线粒体膜通透性转换孔检测试剂盒

￥800.00

货号：BL928A

规格：100T-1000T

品牌：Jinpan

产品简介：

线粒体通透性转换孔检测试剂盒（Mitochondrial Permeability Transition Pore Assay Kit）是一种采用膜通透性的荧光探针Calcein AM检测线粒体通透性转换孔开放程度的试剂盒。相比于基于线粒体膜电位的方法更直接地检测到线粒体通透性转换孔开放程度的变化。由于Calcein AM的毒性特别低，并且不会抑制细胞的增殖、趋化性等绝大部分功能，所以与其它同类产品如CFDA SE等相比是更适合染活细胞的荧光探针。

本试剂盒的检测原理如下，Calcein AM是一种可以对活细胞进行荧光染色的非极性染料，可通过被动运输进入细胞内并在细胞质组分包括线粒体等中积累。在细胞中，几乎没有荧光的Calcein AM被细胞内的酯酶水解去除乙酰甲酯，生成没有膜通透性的极性荧光染料钙黄绿素（Calcein or Fluorexon），从而使Calcein滞留在细胞内，并使细胞质包括线粒体等呈现强绿色荧光。Calcein本身是一种金属络合指示剂，在生理pH条件下和Co²⁺、Ni²⁺、Cu²⁺、Fe³⁺和Mn²⁺等金属离子络合时，荧光信号会发生淬灭。本试剂盒提供了CoCl₂用于淬灭细胞质中Calcein的绿色荧光，但由于正常情况下线粒体的MPTP是关闭的，此时CoCl₂不能进入线粒体，所以Calcein AM染色后经CoCl2处理会导致仅线粒体内呈现Calcein的绿色荧光。作为对照，可将细胞用Calcein AM染色并经过CoCl2处理之后，用钙离子载体Ionomycin进一步处理以诱导细胞外的Ca²⁺大量进入细胞内和线粒体基质并导致MPTP的开放，或者用适当的条件刺激细胞导致MPTP少量或大量开放，从而使部分Calcein释放进入细胞浆和钴离子结合而失去荧光，同时细胞浆中的钴离子能进入线粒体内而导致其中的Calcein的绿色荧光部分甚至全部淬灭，最终导致线粒体中Calcein绿色荧光减弱或消失。这样根据线粒体中Calcein绿色荧光的强弱来判断线粒体MPTP开放的程度，绿色荧光越强，开放程度越低，绿色荧光越弱，开放程度越高。

如果用于流式细胞仪，每个样品的检测体系体积为1ml时，可以进行100次检测；96孔板每孔检测体系的体积为100μl时可以检测1000次。

产品组份：

使用方法（仅供参考）：（详细见说明书）

注意事项：

1．荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2．Calcein AM (1000X)须尽量避免反复冻融。如果多次使用，请注意适当分装。

3．CoCl₂有腐蚀性，对人体有害或有刺激性，对人体有呼吸道、生殖等特定器官毒性，或致畸致癌毒性，操作时请小心，并确保有效防护以避免直接接触人体或吸入体内，并须注意避免腐蚀其它物品。

4．CoCl₂对水生生物有毒或有害，禁止直接排入环境。

5．本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

6．为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

保存条件：

-20ºC保存，一年有效。Calcein AM (1000X)和Ionomycin (200X)需要避光保存。

组织线粒体分离试剂盒

货号：BL153A

规格：50T

品牌：Jinpan

组织线粒体分离试剂盒

产品简介：

线粒体是细胞的动力工厂，进行氧化磷酸化的场所。细胞活动所需的能量主要由在线粒体内进行的氧化所产生的能量来供应，制备线粒体的关键是保持线粒体的完整性和纯度，可通过分级分离法获得，即先低俗出去细胞核以及细胞碎片，再进行高速梯度离心分离线粒体。对线粒体进行分离，以此为研究对象，对线粒体呼吸作用、mtDNA、mtRNA以及其他线粒体蛋白性能分析等具有重要意义。

组织线粒体分离试剂盒(Tissue Mitochondria Isolation Kit)可以快速便捷分离动物组织中的线粒体，分离线粒体的同时可以获得去除线粒体的细胞浆蛋白，可用于分析细胞色素C等线粒体蛋白向胞浆的释放，大部分获得的线粒体都含有完整的内膜和外膜，并具有线粒体的生理功能(如检测线粒体膜电位)，获得的蛋白可用于SDS-PAGE、Western、双向电泳等蛋白分析。

产品组成：

使用方法（仅供参考）：

1、 清洗：取新鲜组织(不宜采用冻存的组织)，迅速称重50～100mg，用预冷的PBS清洗1次，冰上剪成3mm²大小的组织碎片。

2、 匀浆裂解：加入10倍体积的预冷的裂解液(如需获得细胞浆蛋白，应提前加入PMSF，至PMSF浓度为1×)，置于冰浴上匀浆器中，匀浆10～20次；不同组织或不同匀浆器所需的匀浆次数有所不同，需自行优化。

3、 离心：4℃ 600g离心5min以去除细胞核、未破碎的细胞和大的膜碎片。注：如需获得纯度更高的线粒体，可以将此步骤的离心速度改为2000g离心3min，其缺点是相同数量细胞的线粒体抽提得率会下降。

