3,4-二磷酸磷脂酰肌醇

3,4-二磷酸磷脂酰肌醇

货号:
K-3800

品牌:
Echelon

产品简介
英文名称 PI(3,4P)P2 Mass ELISA
货期 3-5Weeks
规格 1ea
PI(3,4)P2 定量检测 Elisa 试剂盒

磷脂酰肌醇 (phosphotidylinositol,PI) 是构成细胞膜的重要组分之一,同时在细胞内外环境信号的传递上也起着非常重要的作用。

美国Echelon提供各类磷脂酰肌醇(PIPn)及检测工具 。助力细胞膜以及细胞信号通路上的研究!

Denver丹佛电子天平PI-4002D

Denver丹佛电子天平PI-4002D

Denver丹佛电子天平PI-4002D

产品编号:
市场价:¥0.00
会员价:¥0.00
品牌:Denver丹佛
生产厂家:Denver丹佛

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Denver丹佛电子天平PI-4002D

PI系列专业型电子天平

■ 特制纯铝防风罩背板,全面提升天平的防静电能力

■ 由时间和温度触发的全自动校准和调整功能(DenverCal功能)

■ 四种语言,大屏幕人机对话系统

■ 条形图显示称重量和应用

■ 全程温度补偿

■ 超载保护

 

■ 无需特殊软件实现与Windows之间的数据传送、数据统计功能水平气泡前置,方便调节水平

■ 方便装卸的防风罩

■ 提供三种接口方式, USB/LAN/RS232接口

■ 超级一体传感器,超高速微处理器

■ 满足ISO9001, ISO14001, GMP/GLP等标准

■ 应用程序:计数、动物称重、百分比称量、单位转换、公式求和、统计、重量控制功能

 Denver丹佛电子天平PI-4002D

型号           量程(g)          可读性(mg)          称盘尺寸(mm)              重复性(≤±mg)               线性(≤±mg)

PI-114A      110              0.1                      ø80                           0.1                               0.1

PI-214A      210              0.1                      ø80                           0.1                               0.1

PI-314A      310              0.1                      ø80                           0.2                               0.2

 

PI-203A      200                1                       ø 114                         1                                  1

PI-403A      400                1                       ø 114                         1                                  1

PI-603DA    100/600      1/10                      ø 114                        1/10                             1/10

PI-402A      400                10                      ø 114                        10                                10

PI-602A      600                10                      ø 114                        10                                10

 

PI-2002A    2,000            10                      178 x 178                  10                                 10

PI-4002A    4,000            10                      178 x 178                  10                                 10

PI-4002DA  400/4,000     10/100                178 x 178                  10/100                          10/100

PI-6001A    6,000            100                     178 x 178                  100                               100

Propidium Iodide (碘化丙啶,PI) 货号: P4034 规格: 50 mg

Propidium Iodide (碘化丙啶,PI)

产品货号: P4034

产品规格: 50 mg

目录价(元):400

推荐仪器:荧光显微镜

大包装询价


产品概述:

产品参数
外观:可溶于水或DMSO的橙红色固体
Ex/Em(结合DNA)=535/617 nm
Ex/Em(未结合DNA)=493/636 nm
CAS号:25535-16-4
分子式:C27H34I2N4
分子量:668.4
分子结构图:
Propidium Iodide (碘化丙啶,PI) 货号:               P4034  规格:               50 mg

储存条件
4℃避光保存,有效期见外包装。

产品介绍

Propidium Iodide(碘化丙啶,PI)是一种核酸荧光染料,可用于哺乳动物、细菌、酵母的染色。它不能透过活细胞膜,但能够透过死细胞和凋亡中晚期细胞的细胞膜而使细胞核染色。因此,PI作为荧光探针常用于细胞凋亡(apoptosis)或细胞坏死(necrosis)的检测。进入细胞后,PI与DNA和RNA结合,荧光强度增强20-30倍。在流式细胞分析中,PI常与其他染料如 Calcein-AM、Hoechst 33258或Hoechst 33342联合使用,来区分凋亡早晚期细胞以及死细胞。此外,PI也常作为多色荧光染色的复染剂使用。
以贴壁细胞(96孔板)举例,每孔100 μL染色工作液,染色工作液浓度5 μM计算,50 mg配置为工作液大概可以用于149611个孔的染色。

