限制酶mRNA Interferase -MazF
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara 2415A mRNA Interferase -MazF 1,000 U ¥2,063
¥1547
RNA限制酶mRNA Interferase&trade; -MazF RNA限制酶mRNA Interferase&trade; -MazF RNA限制酶mRNA Interferase&trade; -MazF

*红字为促销价格,促销时间: 2024年3月1日-2024年4月30日

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■ 制品内容
mRNA Interferase-MazF(20 U/μl) 1,000 U
5X MazF Buffer 1 ml
   
 
■ 制品说明
MazF是E. coli 毒素-抗毒素系统中的毒素蛋白,特异性切断单链RNA中ACA序列5’末端的核酸内切酶,不能切断双链RNA、双链DNA及单链DNA。本制品mRNA Interferase-MazF是E. coli 来源的MazF和E. coli来源的伴侣蛋白质基因Trigger factor的融合蛋白质。 
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 5X MazF Buffer组成
  200 mM   Sodium phosphate, pH7.5
  0.05%   Tween 20
 
■ 用途
限定消化ssRNA。 
 
■ 注意事项
1. 本酶特异性切断含ACA序列的ssRNA,但是也会受AC位点两侧序列的影响可能切断AC位点。
2. 本酶不能切断dsRNA。因此,由于RNA二级结构的影响,本酶不能切断所有的ACA位点序列。
3. 在反应液中添加盐,特别是Mg2+等二价阳离子时,本酶的活性会受到抑制。DTT不影响反应液中的酶活性。
4. 本酶切断的片段不能使用RNA Ligase直接进行连接反应,因为片段的两个末端分别是2’, 3’-cyclic phosphate和5’-OH。
 
 

页面更新:2024-01-25 14:49:24

NEBNext Poly(A) mRNA 磁性分离模块 #E7490L 96 次反应-NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – RNA 试剂 – 二代测序 RNA 文库制备试剂

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概述

NEBNext Poly(A) mRNA 磁性分离模块可以从分离的总 RNA 中提取完整的 poly(A)+ RNA。这个技术的原理是将 Oligod(T)25 与 1 μm 顺磁性磁珠偶联后,以此为固相支持物直接结合 poly(A)+ RNA。利用此方法可以进行多个样本的分离,也适用于自动化高通量分离。此外,磁性分离技术可得到较小体积的完整 RNA 洗脱液,不需要再从洗脱液中沉淀 poly(A)+ RNA。因此在 1 小时内就能分离得到体现原始样品中 mRNA分布特性的完整 poly(A)+ RNA。 

mRNA 磁性分离模块包括

– NEBNext Oligo d(T)25 磁珠
– NEBNext RNA 结合缓冲液(2X)
– NEBNext 洗脱缓冲液
– 无核酸酶污染的水
– NEBNext Tris 缓冲液  

