Temsirolimus；西罗莫司脂化物
货号：
IT1240
品牌：
Jinpan
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产品简介
| MDL | MFCD00934421 |
| EC | EINECS 686-177-0 |
| 别名 | 替西罗莫司;西罗莫司;坦西莫司;Torisel |
| 英文名称 | Temsirolimus |
| CAS | 162635-04-3 |
| 分子式 | C56H87NO16 |
| 分子量 | 1030.29 |
| 纯度 | Purity≥98% |
| 单位 | 瓶 |
| 生物活性 | Temsirolimus 是 mTOR 抑制剂，IC50 值为 1.76 μM。[1] |
| IC50 | mTOR:1.76 μM [1] |
| In Vitro | Temsirolimus（10 nM至<5μM）通过FKBP12依赖性机制显示适度和选择性的抗增殖活性，但可以在低微摩尔浓度（5-15μM）下完全抑制广泛的肿瘤细胞增殖，涉及FKBP12非依赖性抑制mTOR信号传导[1]。Temsirolimus抑制核糖体蛋白S6的磷酸化，在PTEN阳性DU145细胞中比在PTEN阴性PC-3细胞中更有效，并且以浓度依赖性方式抑制两种细胞的细胞生长和克隆形成存活[2]。Temsirolimus（100 ng / mL）有效抑制原代人淋巴细胞白血病（ALL）细胞的增殖并诱导细胞凋亡[3]。 |
| In Vivo | Temsirolimus（20mg/kg，ip）抑制两种前列腺癌异种移植物的生长，并且以剂量依赖性方式抑制PC-3肿瘤的生长，并且生长抑制大于DU145肿瘤[2]。在含有人ALL的NOD/SCID异种移植模型中，10mg/kg /天的替西罗莫司治疗导致外周血细胞减少和脾肿大[3]。与对照相比，施用西罗莫司脂素（20mg/kg，腹膜内注射5天/周）显著延迟DAOY异种移植物在1周后的生长160％和2周后240％的生长。单次高剂量的替西罗莫司（100mg/kg，ip）治疗在1周内诱导37％的肿瘤体积消退。 Temsirolimus治疗2周也使雷帕霉素抗性U251异种移植物的生长延迟了148％[4]。替西罗莫司对mTOR的抑制改善了四种不同行为任务的表现，并减少了亨廷顿病小鼠模型中的聚集体形成[5]。施用西罗莫司脂诱导显著的剂量依赖性抗肿瘤反应，针对8226，OPM-2和U266异种移植物的皮下生长，ED50为20mg/kg，2mg/kg分别为8226和OPM-2，其与抑制有关。增殖和血管生成，诱导细胞凋亡和减少肿瘤细胞大小[6]。 |
| 激酶实验 | 将Flag标记的野生型人mTOR（Flag-mTOR）DNA构建体瞬时转染到HEK293细胞中。 Flag-mTOR的蛋白质提取和纯化在48小时后进行。在96孔板中进行在不含FKBP12的各种浓度的替西罗莫司存在下纯化的Flag-mTOR的体外激酶测定，并使用His6-S6K1作为底物通过解离增强的镧系元素荧光免疫测定法（DELFIA）进行检测。首先将酶稀释在激酶测定缓冲液（10mM Hepes（pH 7.4），50mM NaCl，50mMβ-甘油磷酸盐，10mM MnCl 2,0.5mM DTT，0.25μM微囊藻毒素LR和100μg/ mL BSA）中。向每个孔中，将12μL稀释的酶与0.5μLTemsirolimus短暂混合。通过添加含有ATP和His6-S6K的12.5μL激酶测定缓冲液来启动激酶反应，得到最终反应体积为25μL，含有800ng/mL FLAG-mTOR，100μMATP和1.25μMHis6-6-S6K。将反应板在室温下温和振荡温育2小时（线性，1-6小时），然后通过加入25μL终止缓冲液（20mM Hepes（pH 7.4），20mM EDTA和20mM EGTA）终止反应板。使用用铕-N1-ITC（Eu）（每个抗体10.4EU）标记的单克隆抗-P（T389）-p70S6K抗体在室温下进行磷酸化（Thr-389）His6-S6K的DELFIA检测。将45μL终止的激酶反应混合物转移至含有55μLPBS的MaxiSorp板。使His6-S6K附着2小时，然后吸出孔并用PBS洗涤一次。添加100μL含有40ng/mL Eu-P（T389）-S6K抗体的DELFIA缓冲液。在温和搅拌下继续抗体结合1小时。然后吸出孔并用含有0.05％Tween 20（PBST）的PBS洗涤四次。向每个孔中加入100μLDELFIA增强溶液，并在PerkinElmer Victor型号读板器中读板。 |
| SMILES | O=C([C@@]1(O)[C@@H](CC[C@@H](C[C@@H](/C(C)=C/C=C/C=C/[C@H](C[C@@H](C)C([C@@H]([C@@H](/C(C)=C/[C@H]2C)O)OC)=O)C)OC)O1)C)C(N3CCCC[C@H]3C(O[C@@H](CC2=O)[C@@H](C[C@H]4C[C@H]([C@H](OC(C(C)(CO)CO)=O)CC4)OC)C)=O)=O |