注意事项
1. 使用前请将产品瞬时离心至管底,再进行后续实验。
2. PI被普遍认为具有致癌性,请注意适当防护。
3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


说明书:

Propidium Iodide (碘化丙啶,PI) 货号:               P4034  规格:               50 mg UE-P4034    
常见问题解答:

需要将PI染色后的样品冻存起来,请问是放在-4℃还是-20℃冻存啊?

4℃避光,不宜长时间保存。

染冰冻脑切片需要腹腔注射染么?
不需要腹腔注射,可以直接染切片样本,该产品仅仅是作为试剂原料提供,不提供详细的使用方法,具体的操作最好参考相关的文献确定。

做细胞的免疫荧光,用多聚甲醛处理后,需要用RNase处理,才能用PI染色吗?
如果做细胞周期,需要RNase A处理。其他的免疫荧光染色的细胞核染色,不需要的。

表达红色荧光蛋白的细胞经PI染色后做流式会有影响吗?
两种荧光有重叠,会干扰结果的判断。


使用本产品的文献:

参考文献
1.DRP1 upregulation promotes pancreatic cancer growth and metastasis through increased aerobic glycolysis
应用方向:细胞流式&周期检测

2.Histone deacetylases inhibitor MS‐275 suppresses human esophageal squamous cell carcinoma cell growth and progression via the PI3K/Akt/mTOR pathway
应用方向:细胞流式&凋亡检测

3.Identification and characterization of two subpopulations of Encephalitozoon intestinalis
应用方向:细菌染色

4.Analysis and isolation of embryonic mammalian neurons by fluorescence-activated cell sorting
应用方向:细胞染色

PI-PspI #R0695S 500 units-NEB酶试剂 New England Biolabs

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs(NEB)酶试剂全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品资料 – 限制性内切酶 – 归位内切酶

PI-PspI                              收藏

PI-PspI                                      #R0695S 500 units PI-PspI                                      #R0695S 500 units PI-PspI                                      #R0695S 500 units PI-PspI                                      #R0695S 500 units PI-PspI                                      #R0695S 500 units PI-PspI                                      #R0695S 500 units PI-PspI                                      #R0695S 500 units

货 号
规 格
价 格(元)
北京库存
上海库存
广州库存
成都库存
苏州库存
武汉库存

#R0695S
500 units
889.00

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在不同反应缓冲液的活性

NEBuffer 1.1: <10%
NEBuffer 2.1: 10%
NEBuffer 3.1: 10%
CutSmart Buffer: 10%

特性

重组酶。

反应条件

Pl-Pspl 反应缓冲液+ BSA,65℃。

特异性

该内切酶的靶序列或识别位点如下所示:

PI-PspI                                      #R0695S 500 units

浓度

5,000 units/ml。

37℃ 时活性

5%。

注意事项

归位内切酶没有严格定义的识别序列。

参考文献

有关该产品特性及应用详情请联系我们。:www.jinpanbio.comwww.jinpanbio.cn

PI-SceI #R0696S 250 units-NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – 限制性内切酶 – 归位内切酶

PI-SceI                              收藏

PI-SceI                                     #R0696S 250 units PI-SceI                                     #R0696S 250 units PI-SceI                                     #R0696S 250 units PI-SceI                                     #R0696S 250 units PI-SceI                                     #R0696S 250 units PI-SceI                                     #R0696S 250 units

货 号
规 格
价 格(元)
北京库存
上海库存
广州库存
成都库存
苏州库存
武汉库存

#R0696S
250 units
889.00

Download:       

