LyoPrime Luna™ 探针一步法 RT-qPCR 预混冻干粉(含 UDG) #L4001P 96 reactions-NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – qPCR & RT-qPCR

LyoPrime Luna™ 探针一步法 RT-qPCR 预混冻干粉(含 UDG)                              收藏

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产品特点

 LyoPrime Luna 探针一步法 RT-qPCR 预混冻干粉(含 UDG)用于灵敏检测靶标 RNA,可在室温条件下稳定保存。该冻干剂型与其液体剂型 [ Luna® 探针一步法 RT-qPCR 4X 预混液(含 UDG)(NEB #M3019)] 具备同样卓越的性能和功效。

· 加入无核酸酶水即可快速复溶

· 未经复溶的冻干试剂,可室温储存长达 2 年

· 无需冷链运输

· 单次检测通量多达 5 个靶标

· Luna 温启动反转录酶与 Taq 热启动 DNA 聚合酶联合使用,提高反应特异性及功效

· 优化的预混试剂中包含热敏 UDG 和 dUTP,防止模板残留污染

· 预混试剂还含有小鼠 RNase 抑制剂,可保持 RNA 的完整性

· 非荧光蓝色示踪染料避免加样错误

· 与多种 qPCR 仪器兼容,包括需要高 ROX 或低 ROX 参比信号的仪器

· New England Biolabs(简称 NEB) 和 Fluorogenics Limited(现为 NEB 的子公司)联合开发

 LyoPrime Luna™ 探针一步法 RT-qPCR 预混冻干粉(含 UDG)                               #L4001P 96 reactions

产品信息

 LyoPrime Luna™ 探针一步法 RT-qPCR 预混冻干粉(含 UDG)可在室温条件下运输和保存。仅需加入无核酶水即可快速复溶并使用。该产品适用于水解探针法实时检测靶标 RNA。经优化可同时对高达 5 个靶标进行灵敏、线性的多重检测。稳定的冻干剂型可复溶成 2X 或 4X 浓度的预混液,以满足各种上样需求。

1LyoPrime Luna 为冻干型通用 RT-qPCR 试剂,其性能卓越并可稳定保存

LyoPrime Luna™ 探针一步法 RT-qPCR 预混冻干粉(含 UDG)                               #L4001P 96 reactions

LyoPrime Luna RT-qPCR 预混冻干粉(NEB #L4001)与 Luna RT-qPCR 4X 预混液(NEB #M3019)具备相同的性能,该冻干剂型可在室温条件下运输和保存。

该预混冻干粉包含一步法 RT-qPCR 需要的所有组分,优化的缓冲液中含有 Luna 温启动反转录酶、Taq 热启动 DNA 聚合酶、dNTPs 和小鼠 RNase 抑制剂。Taq 热启动 DNA 聚合酶与新型温启动反转录酶联合使用,可通过基于适配体的可逆抑制来双重控制酶的活性。这种温控活化机制可避免热循环前的非特异扩增,可在复溶后室温建立体系。经基因工程改造的 Luna 温启动反转录酶具有更高的热稳定性,最佳反应温度为 55°C。此外,预混试剂中还添加了独特矫正染料,可与多种 qPCR 仪器兼容,包括需要高 ROX 或低 ROX 参比信号的仪器。

由于 RT-qPCR 灵敏度极高,因此避免 DNA 污染至关重要。该试剂含有热敏 UDG 和 dUTP,可防止模板残留污染(以往的扩增产物可作为后续反应的底物)。与 E.coli UDG 不同的是,热敏 UDG 在温度>50℃时可完全失活,因此对反应没有影响。

试剂包含非荧光蓝色示踪染料,可避免加样错误。该示踪染料与 qPCR 常用荧光基团的光谱没有重叠,也不会干扰实时检测。

了解冻干工艺,或咨询定制服务以满足实验需求,请访问 www.jinpanbio.cn/lyoprime。

 图 2:冻干型和液体型 Luna RT-qPCR 预混试剂具备同样优异的性能

LyoPrime Luna™ 探针一步法 RT-qPCR 预混冻干粉(含 UDG)                               #L4001P 96 reactions

A. 使用 LyoPrime Luna 探针一步法 RT-qPCR 预混冻干粉(含 UDG)(NEB #L4001) 或 Luna® 探针一步法 RT-qPCR 4X 预混液(含 UDG)(NEB #M3019) 对人 β-actin 靶标进行 RT-qPCR 检测,模板上样量为 8-log 浓度梯度(1 μg–0.1 pg Jurkat 总 RNA),每个浓度重复 4 次,使用 ABI® QuantStudio 6 Flex 仪器运行试验。反应体系(20 μl)中,引物浓度为 400 nM,探针浓度为 200 nM,反应设置为产品推荐的循环条件。B. 冻干试剂(金色)和液体试剂(蓝色)的标准曲线基本相同,即使在最低测试浓度下也展现出良好的线性度和重复性。