NEBNext RNA 文库制备试剂——订购信息

NEBNext Poly(A) mRNA 磁性分离模块                               #E7490L 96 次反应

NEBNext Poly(A) mRNA 磁性分离模块                               #E7490L 96 次反应


单细胞RNA测序-SMART-Seq mRNA LP & SMART-Seq mRNA酶试剂盒Takara Clontech

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单细胞RNA测序-SMART-Seq mRNA LP & SMART-Seq mRNA
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 634768 SMART-Seq mRNA LP 24 Rxns ¥18,634 单细胞RNA测序-SMART-Seq mRNA LP & SMART-Seq mRNA 单细胞RNA测序-SMART-Seq mRNA LP & SMART-Seq mRNA 单细胞RNA测序-SMART-Seq mRNA LP & SMART-Seq mRNA
Clontech 634769 SMART-Seq mRNA LP 96 Rxns ¥63,356 单细胞RNA测序-SMART-Seq mRNA LP & SMART-Seq mRNA 单细胞RNA测序-SMART-Seq mRNA LP & SMART-Seq mRNA 单细胞RNA测序-SMART-Seq mRNA LP & SMART-Seq mRNA
Clontech 634771 SMART-Seq mRNA LP 4 x 96 Rxns ¥228,082 单细胞RNA测序-SMART-Seq mRNA LP & SMART-Seq mRNA 单细胞RNA测序-SMART-Seq mRNA LP & SMART-Seq mRNA 单细胞RNA测序-SMART-Seq mRNA LP & SMART-Seq mRNA
Clontech 634772 SMART-Seq® mRNA 24 Rxns ¥15,791 单细胞RNA测序-SMART-Seq mRNA LP & SMART-Seq mRNA 单细胞RNA测序-SMART-Seq mRNA LP & SMART-Seq mRNA 单细胞RNA测序-SMART-Seq mRNA LP & SMART-Seq mRNA
Clontech 634773 SMART-Seq® mRNA 96 Rxns ¥53,691 单细胞RNA测序-SMART-Seq mRNA LP & SMART-Seq mRNA 单细胞RNA测序-SMART-Seq mRNA LP & SMART-Seq mRNA 单细胞RNA测序-SMART-Seq mRNA LP & SMART-Seq mRNA
Clontech 634770 SMART-Seq® mRNA 4 x 96 Rxns ¥193,290 单细胞RNA测序-SMART-Seq mRNA LP & SMART-Seq mRNA 单细胞RNA测序-SMART-Seq mRNA LP & SMART-Seq mRNA 单细胞RNA测序-SMART-Seq mRNA LP & SMART-Seq mRNA
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可靠的单细胞/微量样本的mRNA全长分析
SMART-Seq mRNA LP & SMART-Seq mRNA
· 高灵敏度 — 起始量:1-1000个细胞或10 pg-100 ng总RNA
· 高质量的RNA-Seq数据 — 高基因检出数,支持分析转录本异构体、融合基因、点突变等
· 单管操作流程 — SMART-Seq mRNA LP包含完整的cDNA合成和文库构建流程,分别在单管中进行,减少样品损失与混淆,降低手动操作误差
· 增强的测序性能 — SMART-Seq mRNA LP可搭配整合双端特殊index(UDI),构建Illumina测序文库
· 完整的流程 — 搭配特别开发的Cogent™ NGS Analysis Pipeline (CogentAP) Cogent NGS Discovery Software (CogentDS)完成测序数据分析。
 
■ 产品说明:
SMART-Seq mRNA LP和SMART-Seq mRNA,这两个试剂盒是Takara经典的SMARTer Ultra low系列。它们都是使用oligo(dT)引物起始,优化用于从10 pg-100 ng的高品质total RNA(RIN≥8)或1-1000个完整细胞的全长转录组分析。

SMART-Seq mRNA是基于SMART技术(Switching Mechanism at 5′ End of RNA Template)优化改良,用于微量RNA或少量细胞cDNA合成的试剂盒,提供全长转录本信息,支持分析转录本异构体、融合基因、点突变等。另外,TSO中整合了LNA(locked nucleic acid)技术,提升了模板转换效率,能获得更高的再现性、更均一的gene body覆盖度,高GC含量转录本也能得到正确分析。

SMART-Seq mRNA LP在包含核心的cDNA合成试剂基础上,采用Takara Bio Group专利性的文库构建技术(U.S. Patents 7,803,550, 8,399,199, 8,728,737, 9,598,727, 10,196,686, 10,208,337, 和11,072,823),利用特别的茎环形接头构建高品质Illumina文库。另外,搭配使用的双端特殊index(UDI),可以提供完整的从样品到cDNA合成到文库构建的实验体验。同时搭配特别开发的Cogent NGS生物信息学分析软件,能直接对下机数据进行分析(*科研及盈利机构在用该试剂盒建库后,均可免费使用Cogent NGS分析测序数据!)

如果对上述特点感兴趣,并正在使用完整的、高质量的单细胞,推荐使用SMART-Seq Single Cell PLUS Kit

如果是降解样本,选择随机引物起始,推荐使用:SMART-Seq® Stranded Kit

 
■ 流程概要:
单细胞RNA测序-SMART-Seq mRNA LP & SMART-Seq mRNA
 
注意SMART-Seq mRNA LP和SMART-Seq mRNASMART-Seq v4 PLUSSMART-Seq v4 Ultra Low Input RNA Kit for Sequencing的等效替代品,只有如下细微变动,本次更新并不影响这些试剂盒的流程和性能。
 
· SeqAmp CB PCR buffer替代SeqAmp PCR buffer,以改善核酸纯化过程磁珠-沉淀物形成。
· 不再包含Afa I, 10X Afa I Buffer和0.1% BSA(因为在protocol中未使用)
· 样本的起始范围从10 pg~10 ng扩展到10 pg~100 ng total RNA
· 更灵活的选择:SMART-Seq mRNA LP试剂盒中不包含index,但也可以与Unique Dual Index (UDI) kits搭配使用
 
 
产品详情请点击:单细胞RNA测序-SMART-Seq mRNA LP & SMART-Seq mRNA
 
 
 

 