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在不同反应缓冲液的活性

NEBuffer 1.1: <10%
NEBuffer 2.1: <10%
NEBuffer 3.1: <10%
CutSmart Buffer: <10%

特性

重组酶。

反应条件

PI-SceI 反应缓冲液 + BSA,37℃。
热失活:65℃ 20 分钟。

特异性

该内切酶的靶序列或识别位点如下所示:

PI-SceI                                     #R0696S 250 units

浓度

5,000 units/ml。

注意事项

归位内切酶没有严格定义的识别序列。

参考文献

有关该产品特性及应用详情请联系我们。:www.jinpanbio.comwww.jinpanbio.cn

Denver丹佛PI系列专业型电子天平

Denver丹佛PI系列专业型电子天平

Denver丹佛PI系列专业型电子天平

产品编号:
市场价:¥0.00
会员价:¥0.00
品牌:Denver丹佛
生产厂家:Denver丹佛

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 特制纯铝防风罩背板,全面提升天平的防静电能力
· 由时间和温度触发的全自动校准和调整功能(De rwe rcal功能)
· 四种语言,大屏幕人机对话系统;条形图显示称重量和应用
· 超级一体传感器,超高速微处理器;全程温度补偿温;超载保护保
· 无需特殊软件实现与Windows之间的数据传送、数据统计功能
· 水平气泡前置,方便调节水平;方便装卸的防风罩
· 提供三种接口方式,USB/LAN/ RS232接口
· 满足IS09001,IS014001,GMP/ GLP等标准
· 应用程序:计数、动物称重、百分比称量、单位转换、公式求和、统计,重量控制功能

 

型号

可读性

量程

称盘尺寸

重复性(≤±mg)

线性(≤±mg)

分析天平

PI-114A

0.1mg

110g

Ф80mm

0.1

0.1

PI-214A

0.1mg

210g

Ф80mm

0.1

0.1

PI-314A

0.1mg

310g

Ф80mm

0.2

0.1

精密天平

PI-203A

1mg

200g

Ф114mm

1

1

PI-403A

1mg

400g

Ф114mm

1

1

PI-603DA

1/10mg

100/600g

Ф11mm4

1/10

1/1010

PI-402A

10mg

400g

Ф114mm

10

10

PI-602A

10mg

600g

Ф114mm

10

10

PI-2002A

10mg

2000g

178*178mm

10

10

PI-4002A

10mg

4000g

178*178mm

10

10

PI-4002DA

10/100mg

40/4000g

178*178mm

10/100

10/100

PI-6001A

100mg

6000g

178*178mm

100

100

AnnexinV-FITC/PI双染细胞凋亡检测试剂

AnnexinV-FITC/PI双染细胞凋亡检测试剂

货号:BL110A

规格:50T

品牌:Jinpan

Annexin V-FITC/PI Apoptosis Assay Kit

Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡检测试剂盒

产品简介:

磷脂酰丝氨酸(PS)是一种带负电荷的磷脂,正常细胞中,PS只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜中的PS由脂膜内侧翻向细胞膜外侧,使PS暴露在细胞膜外表面。而Annexin V是一种分子量为35~36kDCa2+依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被公认为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。

本产品将Annexin V进行绿色荧光素(FITC)标记,以标记了的Annexin V作为探针,利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种核酸染料,它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜,但对凋亡中晚期的细胞和坏死细胞,PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此采用Annexin VPI双染的方法,就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。

本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测(不推荐用于检测组织样本)。

产品组成:

    

组分

规格

Annexin V-FITC

250μl

Propidium Iodide, PI

500μl

Binding Buffer ( 4× )

10ml

 

 

使用方法:

1.细胞样品的准备:

A.悬浮细胞:

1)收集细胞至离心管中1000-2000rpm离心5min,小心去除上清。

2)用1ml 4℃预冷PBS轻轻重悬细胞并计数,1000-2000rpm离心5min,小心吸除上清。

3)再加入1ml 4℃预冷的PBS重悬细胞,1000-2000rpm离心5min,小心吸除上清。

B.贴壁细胞:

