KU-0063794

KU-0063794

货号:
IK0210

品牌:
Jinpan

KU-0063794

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产品简介
别名 依托泊苷
英文名称 KU-0063794
CAS 938440-64-3
分子式 C25H31N5O4
分子量 465.54
纯度 ≥98%
单位
生物活性 KU-0063794 是一种有效的,特异性的 mTOR 抑制剂,能够抑制 mTORC1 和 mTORC2,IC50 值均约为 10 nM[1-3]。
IC50 mTORC1:10 nM ;;mTORC2:10 nM [1-3]
In Vitro Ku-0063794是细胞渗透物,抑制Akt,S6K和SGK的活化和疏水基序磷酸化,但不抑制RSK(核糖体S6激酶),一种不受mTOR调节的AGC激酶。 Ku-0063794还抑制由PDK1(3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶-1)磷酸化的Akt的T环Thr308残基的磷酸化。 Ku-0063794诱导mTORC1底物4E-BP1(真核起始因子4E结合蛋白1)的去磷酸化比雷帕霉素大得多,即使在mTORC2缺陷细胞中,表明mTOR的形式不同于mTORC1,或mTORC2磷酸化4E-BP1 。 Ku-0063794还抑制细胞生长并诱导G1期细胞周期停滞[1]。 Ku0063794不改变LNCaP细胞核中的核磷酸-Mst1-Thr-120水平,而Ku0063794或CCI-779增加C4-2细胞核中的磷酸-Mst1-Thr-120水平[2]。 GDC-0941和KU0063794的组合抑制4EBP1和S6的磷酸化程度与HCT116,DLD1和HT29细胞系中单一药剂NVP-BEZ235引起的磷酸化程度相似[3]。
激酶实验 在Hepes裂解缓冲液中新鲜裂解HEK-293细胞。通过与缀合至免疫前IgG的5-20μL蛋白G-Sepharose一起温育来裂解裂解物(1-4mg)。然后将裂解物提取物与5-20μL缀合至5-20μg的抗Rictor或抗Raptor抗体或免疫前IgG的蛋白G-Sepharose一起温育。所有抗体与蛋白G-Sepharose共价缀合。免疫沉淀在4℃下在振动平台上进行1小时。用Hepes裂解缓冲液洗涤免疫沉淀物四次,然后用Hepes激酶缓冲液洗涤两次。对于用于磷酸化S6K1的Raptor免疫沉淀物,对于最初的两个洗涤步骤,缓冲液包含0.5mol/LNaCl以确保最佳的激酶活性。从用PI-103孵育的血清剥夺的HEK-293细胞(1μM,1小时)分离GST-Akt1。从用雷帕霉素(0.1μM,1小时)温育的血清剥夺的HEK-293细胞中纯化GST-S6K1。通过在各种浓度的KU-0063794和GST-Akt1(0.5μg)或GST-S6K1(0.5μg)存在下添加0.1mM ATP和10mM MgCl 2来启动mTOR反应。反应在30℃下在振动平台上进行30分钟,并通过加入SDS样品缓冲液终止反应。然后将反应混合物通过0.22-μM-孔径的Spin-X过滤器过滤,并将样品用指定的抗体进行电泳和免疫印迹分析。
SMILES OCC1=CC(C2=CC=C3C(N=C(N=C3N4CCOCC4)N5C[C@@H](O[C@@H](C5)C)C)=N2)=CC=C1OC
靶点 mTOR
细胞实验 用KU-0063794处理细胞24,48和72小时,并用新鲜溶解的KU-0063794每24小时更换培养基。为了测量细胞生长,用PBS洗涤细胞一次,并在PBS中的4%(v/v)多聚甲醛中固定15分钟。用水洗涤一次后,将细胞用0.1%结晶紫在10%乙醇中染色20分钟,并用水洗涤三次。用0.5mL 10%(v/v)乙酸(乙酸)从细胞中提取结晶紫20分钟。然后将洗脱液在水中1:10稀释,并定量590nm处的吸光度。为了评估细胞周期分布,通过胰蛋白酶消化收获细胞,在PBS中洗涤一次,并重悬于冰冷的水溶液中。 70%(v/v)乙醇。将细胞在PBS加1%(w/v)BSA中洗涤两次,并在含有50μg/ mL碘化丙锭和50μg/ mL RNase A的PBS加0.1%(v/v)Triton X-100中染色20分钟。使用FACSCalibur流式细胞仪和CellQuest软件测定细胞的DNA含量。以线性标度获得红色荧光(585nm),并且使用脉冲宽度分析来排除双峰。使用FlowJo软件确定细胞周期分布。
数据来源文献 [1]. Garcia-Martinez et al. Ku-0063794 is a specific inhibitor of the mammalian target of rapamycin (mTOR). Biochem.J. (2009)421 29.
[2]. Collak FK, et al. Threonine-120 phosphorylation regulated by phosphoinositide-3-kinase/Akt and mammalian target of rapamycin pathway signaling limits the antitumor activity of mammalian sterile 20-like kinase 1.J Biol Chem. 2012 Jul 6;287(28):23698-709. E
[3]. Haagensen EJ, et al. The synergistic interaction of MEK and PI3K inhibitors is modulated by mTOR inhibition. Br J Cancer. 2012 Apr 10;106(8):1386-94.
规格 5mg 25mg 50mg

KU-0063794 是一种有效的,特异性的 mTOR 抑制剂。