AZ-3146
货号：
IA4320
品牌：
Jinpan
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产品简介
| 英文名称 | AZ-3146 |
| CAS | 1124329-14-1 |
| 分子式 | C24H32N6O3 |
| 分子量 | 452.55 |
| 储存条件 | 2~8度 |
| 纯度 | ≥98% |
| 单位 | 瓶 |
| 生物活性 | AZ3146 是一种有效的选择性的 Mps1 抑制剂, 作用于 Mps1Cat, IC50 为 35 nM[1-3]。 |
| IC50 | Mps1Cat:35 nM (IC50) [1-3] |
| In Vitro | 在体外激酶测定中, AZ3146抑制人Mps1Cat, IC50为~35 nM。 AZ3146还有效抑制从人类细胞中免疫沉淀的全长Mps1的自磷酸化[1]。 TTK特异性激酶抑制剂AZ3146可降低HCC细胞生长。在SMMC-7721和BEL-7404细胞上进行体外细胞毒性测定。 IC50计算为7.13μM (BEL-7404) 和28.62μM (SMMC-7721) 。两种细胞在IC50浓度下进一步处理4天。观察到细胞增殖的显着抑制[2]。将HCT116细胞在0.8μM (GI50) 的AZ3146中培养10天, 然后在2μM的AZ3146中培养3周。分离出16个克隆并产生细胞系, 命名为AzR1-16, 所有细胞都在细胞活力测定中对AZ3146诱导的细胞死亡具有抗性。 AzR3和4具有约3μM的GI50 (4倍抗性) , 而其余克隆具有约9μM的GI50 (11倍抗性) 。当通过延时显微镜分析有丝分裂时, 2μMAZ3146导致亲本细胞系在10分钟内快速离开有丝分裂[3]。 |
| 激酶实验 | 产生His标记的人Mps1Cat编码氨基酸510-857。对于激酶测定, 将500 ng加入缓冲液 (25 mM Tris-HCl, pH 7.4, 100 mM NaCl, 50μg/ mL BSA, 0.1 mM EGTA, 0.1％β-巯基乙醇, 10 mM MgCl2和0.5μg/ mL髓磷脂) 碱性蛋白) , AZ3146和100μMγ-[32P] ATP (2μCi/测定) 。将反应物在30℃温育20分钟, 点在P81纸上, 在0.5％磷酸中洗涤, 并浸入丙酮中。通过闪烁计数确定磷酸盐掺入。对于免疫沉淀激酶测定, 用诺考达唑处理HeLa细胞14小时, 分离有丝分裂细胞, 在PBS中洗涤, 并在50mM Tris-HCl, pH 7.4, 100mM NaCl, 0.5％NP-40, 5mM中裂解30分钟。 EDTA, 5mM EGTA, 40mMβ-甘油磷酸盐, 0.2mM PMSF, 1mM DTT, 1mM原钒酸钠, 20mM氟化钠, 1μM冈田酸和完全不含EDTA的蛋白酶抑制剂混合物。全长Mps1是免疫沉淀的。用含有100mM NaCl的裂解缓冲液洗涤纯化的复合物, 并如重组蛋白所述进行测定。为了量化32P掺入, 用SDS样品缓冲液终止反应, 并通过SDS-PAGE分离, 然后进行磷光成像。使用AIDA软件使用磷成像仪分析板。为了评估AZ3146的特异性, 使用激酶分析服务进行单点筛选。选择50种激酶并用1μMAZ3146[1]进行测定。 |
| SMILES | CN(CC1)CCC1OC2=CC=C(NC3=NC(N(C4CCCC4)C(N5C)=O)=C5C=N3)C(OC)=C2 |
| 靶点 | Mps1 |
| 细胞实验 | 将TTK抑制剂AZ3146以100mM的浓度溶解在DMSO中, 并在使用前依次用含有10％FBS的DMEM稀释成100μM, 10μM, 1μM和0.1μM。在进行细胞毒性测定时。将HCC细胞以每孔3×103的密度接种到96孔板中。第二天以指定浓度添加AZ3146。培养抑制剂处理的细胞, 并使用CCK-8以24小时的间隔测试3-4天[2]。 |
| 数据来源文献 | [1]. Hewitt L, et al. Sustained Mps1 activity is required in mitosis to recruit O-Mad2 to the Mad1-C-Mad2 core complex. J Cell Biol. 2010 Jul 12; 190 (1) :25-34.
[2]. Liu X, et al. TTK activates Akt and promotes proliferation and migration of hepatocellular carcinoma cells. Oncotarget. 2015 Oct 27; 6 (33) :34309-20. [3]. Gurden MD, et al. Naturally Occurring Mutations in the MPS1 Gene Predispose Cells to Kinase Inhibitor Drug Resistance. Cancer Res. 2015 Aug 15; 75 (16) :3340-54. |
| 备注 | 以上数据均来自公开文献, Jinpan暂未进行独立验证, 仅供参考。 These protocols are for reference only. Jinpan does not independently validate these methods. |
| 规格 | 5mg 10mg |
AZ 3146是一种选择性Mps1抑制剂。