| 靶点 | mTOR |
| 动物实验 | 为了产生异种移植物，将细胞植入基质胶中;将基质胶储存在-20℃，然后在4℃下在冰上解冻3小时，然后使用。将细胞轻轻重悬于1mL PBS中并在冰上温育5分钟。使用预先移液的移液管将细胞转移至含有1mL基质胶的管中，并将细胞浓度调节至3×107/mL。使用25号针头将细胞（3×10 6在0.1mL中）皮下注射到小鼠的两侧。当异种移植物生长至直径约5mm的大小时，将动物随机分成10只小鼠的组。进行以下实验：携带PC-3肿瘤的小鼠用Temsirolimus（每天每千克1,5,10和20mg）或载体溶液处理3或5天，每周3周。携带DU145肿瘤的小鼠仅用Temsirolimus（20mg/kg /天）或载体溶液处理3周。携带PC-3肿瘤的小鼠接受以下治疗：（a）对照，Temsirolimus的载体溶液; （b）单独化疗，每周腹膜内注射米托蒽醌1.5 mg/kg或多西紫杉醇10 mg/kg，共3剂; （c）单独使用Temsirolimus，每天ip注射5或10mg/kg，每周注射3次，持续3周; （4）化疗后接Temsirolimus。 |
| 细胞实验 | 在集落形成测定中也测定了各种处理后前列腺癌细胞的存活率。指数生长的细胞暴露于不同剂量的米托蒽醌或多西紫杉醇24小时，或暴露于Temsirolimus 3天。在该处理后，洗涤细胞并用胰蛋白酶消化。将系列稀释液涂布在6孔板中的5mL培养基中。将板在37℃下在含有5％CO 2和90％湿度的气氛中温育10天。然后将板用亚甲蓝染色，并计数含有> 50个细胞的菌落。 |
| 数据来源文献 | [1]. Shor B, et al. A new pharmacologic action of CCI-779 involves FKBP12-independent inhibition of mTOR kinase activity and profound repression of global protein synthesis. Cancer Res, 2008, 68(8), 2934-2943. [2]. Wu L, et al. Effects of the mammalian target of rapamycin inhibitor CCI-779 used alone or with chemotherapy on human prostate cancer cells and xenografts. Cancer Res, 2005, 65(7), 2825-2831. [3]. Teachey DT, et al. The mTOR inhibitor CCI-779 induces apoptosis and inhibits growth in preclinical models of primary adult human ALL. Blood, 2006, 107(3), 1149-1155. [4]. Geoerger B, et al. Antitumor activity of the rapamycin analog CCI-779 in human primitive neuroectodermal tumor/medulloblastoma models as single agent and in combination chemotherapy. Cancer Res, 2001, 61(4), 1527-1532. [5]. Ravikumar B, et al. Inhibition of mTOR induces autophagy and reduces toxicity of polyglutamine expansions in fly and mouse models of Huntington disease. Nat Genet. 2004 Jun;36(6):585-95. Epub 2004 May 16. [6]. Frost P, et al. In vivo antitumor effects of the mTOR inhibitor CCI-779 against human multiple myeloma cells in a xenograft model. Blood. 2004 Dec 15;104(13):4181-7. Epub 2004 Aug 10. [7]. Dela Cruz FS, et al. A case study of an integrative genomic and experimental therapeutic approach for rare tumors: identification of vulnerabilities in a pediatric poorly differentiated carcinoma. Genome Med. 2016 Oct 31;8(1):116. |
| 规格 | 5mg 10mg 50mg |
Temsirolimus 是 mTOR 抑制剂。