4、 上清液转移至一干净离心管，4℃ 12000g离心10min。注：如需获得纯度更高的线粒体，可以将此步骤的离心速度改为6000g离心10min，其缺点是相同数量细胞的线粒体抽提得率会下降。

5、 弃上清，沉淀为线粒体，如果希望获得去除线粒体的细胞浆蛋白，应在本步骤中收集上清，并且在收集上清时注意勿触及沉淀。随后把收集的上清12000g 4℃离心10min，上清即为去除线粒体的细胞浆蛋白。

6、 保存：弃上清，用适当缓冲液悬浮沉淀。如果用于线粒体酶活性或功能的分析，线粒体沉淀应重悬于线粒体储存缓冲液；如果用于线粒体蛋白的分析，获得的细胞浆蛋白应保存于1×蛋白储存缓冲液，即按细胞浆蛋白：蛋白储存缓冲液(5×)=1：4比例混合；如果用于双向电泳，应使用恰当的保存液。

注意事项：

1、 试剂(如PMSF)对于不同实验不必全部使用，在实验条件成熟后可以不必使用。

2、 如果不是用于制备线粒体蛋白，裂解液不必加入PMSF；如果用于制备线粒体蛋白样品，裂解液需添加PMSF；PMSF一定要在试剂加入到样品中前1～2min内加入，以免PMSF在水溶液中很快失效。

3、 分离线粒体的所有步骤均需在冰上或4℃进行，所用溶液需冰浴或4℃预冷，全部操作时间尽量控制在1h以内。

4、 通常在分离线粒体时前后两次离心速度选取1000g和12000g，如果希望纯度更高，但对线粒体的得率要求不高，前后两次离心速度可用2000g和6000g。

5、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：

-20℃保存一年。

细胞线粒体分离试剂盒

货号：BL168A

规格：50T

品牌：Jinpan

细胞线粒体分离试剂盒

产品简介：

线粒体是细胞的动力工厂，进行氧化磷酸化的场所。细胞活动所需的能量主要由在线粒体内进行的氧化所产生的能量来供应，制备线粒体的关键是保持线粒体的完整性和纯度，可通过分级分离法获得，即先低俗出去细胞核以及细胞碎片，再进行高速梯度离心分离线粒体。对线粒体进行分离，以此为研究对象，对线粒体呼吸作用、mtDNA、mtRNA以及其他线粒体蛋白性能分析等具有重要意义。

本试剂盒可以快速便捷的分离培养细胞中的线粒体，分离线粒体的同时可以获得去除线粒体的细胞浆蛋白，可用于分析细胞色素 C 等线粒体蛋白向胞浆的释放，大部分获得的线粒体都含有完整的内膜和外膜，并具有线粒体的生理功能(如检测线粒体膜电位)，获得的蛋白可用于 SDS-PAGE、Western、双向电泳等蛋白分析。

产品组成：

使用方法（仅供参考）：

1、 清洗：用预冷的 PBS 清洗细胞 1 次，4℃ 1000g 离心 5min，弃上清。

2、 裂解：沉淀用1～2ml预冷的裂解液重悬细胞，冰浴放置 10～15min，可用相差显微镜检测膨胀的程度。

3、 匀浆：把细胞悬液转移至匀浆器中，匀浆 10～20 次。不同细胞或不同匀浆器所需的匀浆次数有所不同，需自行优化。

4、 取匀浆液，立即加入等量洗涤液，轻轻颠倒混匀数次。

5、 4℃ 1300g 离心 5min 以去除细胞核、未破碎的细胞和大的膜碎片。

6、 上清液转移至一干净离心管，4℃ 1000g 离心 5min，重复 2 次。

7、 上清液转移至一干净离心管，4℃ 12000～15000g 离心 15min，重复 1 次。

8、 弃上清，沉淀为线粒体。如果希望获得去除线粒体的细胞浆蛋白，应在本步骤中收集上清，并且在收集上清时注意勿触及沉淀，随后把收集的上清 12000g 4℃离心 10min，上清即为去除线粒体的细胞浆蛋白。

9、 保存：弃上清，用适当缓冲液悬浮沉淀。如果用于线粒体酶活性或功能的分析，线粒体

沉淀应重悬于线粒体储存缓冲液；如果用于细胞浆蛋白的分析，获得的细胞浆蛋白应保存于 1×蛋白储存缓冲液，即按细胞浆蛋白：蛋白储存缓冲液 (5×)=4：1比例混合；如果用于双向电泳，应使用恰当的保存液。

注意事项：

1、 细胞计数 (如台盼蓝染色液)对于不同实验不必全部使用，实验条件成熟后可以不用。

2、 如果不是用于制备线粒体蛋白，裂解液和洗涤液中不必加入 PMSF。如果用于制备线粒体蛋白样品，裂解液和洗涤液中需添加 PMSF。PMSF 一定要在试剂加入到样品中前 1～2min 内加入，以免 PMSF在水溶液中失效。

3、 分离线粒体的所有步骤均需在冰上或 4℃进行，所用溶液需冰浴或 4℃预冷，全部操作时间尽量控制在 1h 以内。

4、 通常在分离线粒体时前后两次离心速度选取 1000g 和 15000g，如果希望纯度更高，但对线粒体的得率要求不高，前后两次离心速度可用 2000g 和 6000g。

5、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：

-20℃保存一年。