页面更新:2023-07-04 16:13:24

单细胞/微量样本mRNA全长分析SMART-Seq mRNA HT LP & SMART-Seq mRNA HT酶试剂盒Takara Clontech

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单细胞/微量样本mRNA全长分析SMART-Seq mRNA HT LP & SMART-Seq mRNA HT
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 634792 SMART-Seq® mRNA HT LP 24 Rxns ¥9,799 单细胞/微量样本mRNA全长分析SMART-Seq mRNA HT LP  & SMART-Seq mRNA HT 单细胞/微量样本mRNA全长分析SMART-Seq mRNA HT LP  & SMART-Seq mRNA HT 单细胞/微量样本mRNA全长分析SMART-Seq mRNA HT LP  & SMART-Seq mRNA HT
Clontech 634793 SMART-Seq® mRNA HT LP 96 Rxns ¥39,031 单细胞/微量样本mRNA全长分析SMART-Seq mRNA HT LP  & SMART-Seq mRNA HT 单细胞/微量样本mRNA全长分析SMART-Seq mRNA HT LP  & SMART-Seq mRNA HT 单细胞/微量样本mRNA全长分析SMART-Seq mRNA HT LP  & SMART-Seq mRNA HT
Clontech 634794 SMART-Seq® mRNA HT LP 4×96 Rxns ¥145,460 单细胞/微量样本mRNA全长分析SMART-Seq mRNA HT LP  & SMART-Seq mRNA HT 单细胞/微量样本mRNA全长分析SMART-Seq mRNA HT LP  & SMART-Seq mRNA HT 单细胞/微量样本mRNA全长分析SMART-Seq mRNA HT LP  & SMART-Seq mRNA HT
Clontech 634795 SMART-Seq® mRNA HT 24 Rxns ¥8,007 单细胞/微量样本mRNA全长分析SMART-Seq mRNA HT LP  & SMART-Seq mRNA HT 单细胞/微量样本mRNA全长分析SMART-Seq mRNA HT LP  & SMART-Seq mRNA HT 单细胞/微量样本mRNA全长分析SMART-Seq mRNA HT LP  & SMART-Seq mRNA HT
Clontech 634796 SMART-Seq® mRNA HT 96 Rxns ¥30,839 单细胞/微量样本mRNA全长分析SMART-Seq mRNA HT LP  & SMART-Seq mRNA HT 单细胞/微量样本mRNA全长分析SMART-Seq mRNA HT LP  & SMART-Seq mRNA HT 单细胞/微量样本mRNA全长分析SMART-Seq mRNA HT LP  & SMART-Seq mRNA HT
Clontech 634791 SMART-Seq® mRNA HT 4×96 Rxns ¥112,682 单细胞/微量样本mRNA全长分析SMART-Seq mRNA HT LP  & SMART-Seq mRNA HT 单细胞/微量样本mRNA全长分析SMART-Seq mRNA HT LP  & SMART-Seq mRNA HT 单细胞/微量样本mRNA全长分析SMART-Seq mRNA HT LP  & SMART-Seq mRNA HT
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SMART-Seq mRNA HT LP & SMART-Seq mRNA HT
◆ 自动化友好型 – 兼容自动化工作站,更少的时间分析更多的样本
◆ 高灵敏度 – 可以从单细胞或10 pg总RNA起始(起始量:1-100个细胞或10 pg-1 ng总RNA)
◆ 高质量的RNA-Seq数据 – 保留全长基因信息,低rRNA比率,高基因检出数,有效扩增GC-rich转录本
◆ 单管操作流程 – SMART-Seq mRNA HT包含完整的cDNA合成和文库构建流程,分别在单管中进行,减少样品损失与混淆,降低手动操作误差
◆ 增强的测序性能 – SMART-Seq mRNA HT搭配使用整合双端特殊index(UDI),即便多个文库pool后用高通量型Illumina测序仪(如Novaseq)分析,也能得到正确结果
◆ 更高的文库产量 – 更便于使用高通量型Illumina测序仪测序(如Novaseq),或保存剩余的文库用于多次测序

 

■ 产品说明:
SMART-Seq mRNA HTSMART-Seq mRNA HT LP均兼容自动化移液工作站,采用oligo(dT)引物,支持1-100个细胞或10 pg-1 ng总RNA起始,合成高品质的全长cDNA。SMART-Seq mRNA HT包含核心cDNA合成试剂,SMART-Seq mRNA HT LP在此基础上,同时包含文库构建试剂,并且搭配Unique Dual Index kits(单独购买)使用,最多可以制备384个Illumina测序文库。
SMART-Seq mRNA HT具有简化的操作流程,可用于FACS下游,并且由于引入了一步RT-PCR扩增步骤,从而减少了手动操作时间。本试剂的核心技术-SMART技术(Switching Mechanism at 5′ End of RNA Template),是一种对全转录组研究,以及包括细胞内剪接位点、可变剪接研究的强大的工具,并且可以检测全长基因。Oligo(dT)可用于从高品质总RNA(RIN> 8)或完整细胞中特异性扩增mRNA。通过采用LNA技术,提升了模板转换的效率与基因检出数等性能。
SMART-Seq mRNA HT LP在包含核心的cDNA合成试剂基础上,同时整合了文库构建技术,提供完整的单细胞cDNA合成到文库构建的实验体验。建库试剂中包含片段化酶,以实现对合成cDNA的片段化,接着利用特别的茎环形接头构建高品质Illumina文库。在建库阶段,单管两步操作、过程中无需纯化、2 h即可建成文库!
如果是以随机引物起始,对少量细胞或者降解的Total RNA样本进行RNA-Seq分析时,推荐使用SMART-Seq Stranded Kit。
 