1)吸出细胞培养液至离心管中,PBS洗涤贴壁细胞一次,加入适量不含EDTA的胰酶细胞消化液消化细胞。

2)室温孵育至轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时,吸除胰酶细胞消化液。需避免胰酶的过度消化。

3)加入以上步骤中收集的细胞培养液,稍混匀,转移到离心管内,1000-2000rpm离心5min,小心吸除上清。

注:加入的细胞培养液一方面可以收集已经悬浮的发生凋亡或坏死的细胞,另一方面细胞培养液中的血清可以有效抑制或中和残留的胰酶;残留的胰酶会消化并降解后续加入的Annexin V-FITC导致染色失败。

4)用1ml 4℃预冷PBS轻轻重悬细胞并计数,1000-2000rpm离心5min,小心吸除上清。

5)再加入1ml 4℃预冷的PBS重悬细胞,1000-2000rpm离心5min,小心吸除上清。

2.用去离子水按14稀释Binding Buffer4ml Binding Buffer+12ml去离子水);

3.250μl稀释过的Binding Buffer重新悬浮细胞,调节其浓度为1×106/ml

4.100μl的细胞悬液于5 ml流式管中,加入5μl Annexin V-FITC,轻轻混匀;

5.室温(20-25℃)避光孵育10min

6.上机前5min加入10μl碘化丙啶溶液,轻轻混匀;

7.上机前在反应管中补加400μl PBS重悬细胞, 避光保存,随即进行流式细胞仪(FACS)检测, Annexin V-FITC为绿色荧光,PI为红色荧光。

 

保存条件:

4℃避光保存,有效期一年。

货号 BL110A
规格 50T
品牌 Jinpan
说明书下载 点击下载

Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒

Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒货号: JP50001

产品描述
描述

在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧,细胞发生凋亡最早期,膜磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧,这一变化早于细胞皱缩、染色质浓缩、DNA片断化和细胞膜的通透性增加等凋亡现象。Annexin V是一种磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种核酸染料, 它不能透过完整的细胞膜,但凋亡中晚期的细胞和死细胞由于细胞膜通透性的增加,PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V 与PI 匹配使用,就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。

产品组分
25 Tests 50 Tests 100 Tests
AnnexinV-FITC 125μl 250μl 500μl
10×Binding Buffer 1.5ml 2.5ml 6.5ml
Propidium Iodide 125μl 250μl 500μl
操作步骤
贴壁细胞需用 0.25%的胰酶消化。注意过度消化可损伤细胞。在消化时可加 2%的BSA可防止消化过度。如果用含EDTA的胰酶消化时,注意必须彻底清除EDTA:在标记前用 1×PBS或 1×binding buffer洗涤,清除EDTA,以免残余的EDTA与Ca2+螯合,影响Annexin V的结合。
(1) 用去离子水将 10×Binding Buffer 稀释成 1×Binding Buffer;
(2) 细胞收集:悬浮细胞收集:离心 5 分钟;贴壁细胞:用不含EDTA的胰酶消化收集后( 注:胰酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V-FITC 的结合),在室温中,2000rpm 离心 5~10 分钟,收集细胞;
(3) 细胞洗涤:用预冷 1×PBS(4℃)重悬细胞一次,2000rpm 离心 5~10分钟,弃上清洗涤细胞;
(4) 加入 300μL 的 1×Binding Buffer 悬浮细胞;
(5) Annexin V-FITC 标记:加入 5μL 的 Annexin V-FITC 混匀后,避光,室温孵育 15 分钟;
(6) PI 标记:上机前 5 分钟再加入 5μL 的 PI 染色。
(7) 上机前,补加 200μL 的 1×Binding Buffer。
注意:每个反应体系建议细胞数为1×104至1×106
操作说明
(1) 使用前低速离心,以免液体积存管盖和管壁;
(2) 本试剂只适用于实验,不适用于临床检测;
(3) PI(propidium iodide,溴化丙锭)有毒性,能通过皮肤吸收,对眼睛有刺激作用,使用时需戴手套;
(4) Annexin V-FITC 和 PI 是光敏物质,在操作时请注意避光。在处理和标记时,尽可能在暗处进行。在孵育阶段,用铝箔包裹容器或置于抽屉中。细胞标记后,在暗室内用显微镜观察;
(5) 整个操作过程动作要尽量轻柔,勿用力吹打细胞,尽量在 4℃下操作,以免影响细胞状态。
(6) 在细胞洗涤的最后一步,请尽量将上清弃净,以免 PBS 残留,有可能会影响实验结果。
(7) 为防止荧光衰变,宜在 1 小时内进行流式检测。
(8) PI 染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,建议首先进行Annexin V-FITC 染色,最短可在上机前 5 分钟再加入 PI 染色。
基本信息
别名
Annexin V-FITC apoptosis assay kit
储存/保存方法
4℃保存6个月;避免反复冻融。

