WarmStart® Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶 (UDG) #M1282S 200 units-NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 修复蛋白

WarmStart® Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶 (UDG)                              收藏

WarmStart® Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶 (UDG)                                     #M1282S 200 units WarmStart® Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶 (UDG)                                     #M1282S 200 units WarmStart® Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶 (UDG)                                     #M1282S 200 units WarmStart® Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶 (UDG)                                     #M1282S 200 units WarmStart® Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶 (UDG)                                     #M1282S 200 units WarmStart® Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶 (UDG)                                     #M1282S 200 units

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产品特点

 WarmStart® Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶 (UDG)                                     #M1282S 200 units

·   闪烁古生球菌(Archaeoglobus fulgidus)尿嘧啶-DNA 糖基酶

·   该酶为耐热单功能 DNA 糖基酶,从含尿嘧啶的 DNA 上催化释放尿嘧啶,能有效地水解双链和单 DNA 上的尿嘧啶

·   WarmStart 技术抑制酶在42°C以下的活性,可用于在等温扩增反应后消除产物污染

·   从双链或单链 DNA 上切下尿嘧啶

概述

WarmStart Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶(UDG)来源于闪烁古生球菌(Archaeoglobus fulgidus),配方中加入了能够可逆结合的适配体,在低于 42℃ 条件下抑制酶活性。在 42℃ 以上具有活性,能有效地水解双链和单链 DNA 上的尿嘧啶。

产品描述

 图1.  WarmStart Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶(UDG)在低于 42℃ 的温度下未检测到活性。

 WarmStart® Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶 (UDG)                                     #M1282S 200 units

(A)Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶(UDG)(NEB #M0279)和WarmStart Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶(UDG)(NEB #M1282)的 UDG 酶活性温度曲线比较,结果显示 WarmStart在42ºC以下抑制 UDG 酶活性。在25-65ºC 的温度梯度下,分别用0.002 U Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶(UDG)或WarmStart Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶(UDG),与1.8 pmol 含有单个尿嘧啶且带有荧光标记的 47-mer 单链DNA孵育30分钟。尿嘧啶被水解后,生成的碱基缺失片段经碱裂解(1M NaOH, 85°C 10分钟)处理,再通过Applied Biosystems 3730xl Genetic Analyzer ( 96 capillary array ) 进行电泳分析。结果显示,在 65°C 时 WarmStart Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶(UDG)与Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶(UDG)活性相当,但在 25°C  时未检测到酶活性。 

(B) 在 30-45ºC 温度范围通过链置换反应技术(SDA),对 500bp 长度 λDNA
进行含有 dUTP 的扩增反应,分别在有 WarmStart Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶(UDG)(上图)、 Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶(UDG)(中图)和无 UDG(下图)的情况下进行。在没有 UDG的情况下(下图),SDA 在整个温度范围内均产生了 500 bp 的扩增条带。在含有 Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶(UDG)的反应中(中图),高于 31℃ 的温度时,SDA 反应被Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶(UDG)完全抑制。抑制的产生是由于Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶(UDG)在低温下的固有活性,将扩增子中的尿嘧啶水解产生碱基缺失位点,从而阻止其进一步扩增。然而,在 WarmStart Afu Uracil-DNA 糖基酶(UDG)存在时(上图),除了在 45℃ 左右的产物产量略有下降外,对其他温度条件下扩增几乎没有影响,这表明 WarmStart Afu Uracil-DNA 糖基酶(UDG)在 42℃ 以上才具有活性。
 
图2.  WarmStart Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶(UDG)在 65℃ 有效地消化含尿嘧啶的扩增产物。
 
WarmStart® Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶 (UDG)                                     #M1282S 200 units
 
(A)使用 WarmStart Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶(UDG)在 SDA 反应扩增后消除产物污染示意图。在不含 UDG 或者含有 WarmStart Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶(UDG)情况下,对 500bp 片段进行SDA 等温扩增,反应中含有 dUTP 底物,反应温度 34℃,在此温度下 WarmStart Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶(UDG)不发挥活性。SDA 反应后,将产物在 65℃ 孵育 20 分钟以消化产物中的尿嘧啶。含有碱基缺失的 DNA 链在碱性条件下 85ºC 孵育 10 分钟会被降解。

(B)在 65ºC 下处理 20 分钟后,不含UDG和含有 WarmStart Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶(UDG)样品的凝胶电泳结果显示,其 500 bp 扩增产物的产量相似。然后 85℃ 碱性条件下孵育 10 分钟,降解含有碱基缺失的 DNA 产物。经过处理,500 bp 的产物在不含 UDG 的反应中保持完整,而在含有 WarmStart Afu Uracil-DNA 糖基酶(UDG)的反应中变成较弱的条带或者弥散状产物。