JM110 感受态细胞
| 储存条件 | -70℃ |
| 单位 | 包 |
| 规格 | 20*100ul |
本公司生产的JM110感受态细胞是采用大肠杆菌JM110菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测，转化效率可达106 cfu/μg。pEGFP-N1转化JM110后XbaⅠ位点去甲基化，提取的质粒可被XbaⅠ酶切开，线性化质粒大小为4733bp。JM110感受态细胞-70℃保存6个月转化效率不发生改变。每支感受态可以酌情分装使用，降低了实验的成本。质量稳定，使用方便，质优价廉。
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NEB PCR 试剂盒提供：优化的 2X 克隆预混液（其中配有独特的连接增强剂）和线性载体。该线性载体利用最新技术抑制背景菌落生长，使背景值降为最低。本试剂盒能简单、快速克隆各种 PCR 产物。具有校读功能的聚合酶产生平末端扩增子（如：Q5 或者 Phusion），无校对功能的聚合酶产生单碱基突出末端的扩增子（如 Taq、OneTaq、LongAmp Taq)。2X 克隆预混液中包含有末端修复成份，可在连接反应步骤前进行末端平齐化，因此，无论扩增子是何种末端都能完成有效连接。此外，使用本试剂盒，PCR 产物无需纯化，PCR 引物也无需经过 5´ -磷酸基修饰。
NEB PCR 克隆试剂盒经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请联系我们。 www.jinpanbio.cn，www.jinpanbio.com。
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SHuffle 表达 E. coli 感受态细胞
1 x 107 cfu/μg pUC19 DNA
T1 噬菌体（fhuA2）、呋喃妥因、壮观霉素
DB3.1 感受态细胞
| 储存条件 | -70℃ |
| 单位 | 包 |
| 规格 | 10*100ul 20*100ul |
本公司生产的大肠杆菌DB3.1细胞含有gyrA462基因，对λ噬菌体的ccdB基因产物的毒性具有抵抗作用，特别适用于转化和扩增包含ccdB基因的质粒载体。使用pUC19质粒检测，转化效率可达107 cfu/μg，-70℃保存几个月转化效率不发生改变。每支感受态可以酌情分装使用，降低了实验的成本。质量稳定，使用方便，质优价廉。
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| 感受态细胞E.coli HST08 Premium Competent Cells | ||||||
| 品牌 | Code No. | 产品名称 | 包装量 | 价格（元） | 说明书 | 数量 |
| Takara | 9128 | E.coli HST08 Premium Competent Cells | 100 μl × 10 | ￥413 |  |
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页面更新：2024-01-25 15:02:15
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| 感受态细胞E.coli HST16CR Competent Cells | ||||||
| 品牌 | Code No. | 产品名称 | 包装量 | 价格（元） | 说明书 | 数量 |
| Takara | 9131 | E.coli HST16CR Competent Cells | 100 μl×10 | ￥619 | |
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| ■ 制品说明 | |||||||||||||||||||||
| 感受态细胞是具有摄取外源DNA能力的受体菌，可摄取基因重组质粒等，是转化时的重要工具。Takara在Hanahan’s method基础上进行了改良，制备出的E. coli HST16CR Competent Cells。 E. coli HST16CR Competent Cells是以E. coli HST08 Premium Competent Cells（Code No. 9128）为基础，获得的ColE1 ori的复制相关基因 pcnB缺失的具有高转化效率的菌株。由于pcnB基因的缺失，能够降低pUC系列载体的拷贝数，可有效用于难以克隆的含跨膜结构域蛋白质等、克隆基因对大肠杆菌生长有抑制作用的高拷贝载体克隆。 因为是以E. coli HST08 Premium Competent Cells为基础，缺失外源甲基化DNA的基因群(mrr –mcrBC–hsdRMS )和mcrA，因此可用于甲基化DNA的克隆、基因组文库构建和常规亚克隆。另外，使用pUC系列载体转化时，可通过β-半乳糖苷酶的α-互补性，在培养基中添加X-gal进行蓝白筛选，以筛选重组体。 X-Gal：5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside |
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| ■ 细胞浓度 | |||||||||||||||||||||
| 1-2×109 bacteria/ml | |||||||||||||||||||||
| ■ Genotype | |||||||||||||||||||||
| E. coli HST16 CR: ： F-, endA1 , supE44 , thi –1, recA 1, relA 1, gyrA 96, phoA ,Φ80d lacZ ΔM15,Δ（ lacZYA – argF ）U169 , Δ ( mrr – hsdRMS – mcrBC ), ΔmcrA ,ΔpcnB, λ– | |||||||||||||||||||||
| ■ 保存 | |||||||||||||||||||||
| -80℃。 注意： 如果不在-80℃下保存，转化效率将会降低。此时，在使用前，请使用附带的pUC19 对照质粒来确认细胞的转化效率。不能液氮保存。 |
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| ■ 质量标准 | |||||||||||||||||||||
| [1] 转化效率 转化质粒载体时，转入1 ng 的pUC19 plasmid，涂于Amp+ 的L-plate进行筛选。 转化效率 : >1 x 108 colonies/μg pUC19 plasmid [2] β-半乳糖苷酶的α-互补性 转化pUC19 plasmid时，确认含100 μg/ml ampicilin 和 60 μg/ml X-Gal的L-agar plate上出现蓝色菌落。 |
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| ■ 注意事项 | |||||||||||||||||||||
| 1. 取出所需管数的感受态细胞后，搬运时请置于干冰/乙醇中。 |