PI-273

PI-273CAS号: 925069-34-7分子式: C16H16ClN3O2S2分子量: 381.9描述纯度储存/保存方法可溶性/溶解性靶点In vitro(体外研究)In vivo(体内研究)

产品描述
描述
PI-273, a Substrate-Competitive, Specific Small-Molecule Inhibitor of PI4KIIα, Inhibits the Growth of Breast Cancer Cells
纯度
98%
储存/保存方法
Store at -20℃ for one year(Powder);Store at 2-4℃ for two weeks;Store at -20℃ for six months after dissolution.
基本信息
可溶性/溶解性
DMSO:6 mg/mL (15.71 mM)
生物活性
靶点
PI4KIIα:0.47 μM
In vitro(体外研究)
PI-273 exhibited the greatest inhibitory effect on PI4KIIα kinase activity (IC50 = 0.47 μmol/L) and suppressed cell proliferation.?Surface plasmon resonance and thermal shift assays indicated that PI-273 interacted directly with PI4KIIα.?The kinetic analysis identified PI-273 as a reversible competitive inhibitor with respect to the substrate phosphatidylinositol (PI), which contrasted with most other PI kinase inhibitors that bind the ATP binding site.?PI-273 reduced PI4P content, cell viability, and AKT signaling in wild-type MCF-7 cells, but not in PI4KIIα knockout MCF-7 cells, indicating that PI-273 is highly selective for PI4KIIα.?Mutant analysis revealed the role of palmitoylation insertion in the selectivity of PI-273 for PI4KIIα.?In addition, PI-273 treatment retarded cell proliferation by blocking cells in G2-M, inducing cell apoptosis and suppressing colony-forming ability.?Importantly, PI-273 significantly inhibited MCF-7 cell-induced breast tumor growth without toxicity.?PI-273 is the first substrate-competitive, a subtype-specific inhibitor of PI4KIIα, the use of which will facilitate evaluations of PI4KIIα as a cancer therapeutic target.
In vivo(体内研究)
PI-273 (intraperitoneal injection; 25 mg/kg/day; 15 days) profoundly suppresses the tumor volume and weight in the MCF-7 xenografts[1].PI-273 (0.5 mg/kg (intravenously) or 1.5 mg/kg (intragastrically); 0.08-5 hours) has a half-life of 0.411 hours for intravenous administration and 1.321 hours for intragastrical administration, and the JPolute bioavailability of PI-273 is 5.1%[1].