■ 实验流程概要:
单细胞/微量样本mRNA全长分析SMART-Seq mRNA HT LP  & SMART-Seq mRNA HT
图1. SMART-Seq mRNA HT LP的技术流程
 
■ 数据展示:
注:SMART-Seq mRNA HT LP和SMART-Seq mRNA HT是SMART-Seq HT PLUS Kit和SMART-Seq HT Kit的等效替代品。
以下展示来源于SMART-Seq HT Kit和 SMART-Seq HT PLUS Kit的数据。
 
SMART-Seq HT有更简洁的操作流程
单细胞/微量样本mRNA全长分析SMART-Seq mRNA HT LP  & SMART-Seq mRNA HT
图2. SMART-Seq v4和SMART-Seq HT工作流程的比较
 
SMART-Seq HT(右)是由SMART-Seq v4方法(左)改进而来的一个手动操作时间更短的高通量工作流程。使用FACS方法获得单细胞,SMART-Seq HT试剂盒只需3个操作步骤即可制备cDNA,而SMART-Seq v4试剂盒需要6步。SMART-Seq HT工作流程的一个重要步骤是一步RT-PCR,即使用一步RT-PCR缓冲液,进行高效的反转录和PCR扩增cDNA的过程。
 
SMART-Seq HT和SMART-Seq v4之间的基因表达分析比较
  Sequencing metrics comparing SMART-Seq v4 and SMART-Seq HT kits
  RNA source 10 pg Mouse Brain Total RNA
  cDNA synthesis SMART-Seq v4 SMART-Seq HT
  Replicate A B C A B C
  Yield (ng) 7.3 8.5 9.4 9.5 9.9 9.2
  Number of
  transcripts
14,168 13,934 14,147 14,510 14,650 14,553
11,455 11,267 11,349 11,582 11,670 11,454
  Number of
  transcripts
14,168 13,934 14,147 14,510 14,650 14,553
  Average
  Pearson/Spearman
0.97/0.67 0.97/0.68
0.96/0.66
  Proportion of reads mapped (%)
  rRNA 0.7 0.6 0.5 1.1 1.1 1.1
  Mitochondria 2.8 4.2 4.1 3.7 3.8 4.2
  Genome 92.3 90.8 86.6 89.1 89.0 87.8
  Exons 74.8 72.5 69.0 67.3 67.1 65.3
  Introns 13.3 14.1 13.3 16.9 16.9 17.4
  Intergenic regions 4.2 4.2 4.4 4.9 5.0 5.2
 
分别使用SMART-Seq v4和SMART-Seq HT从10 pg小鼠脑总RNA制备cDNA后,使用Illumina的Nextera XT DNA Sample Prep Kit制备文库,之后在NextSeq上进行测序(2 x 75 bp)。结果显示,使用SMART-Seq v4和SMART-Seq HT试剂盒鉴定的转录本高度重叠。
 
从高灵敏度、高重复性的cDNA合成出发,构建更高品质Illumina文库
单细胞/微量样本mRNA全长分析SMART-Seq mRNA HT LP  & SMART-Seq mRNA HT
(比较数据来源于Takara Bio USA, Inc.)
 
Takara科学家从10 pg小鼠脑total RNA起始,采用SMART-Seq HT完成cDNA合成。随后分别使用SMART-Seq Library Prep Kit(SSlp)与市面上较常用的A公司试剂盒构建文库,并比较性能差异。
从测试数据中可以看出,SS-HT PLUS Kit所建文库的产量是A公司Kit产量的5倍,而更高的文库产量更适于高通量型Illumina测序仪,如Novaseq。
两种方法所建文库随后用Nextseq 500完成测序,并对TPM(Transcripts per million)≥0.1的基因数进行统计。SS-HT PLUS文库能比A公司文库多检出10%的基因,从同样的cDNA起始能“捕获”更全的信息!
 
产品详情请点击:单细胞/微量样本mRNA全长分析SMART-Seq mRNA HT LP  & SMART-Seq mRNA HT
 
 

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