高分文献分享—自激活T细胞为肿瘤免疫治疗提供新思路

CD28是在所有小鼠和人类T细胞上表达的共刺激受体，用来调节T细胞受体(TCR) 的响应。异常的CD28 信号传导是癌症、自身免疫和病毒感染中T细胞功能障碍的决定性特征之一。早期的一些研究表明CD28对CD4+ T细胞更重要，但也有越来越多的研究者发现其对CD8+ T细胞的作用。

CD28有两个配体，B7-1 (CD80)和B7-2 (CD86)，最熟知是在专职抗原呈递细胞(APCs)上表达。B7:CD28在次级淋巴组织中的反式相互作用器官触发关键信号以及TCR连接，用以 T细胞增殖，存活，迁移和细胞因子的产生。然而，B7配体被局限在外周组织中，因为非免疫细胞通常不能表达B7，这就提出了CD28共刺激是否以及如何在外周组织中发生作用的问题。

加州大学圣地亚哥分校（UCSD）的科学家们在《Immunity》杂志（影响因子IF=32.4）上发表的一篇题为“cis-B7:CD28 interactions at invaginated synaptic membranes provide CD28 co-stimulation and promote CD8+ T cell function and anti-tumor immunity”的文章，他们的研究发现表明T细胞被证明可以在外周组织中自我激活，从而增强其攻击肿瘤的能力，为新的癌症治疗和生物标志物发现提供新思路。

图片来源于文献：doi.org/10.1016/j.immuni.2023.04.005

他们的研究发现活化的 T 细胞表面同时存在大量的 CD28 受体和 B7 配体。并且通过一系列精细的实验证明了共表达的 B7 与 CD28 可以在同一细胞上相互结合，并且这种结合发生在细胞膜的凹陷部位。 CD28通过细胞内吞作用所形成的细胞膜凹陷，来促进其与 B7 的顺式结合。这种凹陷是通过CD28招募的磷脂酰肌醇-3-激酶 PI3K和分选连接蛋白SNX9共同介导的。CD28通过PI3K和 SNX9 聚集在免疫突触上的细胞膜凹陷，从而与 B7顺式结合并激活CD28。激活的CD28则会招募蛋白激酶 Cθ （PKCθ） 来激活 CD8+T 细胞,从而增强其攻击肿瘤的能力。

该研究团队使用了Bio X Cell的 InVivoMAb anti-human/monkey CD28(Clone CD28.2 Bio X Cell catalog no. BE0291)进行in vitro T cell stimulation/activation和InVivoSIM anti-human PD-L1 (Atezolizumab Biosimilar) (Bio X Cell catalog no.  SIM0009)进行体内药效研究。

文章原文链接：https://doi.org/10.1016/j.immuni.2023.04.005

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分享细胞周期检测五个小知识点

细胞周期检测五个小知识点汇总整理：

1、流式细胞术分析细胞周期的原理

在细胞周期的不同时期，DNA含量存在差异，用DNA染料进行染色（如应用最广泛的染料PI），DNA含量多，荧光强度高，DNA含量少，荧光强度低，因此可以根据DNA荧光强度的变化，来判断细胞处于哪个时期。

2、利用PI分析细胞周期，需要加入RNase消除RNA的影响

PI是通过插入双螺旋结构中叠加在一起的碱基对核酸进行染色的，并且它可以插入所有DNA和RNA的双链区，PI不是DNA特异性的，所以需要加入RNase消除RNA的影响。

3、细胞周期检测时，一定不要洗涤

不同于蛋白染料和细胞之间的牢固结合，DNA与染料的结合是一种结合态和游离态之间松散的平衡，不是很牢固，所以洗涤步骤会造成染料丢失，降低核酸的特异性荧光，造成测量值变小，因此，DNA染色时一定不要洗涤。

4、 固定细胞和活细胞的细胞周期检测

PI、7-AAD、TOTO-3和YOYO-1等染料不能透过完整的细胞膜，在染色时，一般需要用70%乙醇固定、通透细胞膜，从而使这些染料进入细胞核内与DNA结合，所以市面上很多的细胞周期检测试剂盒都是需要固定细胞的；如果想要检测活细胞样本，可以咨询我们在线客服人员。

5、其他应该注意的问题

• 仪器：定期清洗喷嘴，激光预热时间充分，低流速进样等。

• 样本：消化要充分，但不能过度，保证细胞不粘连、不破裂，染色要充分等。

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