FITC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号: F6012S/F6012M/F6012L 规格: 10T/50T/100T

FITC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒

产品货号: F6012S/F6012M/F6012L

产品规格: 10T/50T/100T

目录价(元):220/737/1244

推荐仪器:流式细胞仪(主推)、荧光显微镜

大包装询价


产品概述:

产品内容:

组分

  F6012S10T

  F6012M50T

  F6012L100T

   A. 1× Annexin V 结合缓冲液

10 mL

50 mL

50 mL×2

B. FITC-Annexin V

50 μL

250 μL

500 μL

C. PI

100 μL

500 μL

1 mL

储存条件
4℃避光冷藏,请勿冻存。有效期见外包装。

光谱特性
FITC-Annexin V: Ex/Em = 494/518 nm
PI: Ex/Em = 535/617 nm (with DNA)

产品介绍

FITC-Annexin V/PI凋亡试剂盒提供了一种快速简便的方法,通过标记早期凋亡细胞(绿色)和坏死或晚期凋亡的细胞(红色)检测细胞凋亡水平。产品可以使用流式细胞仪或其它荧光检测设备进行检测。
Annexin V(膜联蛋白-V)是一种分子量为35-36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,可于磷脂酰丝氨酸(PS)选择性结合。磷脂酰丝氨酸(PS)主要分布在细胞膜内侧,即与细胞浆相邻的一侧。在细胞发生凋亡的早期,不同类型的细胞都会把磷脂酰丝氨酸外翻到细胞表面,暴露在细胞外环境中。此时,使用绿色荧光探针FITC标记的Annexin V,即FITC – Annexin V,与外翻的磷脂酰丝氨酸(PS)结合,就可用流式细胞仪或荧光显微镜直接检测到磷脂酰丝氨酸的外翻这一细胞凋亡的重要特征。对于坏死或晚期凋亡的细胞,由于细胞完整性已经被破坏,FITC – Annexin V则可以进入胞浆与处于磷脂层内侧的PS结合,从而也使坏死细胞呈现绿色荧光。
碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种DNA结合染料,它可以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞的细胞核。PI可以由488、532或546 nm的激光激发,呈现红色荧光。

注意事项
1. 使用前请将产品瞬时离心至管底,再进行后续实验。
2. 为降低细胞凋亡进程,孵育过程可在冰上操作,但孵育时间至少延长至30 min。
3. 由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后 1 h之内进行分析。
4. 对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,PI 摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与 FITC-Annexin V的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后,轻摇时胰酶与细胞充分接触,然后倒掉大部分胰酶,利用剩余的少量胰酶再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用 EDTA,EDTA 会影响 Annexin V 与 PS 的结合。
5. 贴壁细胞用胰蛋白酶消化后,建议在最佳培养条件和培养基中恢复约30 min后染色,避免假阳性。
6. 为了避免洗涤细胞时损失细胞,在吸液时可以用大的 Tip 头套上小的 Tip 头吸液。
7. 染料的最佳使用浓度由具体实验要求确定。
8. 荧光染料均存在淬灭问题,保存和使用过程中请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
9. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


说明书:

FITC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号:               F6012S/F6012M/F6012L  规格:               10T/50T/100T UE-F6012S/F6012M/F6012L    
MSDS:

MSDS F6012 FITC-Annexin V&PI
常见问题解答:

为何染色结果显示细胞凋亡率过高?

1. 凋亡时间处理过长,使细胞全部死亡。建议重新摸索细胞凋亡条件,使细胞处于不同的凋亡状态。
2. 对于贴壁细胞,胰蛋白酶消化时间过长或机械刮擦细胞会暂时破坏质膜,使Annexin V能够与细胞膜胞内面上的磷脂酰丝氨酸结合,导致假阳性染色。建议在胰蛋白酶消化或机械刮擦细胞后,让细胞在最佳细胞培养条件和培养基中培养约30分钟,以恢复其膜完整性。

实验结果使用什么仪器观察?
实验结果可以通过流式细胞仪和荧光显微镜进行观察,但更推荐使用流式细胞仪。因为正常的细胞和凋亡的细胞膜上都有磷脂酰丝氨酸(PS),只是凋亡细胞膜外更多,可以结合更多的Annexin V,流式细胞仪更灵敏,可以区分出微小差异,将正常细胞与凋亡细胞分成不同的两群,但如果用荧光显微镜,可能观察不到这一差别,尤其是贴壁细胞。若要在成像测定中检测细胞凋亡,推荐使用SuperView™ 488 Caspase-3 Assay Kit for Live Cells。

