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产品资料 – 用于二代测序的 NEBNext® 试剂 – 适用于 Illumina 测序平台/Ultra II DNA & RNA
NEBNext UltraExpressTM 超快速 DNA 文库制备试剂盒 收藏
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#E3325L
96 次反应
25,479.00
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#E3325S
24 次反应
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NEBNext® Ultra™ II DNA 文库制备试剂盒
#E7645L 96 次反应
#E7645S 24 次反应
产品特点：
• 更快的实验流程（< 2 小时）
• 更少的步骤和耗材消耗
• 更少的纯化步骤
• 起始量范围广，10 – 200 ng 已打断的 DNA 均可制备高质量的文库
• 一个实验流程，可适用于不同起始量
• 兼容自动化工作流程
概述：
为了满足用户对更快、更精简的 DNA 文库制备流程的需求，同时需要针对各种样本类型都能制备出高质量文库，NEBNext UltraExpressTM 超快速 DNA 文库制备试剂盒可对所有 DNA 起始量（打断的 DNA：10 ng – 200 ng）使用同一个实验流程，并包含预混试剂，减少了反应时间和纯化步骤。整个文库制备流程在单管中完成，从而减少耗材消耗。
NEBNext UltraExpressTM 超快速 DNA 文库制备实验流程
产品描述：
针对不同起始量的 DNA 样本，NEBNext UltraExpressTM 超快速 DNA 文库制备试剂盒均能制备高产量文库。
以 10 ng、50 ng、100 ng 和 200 ng 人类 NA19240 基因组 DNA（Coriell Institute for Medical Research）为起始样本制备文库，每个文库使用相同的接头数量和 PCR 条件（8 个循环）。每个文库产量都超过了 Ilumina® NovaSeq® 6000 单次运行的最低要求（40 ng），以完成至少 30X 覆盖度的全基因组测序。
针对不同起始量的 DNA 样本，NEBNext UltraExpressTM 超快速 DNA 文库制备试剂盒均能制备 GC 覆盖度均一和插入片段大小一致的文库。
以 10 ng、50 ng、100 ng 和 200 ng 人类 NA19240 基因组 DNA（Coriell Institute for Medical Research）为起始样本制备文库，每个文库使用相同的接头数量和 PCR 条件（8 个循环）。文库混合后使用 Illumina® MiSeq® 测序（2 x 75 bases）。结果表明：GC 覆盖度（A）和插入片段（B）均一致。每个文库采样（seqtk v1.3）200 万个双端 reads，去接头（seqprep v0.1）并比对（bowtie2 v2.4.5）到 GRCh38 参考基因组，使用 Picard’s CollectGCBiasMetrics（v 1.56.0）计算 GC 覆盖度。图（A）中水平灰线表示 1.0 的预期均一覆盖度，绿色阴影中的点表示每个 GC% 的 reads 数。灰色区域图表示参考基因组中每 100 bp GC 含量分布的直方图。
针对不同类型的起始样本，NEBNext UltraExpressTM 超快速 DNA 文库制备试剂盒均能制备 GC 覆盖度均一和插入片段大小一致的文库。
以未打断的 cell-free DNA（cfDNA，12 ng）和打断（Covaris® ME220）至 200 bp 的玉米 DNA 为起始样本，使用相同的流程制备文库。文库混合后使用 Illumina® MiSeq® 测序（2 x 75 bases）。每个文库采样（seqtk v1.3）14 万个双端 reads，去接头（seqprep v0.1）并比对（bowtie2 v2.4.5）到 GRCh38 人类参考基因组或玉米参考基因组。
A. 不同类型的起始样本都能获得均一的 GC 覆盖度。起始量高和低的玉米 DNA 样本 GC 覆盖度一致。水平灰线表示 1.0 的预期均一覆盖度，彩色点表示每个 GC% 的 reads 数。灰色区域图表示参考基因组中每 100 bp GC 含量分布的直方图。
B：cfDNA 插入片段具有显著的片段分布条带：在 167 bp 处有峰值，核小体结合 DNA 为较短片段。10 ng 和 100 ng 玉米 DNA 样本插入片段大小也一致，如预期的打断方案。
NEBNext UltraExpressTM 超快速 DNA 文库制备试剂盒能实现文库高度复杂性。
以（A）10 ng 和 100 ng ZymoBIOMICS® 微生物群落 DNA 标准品（Zymo Research®，#D6306）和（B）10 ng 和 100 ng ZymoBIOMICS® 微生物群落 DNA 标准品 II（对数分布）（Zymo Research，#D4311）为起始样本，使用相同的流程制备文库。文库混合后使用 Illumina® MiSeq® 测序（2 x 75 bases）。每个文库采样（seqtk v1.3）14 万个双端 reads，去接头（seqprep v0.1）并比对（bowtie2 v2.4.5）到复合参考基因组。对每 1,000 bp 复合参考基因组进行计数（bedtools 2.30.0），并比较重复样本文库和起始水平，结果表明有高度相关性。
NEBNext UltraExpressTM 超快速 DNA 文库制备试剂盒所制备的文库能真实反应起始样本水平。
以 10 ng 和 100 ng ZymoBIOMICS® 微生物群落 DNA 标准品（Zymo Research®，#D6306）为起始样本，使用相同的流程制备文库。文库混合后使用 Illumina® MiSeq® 测序（2 x 75 bases）。每个文库采样（seqtk v1.3）14 万个双端 reads，去接头（seqprep v0.1）并比对（bowtie2 v2.4.5）到复合参考基因组。对每 1,000 bp 复合参考基因组进行计数（bedtools 2.30.0），并比较不同起始量文库预期的和检测的组成。特定微生物 gDNA 组成检测到的与预期的一致。预期组成：新型隐球菌 2%，酿酒酵母 2%，枯草芽孢杆菌 12%，大肠杆菌 12%，粪肠球菌 12%，发酵乳杆菌 12%，单核细胞增生李斯特菌 12%，铜绿假单胞菌 12%，金黄色葡萄球菌 12%，肠道沙门氏菌 12%。
即使是对数范围内的复杂混合物，NEBNext UltraExpressTM 超快速 DNA 文库制备试剂盒所制备的文库能真实反应起始样本水平。
以 10 ng 和 100 ng ZymoBIOMICS® 微生物群落 DNA 标准品 II（对数分布）（Zymo Research，#D6311）为起始样本，使用相同的流程制备文库。文库混合后使用 Illumina® MiSeq® 测序（2 x 75 bases）。每个文库采样（seqtk v1.3）14 万个双端 reads，去接头（seqprep v0.1）并比对（bowtie2 v2.4.5）到复合参考基因组。对每 1,000 bp 复合参考基因组进行计数（bedtools 2.30.0），并比较不同起始量文库预期的和检测的组成。结果表明：检测到的与预期的组成一致（10 ng 起始量，R2 = 0.96；100 ng 起始量，R2 = 0.97）。预期组成：单核细胞增生李斯特菌 89.1%，铜绿假单胞菌 8.9%，枯草芽孢杆菌 0.89%，酿酒酵母 0.89%，大肠杆菌 0.089%，肠道沙门氏菌 0.089%，发酵乳杆菌 0.0089%，粪肠球菌 0.00089%，新型隐球菌 0.00089%，金黄色葡萄球菌 0.000089%。