阿法替尼
货号：
IA1510
品牌：
Jinpan
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产品简介
| MDL | MFCD12407405 |
| 别名 | BIBW2992;Afatinibfreebase |
| 英文名称 | Afatinib |
| CAS | 850140-72-6 |
| 分子式 | C24H25ClFN5O3 |
| 分子量 | 485.94 |
| 纯度 | ≥98% |
| 单位 | 瓶 |
| 生物活性 | Afatinib (BIBW 2992) 是不可逆的 EGFR 家族抑制剂, 抑制EGFRwt, EGFRL858R, EGFRL858R/T790M 和 HER2的 IC50 分别为0.5 nM, 0.4 nM, 10 nM 和 14 nM[1-4]。 |
| IC50 | EGFR:0.5 nM (IC50) HER2:14 nM (IC50) EGFRL858R:0.4 nM (IC50) EGFRL858R/T790M:10 nM (IC50) |
| In Vitro | 在无细胞体外激酶测定中, Afatinib (BIBW2992) dimaleate显示出对抗EGFR和HER2的野生型和突变形式的有效活性, 类似于吉非替尼对L858R EGFR的效力, 但对抗吉非替尼抗性的活性约高100倍。 L858R-T790M EGFR双突变体, IC50为10 nM。此外, BIBW2992与拉帕替尼和卡那替尼相比具有抗HER2的体外效力, IC50为14nM。该评估中最敏感的激酶是lyn, IC50为736 nM [1]。 Afatinib是这些ErbB家族受体的不可逆抑制剂。食管鳞状细胞癌 (ESCC) 细胞系对Afatinib敏感, IC50浓度在较低的微摩尔范围内 (孵育48小时：HKESC-1 = 78 nM, HKESC-2 = 115 nM, KYSE510 =3.182μM, SLMT-1 =4.625μM, EC-1 =1.489μM; 孵育72小时：HKESC-1 = 2 nM, HKESC-2 = 2 nM, KYSE510 =1.090μM, SLMT-1 =1.161μM, EC-1 = 109 nM) 最大生长抑制超过95％。 Afatinib可以剂量和时间依赖的方式强烈诱导HKESC-2和EC-1中的G0 / G1细胞周期停滞[2]。 |
| In Vivo | 一旦治疗开始, 阿法替尼 (15mg / kg) 强烈抑制HKESC-2肿瘤的生长。车辆的平均肿瘤大小和终点处理分别为348±24 mm3和108±36 mm3, 两者之间存在显着差异。显然, 在Afatinib给药结束后, 肿瘤大小不会在短时间内反弹。在整个治疗过程中体重没有快速变化表明Afatinib的毒性很小, 这种药物耐受性良好[2]。 |
| 激酶实验 | 感染后72小时, 用HEPEX (20mM HEPES pH 7.4, 100mM NaCl, 10mMβ-甘油磷酸盐, 10mM对硝基苯基磷酸盐, 30mM NaF, 从Sf9生物质中提取EGFR激酶结构域-GST融合蛋白, 5 mM EDTA, 5％甘油, 1％Triton X-100, 1 mM Na3VO4, 0.1％SDS, 0.5μg/ mL胃蛋白酶抑制剂A, 抑肽酶20 KIU / mL, Leupeptin2μg/ mL, 苯甲脒1 mM, 2.5μg/ mL 3, 4-二氯异香豆素, 2.5μg/ mL反式环氧琥珀酰基-L-亮氨酰-L-酰氨基丁烷和0.002％PMSF) 并用于测定IC 50值。每个100μL酶反应在50％Me2SO中含有10μLAfatinib (BIBW2992) , 20μL底物溶液 (200 mM HEPES pH 7.4, 50 mM Mg-acetate, 2.5 mg / mL poly (EY) , 5μg/ mL bio -pEY) 和20μL酶制剂。通过加入50μL在10mM MgCl 2中制备的100μMATP溶液开始酶促反应。测定在室温下进行30分钟, 并通过加入50μL终止溶液 (在20mM HEPES pH 7.4中的250mM EDTA) 终止。将100μL转移至链霉抗生物素蛋白包被的微量滴定板, 在室温下孵育60分钟后, 用200μL洗涤溶液 (50mM Tris, 0.05％Tween20) 洗涤板。向孔中加入100μL等份的HRPO标记的抗PY抗体 (PY20H Anti-Ptyr：HRP) 250ng / mL。孵育60分钟后, 将板用200μL洗涤溶液洗涤三次。然后用100μLTMB过氧化物酶溶液 (A：B = 1：1) 显色样品。 10分钟后停止反应。将板转移至ELISA读数器并在OD 450nm下测量消光。所有数据点一式三份执行[1]。 |
| 货期 | 1-2天 |
| SMILES | O=C(NC1=C(C=C2C(C(NC3=CC(Cl)=C(C=C3)F)=NC=N2)=C1)O[C@H]4CCOC4)/C=C/CN(C)C.[(E)] |
| 靶点 | EGFR |
| 动物实验 | 小鼠[2]使用体重约16-20克的六周龄雌性无胸腺裸鼠 (nu / nu) 。通过将HKESC-2 (重悬于50μLHBSS缓冲液中的6×104细胞) 皮下接种到裸鼠的两侧, 建立ESCC异种移植物。当肿瘤大小达到4-6mm直径时, 它们在治疗 (15mg / kg) 或载体对照组中随机化。用于治疗的阿法替尼通过在给药前溶解在0.5％甲基纤维素中来制备。通过口服强饲法将药物或媒介物以5天的时间表给予小鼠, 加上2天, 连续两周。通过用卡尺监测肿瘤大小的变化来评估药物功效。用公式肿瘤体积= (宽度2×长度) / 2计算肿瘤体积。 |
| 细胞实验 | 将人ESCC细胞系EC-1, HKESC1和HKESC2, SLMT1和KYSE510在含有10％胎牛血清 (FBS) 的RPMI中培养。使用MTT通过比色测定评估细胞毒性。将肿瘤细胞在各孔培养基中的48孔板 (每孔3000-8000个细胞) 中培养。在细胞铺板后24小时加入完全培养基中的阿法替尼, 并在37℃, 5％CO 2下培养48和72小时。细胞生长抑制表示为用酶标仪在570nm处测量的对照培养物的吸光度百分比, 并且通过GraphPad PRISM计算50％的最大生长抑制 (IC 50) 。在每个实验中, 对于每种药物浓度 (n = 3) 进行一式三份孔, 并且在三个独立实验中重复测定[2]。 |
| 数据来源文献 | [1]. Li D, et al. BIBW2992, an irreversible EGFR/HER2 inhibitor highly effective in preclinical lung cancer models. Oncogene. 2008 Aug 7; 27 (34) :4702-11.
[2]. Wong CH, et al. Preclinical evaluation of afatinib (BIBW2992) in esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) . Am J Cancer Res. 2015 Nov 15; 5 (12) :3588-99. [3]. Wang XK, et al. Afatinib circumvents multidrug resistance via dually inhibiting ATP binding cassette subfamily G member 2 in vitro and in vivo. Oncotarget. 2014 Dec 15; 5 (23) :11971-85. [4]. Yoshioka T, et al. Antitumor activity of pan-HER inhibitors in HER2-positive gastric cancer. Cancer Sci. 2018 Apr; 109 (4) :1166-1176. |
| 备注 | 以上数据均来自公开文献, Jinpan暂未进行独立验证, 仅供参考。These protocols are for reference only. Jinpan does not independently validate these methods. |
| 规格 | 10mg 20mg 50mg |
是不可逆的 EGFR 家族抑制剂。