流式细胞仪检测细胞凋亡,结果图中的各个象限代表什么状态的细胞?
左上角:Annexin V-/PI+,机械损伤细胞;右上角: AnnexinV+/PI+,晚期凋亡细胞或坏死;右下角:AnnexinV+/PI-,早期凋亡细胞;左下角:AnnexinV-/PI-,正常细胞。

这款试剂盒可同时检测出凋亡率和细胞周期分布吗?
不可以。检测细胞凋亡时PI结合的是核酸,包括DNA和RNA。而PI用于检测细胞周期时需要只结合DNA,由于RNA的干扰,用细胞凋亡检测试剂盒测出来的细胞周期不准。同时,凋亡检测与周期检测时PI的工作浓度以及样本处理都不一样。 如果需要进行细胞周期检测,推荐Cell Cycle and Apoptosis Kit(C6031)

各象限代表的细胞状态问题?
Q1:(AnnexinV-染料)-/PI+,此区域的细胞为坏死细胞。也可能有少数的晚期凋亡细胞在其中,甚至机械损伤的细胞也包含其中。Annexin V-/PI+越多,实验结果越不可信,建议实验中尽量控制这一象限细胞比例。
Q2: (AnnexinV+染料)+/PI+,此区域的细胞为晚期凋亡细胞或坏死。
Q3:(AnnexinV-染料)+/PI-,此区域的细胞为早期凋亡细胞。
Q4:(AnnexinV-染料)-/PI-,此区域的细胞为活细胞。

FITC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号:               F6012S/F6012M/F6012L  规格:               10T/50T/100T


假阳性问题?

1. 消化液中含有EDTA或消化时间过长引起的假阳性。Annexin V和PS的结合需要Ca2+,而EDTA是Ca2+螯合剂,使用含有EDTA的胰酶会造成假阴性。其次消化时间不宜过长,吹打细胞要轻柔,因为胰酶的过度消化和机械损伤都会引起细胞膜的损伤,造成假阳性。细胞消化下来后,建议在培养箱中在孵育30min,使细胞膜恢复完整性,避免假阳性,或者将细胞报讯在含2% BSA的PBS中,防止进一步的损伤。
2. 如果样品来源于血液,必须去除血液中的血小板,因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,干扰实验结果。建议:可以含有EDTA的缓冲液200g离心去除血小板, 最后细胞多洗几遍,减小EDTA螯合钙离子产生的影响。
3. 神经细胞膜容易破坏外翻,导致假阳性,所以Annexin V/PI 双染法流式检测细胞凋亡不适用于神经细胞。
4. 诱导时间过长。一般情况下诱导几个小时就可以出现早期凋亡,因此通常不需要处理大于48小时以上,诱导时间过长会使营养物质耗尽,导致细胞状态差,假阳性结果偏高。

荧光染料选择的问题?
1. 实验样本是否带荧光,因为感染病毒或质粒转染的细胞往往带GFP荧光,GFP与YF488/FITC通道重叠,不能选择YF488/FITC标记的Annexin V,此时如果只有488 nm一根激光管可以用PE标记Annexin V,用7-AAD代替PI,若有633 nm激光管,可以改用YF647 Annexin V代替YF488。
2. 如果流式细胞仪带有488 nm和633 nm两个或以上激光管,首先考虑用APC或YF647标记 Annexin V,因为它和PI通道几乎不用考虑光重叠问题,可以减少调节补偿的烦恼,如果只有488 nm激光管则可选择YF488/FITC标记的Annexin V。
3. 处理因素是否带有荧光,本实验室就碰到过一个促凋亡药物Doxorubicin本身发红色荧光,对PI通道的检测造成严重干扰,而且浓度越大干扰越明显。这时建议选用A6079或Y6102 。