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| 2. 可使用1.5 ml microcentrifuge tubes代替14 ml 圆底 tubes (BD Code: 352059 或 352057，等)，但效率可能会降低。 | |||||||||||||||||||||
| 3. 当使用100 μl感受态细胞时，加入不超过10 ng的高纯度质粒DNA。增加DNA量转化效率会降低。 | |||||||||||||||||||||
| 4. 当改变感受态细胞使用体积或tube类型时，需要研讨适当的反应条件。例如，当使用1.5 ml microcentrifuge tubes时，请42℃加热60秒。 | |||||||||||||||||||||
| 5. 可以使用L-broth 或φb-broth替代SOC培养基。此时，转化效率可能会降低。 | |||||||||||||||||||||
| ·L-broth：10 g Tryptone, 5 g Yeast extract, 5 g NaCl，用1 M NaOH调整pH到7.5，加水使终体积为1 L，高压灭菌。 | |||||||||||||||||||||
| ·φ b-broth：5 g Yeast extract, 20 g Tryptone, 5 g MgSO4·7H2O，用1 M KOH调整pH到7.5，加水使终体积为1 L，高压灭菌。 | |||||||||||||||||||||
| ·L-plate: 10 g Tryptone, 5 g Yeast extract, 5 g NaCl，用1 M NaOH调整pH到7.5，添加agar到1.5%，加水使终体积为1 L，高压灭菌。 | |||||||||||||||||||||
| 6. 当加入X-Gal时，按照以下操作进行： 将 20 mg/ml X-Gal (溶解于二甲基甲酰胺) 按200-300 μl/100 ml 的比例加入到agar media中。 |
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| 7. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是，如果再次冻结不可避免，将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻，置于-80℃保存。但是，转化效率可能会降低至少一个数量级。 | |||||||||||||||||||||
页面更新：2024-01-31 15:28:56
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BL21(DE3)感受态细胞
| 英文名称 | E.coli BL21(DE3) Competent Cells |
| 储存条件 | -70℃保存，液氮保存至少一年，-70℃保存至少6个月 |
| 外观（性状） | 干冰运输，单加10kg干冰费 |
| 单位 | 包 |
| 规格 | 10*100ul 20*100ul |
本公司生产的BL21（DE3）感受态细胞是采用大肠杆菌BL21（DE3）菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测，转化效率可达107，-70℃保存6个月转化效率不改变。
基因型：F_ ompT hsdSB（rB_mB_）dcm gal（DE3）
特 点：该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。该菌适合表达非毒性蛋白。
操作方法：（以下各步骤均为无菌操作）
1、将感受态细胞置于冰上融化，以下实验以100ul感受态细胞为例。
2、向感受态细胞悬液中加入需转化的目的DNA，注意目的DNA的体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一，轻轻旋转离心管以混匀内容物，冰浴放置30分钟。
3、将离心管置于42℃水浴中放置60-90秒，然后快速转移到冰浴中放置2-3分钟，注意不要摇动离心管。
4、向离心管中加入500ul无菌无抗的SOC或LB培养基，37℃ 180rpm振荡培养1小时。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
5、取适量已转化的感受态细胞涂布含相应抗生素的SOC或LB平板，37℃倒置培养12-16小时。涂布用量可根据具体实验来调整，如转化的DNA总量较多，可取100ul左右的转化产物涂板；反之，如转化的DNA总量较少，可取200-300ul的转化产物涂板。过多菌液可以抑制细菌生长。如果预计的克隆较少，可通过离心后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。涂布剩余的菌液可4℃保存，如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的平板。
注意事项：
1、感受态细胞应保存在-70℃，不可反复冻融，否则其转化效率将会降低。
2、实验过程中应严格无菌操作，防止其它DNA或杂菌的污染，避免为以后的筛选、鉴定带来影响。
3、转化时，转化效率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源DNA量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时DNA体积要小于感受态细胞体积的十分之一。
4、转化率的计算：转化率＝产生菌落的总数/铺板DNA总量。5、为防止转化实验不成功，可以保留部分连接产物，以重新转化，将损失降到最低。
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| Stellar电转化感受态细胞 | ||||||
| 品牌 | Code No. | 产品名称 | 包装量 | 价格（元） | 说明书 | 数量 |
| Clontech | 636765 | Stellar Electrocompetent Cells | 10 transformations | ￥3,498 |  |
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| Stellar Electrocompetent Cells具有高转化效率，适合于多种生物学应用，如cDNA文库构建或基因bank构建。可利用该感受态细胞的β-半乳糖苷酶的α互补特性进行重组克隆的蓝白斑筛选。该细胞株可代替DH10B使用，recA1基因和endA1基因的变异降低质粒DNA突变和被降解的风险。该产品也可用于基因组或cDNA文库的构建。 |
产品详情请点击： |
页面更新：2019-11-05 09:53:10
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T1 噬菌体（fhuA2），呋喃妥因
过夜培养的单菌落，液体培养 3 小时后即可用于小量制备 DNA。再培养 1 小时后 DNA 产量加倍。
SOC Outgrowth 培养基
pUC19 对照 DNA