图 3:LyoPrime Luna 多重检测性能卓越

LyoPrime Luna™ 探针一步法 RT-qPCR 预混冻干粉(含 UDG)                               #L4001P 96 reactions

 

 使用 LyoPrime Luna 探针一步法 RT-qPCR 预混冻干粉(含 UDG)对 6-log 浓度梯度的 Jurkat 总 RNA(1 μg-10 pg)进行多重 RT-qPCR,实验仪器为 Bio-Rad CFX96 荧光定量仪。结果显示了 5 个人源靶基因的扩增标准曲线和扩增效率。反应体系(20 μl)中,引物和探针浓度均为 200 nM,反应设置为产品推荐的循环条件。在该多重反应中,5 个靶标均检测到良好的线性度、扩增效率和 R2 值。

图 4:LyoPrime Luna 冻干剂型与其液体剂型性能一致,且优于其它品牌

LyoPrime Luna™ 探针一步法 RT-qPCR 预混冻干粉(含 UDG)                               #L4001P 96 reactions

两位实验人员按照操作说明书,使用市售冻干 RT-qPCR 试剂分别对 8 个不同丰度、长度和 GC 含量的靶标(通过不同颜色显示)进行一步法 RT-qPCR 测试。反应结果就以下方面进行评估:扩增效率、低样品量检测能力及无模板扩增值(ΔCq=无模板对照的平均 Cq-最低起始量的平均 Cq)。此外,还评估了扩增结果的一致性、可重复性和总体曲线质量。结果显示:LyoPrime Luna™ 探针一步法 RT-qPCR 预混冻干粉(含 UDG)(NEB #L4001)与其液体剂型 Luna® 探针一步法 RT-qPCR 4X 预混液(含 UDG)(NEB #M3019)性能一致,且优于其它冻干产品,

了解 qPCR/RT-qPCR 综合测试和“dots in boxes”点阵图分析方法,请点击https://www.jinpanbio.cn/tools-and-resources/video-library/dots-in-boxes-visualization-of-qpcr-data
 
图 5:冻干型和液体型 Luna 试剂均可对 SARS-CoV-2 病毒 RNA 进行灵敏检测
 
LyoPrime Luna™ 探针一步法 RT-qPCR 预混冻干粉(含 UDG)                               #L4001P 96 reactions

 

本实验使用 Luna SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒(NEB #E3019)中的引物和探针对 2019-nCoV_N1(N1, HEX)、2019-nCoV_N2(N2, FAM)和人源 RNase P(RP, Cy5)进行多重 RT-qPCR 检测,实验仪器为 Bio-Rad® CFX384 荧光定量仪。反应体系(5 μl)中,引物浓度为 400 nM,探针浓度为 200 nM,反应设置为产品推荐的循环条件。实验样品:将 Twist 公司合成的 SARS-CoV-2 RNA 对照 2 掺入到 5 ng/μl Jurkat 总 RNA 中。LyoPrime Luna RT-qPCR 冻干剂型与其液体剂型均展示出良好的线性定量能力(对于 5 和 10 拷贝的 SARS-CoV-2 RNA,N1 和 N2 基因 40 个重复的检出率为 100%,28 个阴性对照重复均无假阳性)。在 96 孔板中测试的 20 μl 体系结果相同。

图 6:LyoPrime Luna 试剂可对不同传染病靶标进行检测和定量
 
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分别使用病毒 RNA 基因(FAM)和人源 RNase P(Cy5)靶标的引物和探针进行 RT-qPCR 实验,实验仪器为 Bio-Rad CFX96 荧光定量仪。试验样品:将 100,000-10 拷贝的 ATCC® 合成病毒 RNA(基孔肯雅病毒:VR-3246SD;2 型登革热病毒:VR-3229SD;寨卡病毒:VR-3252SD)掺入到 5 ng/μl 人源(Jurkat)总 RNA 中。每个靶标使用其对应的 ATCC 参考引物和探针序列。反应体系(20 μl)中,引物浓度为 400 nM,探针浓度为 200 nM,反应设置为产品推荐的循环条件。结果显示:LyoPrime Luna RT-qPCR 预混冻干粉对于所有靶标的线性定量和检测结果均非常理想。