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产品资料 – 蛋白表达和纯化技术 – 表达系统 :酵母
K. lactis GG799 感受态细胞 收藏
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相关产品
K. lactis 蛋白表达试剂盒
SacII(星选酶)
K. lactis GG799 感受态细胞
酵母碳基础培养基
特性
可克隆和表达对大肠杆菌有毒性的基因
可同时表达多个基因
无需昂贵的抗生素或甲醇
易操作的实验步骤,适用于无酵母表达经验者
有吸引力的商业授权
有吸引力的商业授权
pKLAC2 载体限制性酶切图谱请参见 351 页,序列信息请联系我们。 www.jinpanbio.com,www.jinpanbio.cn 查询。
概述
K. lactis 蛋白表达试剂盒提供了一种在乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)中表达目的基因的简便方法。目的基因克隆到 pKLAC 系列整合载体中,既可表达胞内蛋白,亦可表达分泌型蛋白。与其它酵母和细菌表达系统相比,K. lactis 蛋白表达系统有着诸多优点。首先,乳酸克鲁维酵母具有高培养密度及整合多拷贝质粒的能力,使其可成功制备大量的高表达蛋白质;其次,pKLAC1 系列载体使用强 LAC4 启动子,该启动子经修饰,在大肠杆菌中无背景表达,因此,可用于对大肠杆菌有毒性的基因表达;再有,试剂盒提供高效转化的 K. lactis 感受态细胞,使得该系统适用于需要大量转化子的实验,比如利用 cDNA 文库进行表达克隆;另外,酵母转化子的筛选不需要昂贵的抗生素,培养基中也不需要甲醇;最后,K. lactis 细胞表达的蛋白质可以进行翻译后修饰,因而可成为细菌表达系统的有用替代。
pKLAC2 属于通用表达载体。利用这些载体既可使重组蛋白在细胞内表达,也能通过与 K. lactis α-factor 的融合实现分泌表达。pKLAC2 的多克隆位点与 NEB 其它表达系统相兼容。
GG799 是 K. lactis 蛋白表达试剂盒中提供的基础菌株。其特点是细胞生长密度与异源蛋白表达效率极高,GG799 细胞未经遗传修饰。
蛋白质的分泌过程。在细胞核中,整合表达载体编码了一个含有 ɑ-MF 结构域(蓝色)和目的蛋白(黑色)的融合蛋白。融合蛋白表达后,位于 ɑ-MF 上的信号肽就会指导融合蛋白转运至内质网(ER),信号肽即被信号肽酶(SP)切除。融合蛋白质转运至高尔基体,Kex 蛋白酶在此将 α-MF 结构域切除。随后,目的蛋白质被分泌到细胞外。
K. lactis 的蛋白表达。SDS-PAGE 电泳分离检测分泌性表达的重组麦芽糖结合蛋白(MBP),菌体生长在富含蛋白胨(peptone)的培养基中,直接上样检测。考马斯亮蓝染色鉴定。泳道 1:蛋白分子量 Marker;泳道 2:野生型 K. lactis 细胞培养液(15 μl);泳道 3:整合有大肠杆菌 malE 基因表达框的 K. lactis 细胞培养液(15 μl)。
K. lactis 蛋白表达试剂盒包括
– pKLAC2 载体和 pKLAC1-malE 对照质粒
– SacII
– 整合测序引物套装
– K. lactis GG799 感受态细胞和转化试剂
– 酵母碳基础培养基与乙酰胺溶液
– 酵母碳基础培养基与乙酰胺溶液
参考文献
关于这些产品特点与应用的参考文献请联系我们。 www.jinpanbio.com,www.jinpanbio.cn。