本制品是通过PCR方法检测培养细胞等生物材料中支原体的Primer Sets。常规培养法进行支原体检出需要一周时间,使用本Kit通过PCR扩增及电泳分析进行支原体检出只需数个小时,操作方便简单。使用本Kit能检出几种不同种类的支原体(M. fermentans, M. hyorhinis, M. arginini, M. orale, M. salivarium, M. hominis, M. pulmonis, M. arthritidis, M. neurolyticum, M. hyopneumoniae, M. capricolum) 以及尿素原体 (UreaPlasma) 属中的1种(U. urealyticum)。当与TaKaRa Taq或TaKaRa Ex Taq 结合使用,可以获得更好的扩增效果。
本制品以支原体 (Mycoplasma) 的16S rRNA为目的基因,利用Real Time PCR对支原体进行高通量、特异性检出的试剂盒。使用本制品能高感度地检测出培养细胞中至少10种支原体M. arginini, M. hominis, M. hyorhinis, M. orale, M. salivarium, M. fermentas, M. bovis,M. arthritidis,M. pirum,M. pneumoniae) 以及Acholeplasma属中的1种 (A. laidlawii)。 本制品使用了改良后的Hot Start法用DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq HS,可以有效地抑制在配制反应液时发生的引物错配及引物二聚体引起的非特异性PCR扩增,大大提高PCR的检测灵敏度。 本制品采用Cycling Probe法进行检测,Cycling Probe法是由RNA和DNA构成的杂合探针与RNase H组合使用的高灵敏度检出法,能够高效率地检出扩增过程中及扩增结束时的目的基因片段。Cycling Probe内部含有RNA碱基,一端标记荧光物质,另一端标记荧光淬灭物质,当探针处于完整状态时,由于荧光淬灭作用抑制荧光物质发出荧光,但当探针与扩增产物中的互补序列杂交后,RNase H在RNA部分将探针切断,淬灭抑制作用解除,荧光物质发出荧光。通过测定荧光强度,能够实时监控扩增产物量。如果探针的RNA部分与模板不匹配,RNaseH就不能在RNA部分将探针切断。试剂盒中使用的探针是与支原体16S rRNA碱基互补的RNA,故可针对支原体进行高灵敏度的特异性检出。
牛支原体(Mycoplasma bovis)是一种世界性的病原体,是牛的肺炎,乳腺炎,关节炎和各种其他症状的致病因子。匈牙利菌株的抗生素敏感性谱在测试的氟喹诺酮类药物中是一致的。三种菌株(MYC44,MYC45和MYC46)对恩诺沙星具有较高的MIC值(≥10μg/ mL),而其余菌株受到恩氟沙星的抑制,MICs≤0.312或0.625μg/ mL [1]。
[1]. Sulyok KM, et al.Antibiotic susceptibility profiles of Mycoplasma bovis strains isolated from cattle in Hungary, Central Europe. BMC Vet Res. 2014 Oct 25;10:256.
[2]. Hetze S, et al. Superiority of preventive antibiotic treatment compared with standard treatment of poststroke pneumonia in experimental stroke: a bed to bench approach. J Cereb Blood Flow Metab. 2013 Jun;33(6):846-54