圈门问题?
1.要特别注意在FSC/SSC圈门时,所选细胞范围会对结果造成较大影响,所以在分析数据时,要把所有细胞都圈进FSC/SSC的门内,这样实验结果才会更可信。如图,使细胞群大概位于对角线上,并且细胞群较集中,群内细胞比例要在80%以上,如果细胞全部圈入,细胞比例才50%或者更低,说明细胞被压在了坐标轴上,这时要重新调节FSC和SSC。
2.贴壁细胞做Annexin V凋亡检测,通常分群不太规则,这时我们可以根据不加药细胞来画不规则的十字门。如上面图形的设门方式:
FITC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号:               F6012S/F6012M/F6012L  规格:               10T/50T/100TFITC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号:               F6012S/F6012M/F6012L  规格:               10T/50T/100T

免疫染色与凋亡染色顺序问题?
Annexin V凋亡染色可以和抗体一起对细胞进行染色吗?
可以,但建议Annexin V和其它抗体分开染色。例如Annexin V、PI和CD3、CD8同时标记淋巴细胞,可以先在PBS中标记CD3/CD8后洗去,再在Binding buffer(含钙离子)中标记Annexin V。

这款试剂盒可同时检测出凋亡率和细胞周期分布吗?
不可以。检测细胞凋亡时PI结合的是核酸,包括DNA和RNA。而PI用于检测细胞周期时需要只结合DNA,由于RNA的干扰,用细胞凋亡检测试剂盒测出来的细胞周期不准。同时,凋亡检测与周期检测时PI的工作浓度以及样本处理都不一样。 若果需要进行细胞周期检测,推荐Cell Cycle and Apoptosis Kit(C6031)

固定、冷冻、切片或解离的组织,还可以做流式细胞分析吗?
不建议做流式细胞分析。因为流式细胞分析要求细胞分散、单个,活性好,这些状态下的样本外膜上的PS及膜的完整性都受到了影响,因此无法依赖膜的完整性区分健康细胞和凋亡细胞。组织在冻存、复温的过程中会有大量的细胞死亡,同时经过这一过程的组织在分离成单个细胞的时候会形成许多细胞碎片,不宜上流式检测,所以用于流式检测的标本最好是新鲜标本,即取材后立即检测,效果最好。 液氮保存的组织块,可以将组织标本进行切片,然后做原位染色,观察组织细胞的凋亡。

Annexin V可以用在植物和细菌中吗?
Annexin V也可以用在植物和细菌中检测凋亡,具体实验步骤可参考相关文献。
使用本产品的文献:

1.MTP18 overexpression contributes to tumor growth and metastasis and associates with poor survival in hepatocellular carcinoma
Zhang, Yu Li, Hui Chang, Hulin Du, LixUE  Hai, Jun Geng, Xilin Yan, Xiang
cell death and disease(2018) 
应用方向:流式细胞仪检测:SMMC7721和 HLF 细胞的凋亡

2.
MS-275对食管鳞癌KYSE-70细胞存活、凋亡、细胞周期以及迁移的影响
刘腾飞,周建康,黄团结,王亚苹,周馨魁,张 乐,张璐玉,陈一豪,刘红涛,关方霞,马珊珊
郑州大学学报(医学版)(2018) 5 547-552
应用方向:流式细胞仪检测:食管鳞癌KYSE-70细胞的凋亡

3.
Histone deacetylases inhibitor MS‐275 suppresses human esophageal squamous cell carcinoma cell growth and progression via the PI3K/Akt/mTOR pathway
Shanshan Ma  Tengfei Liu  Ling Xu  Yaping Wang  Jiankang Zhou  Tuanjie Huang  Peng Li  Hongtao Liu Yanting Zhang  Xinkui Zhou  Yuanbo Cui  Xingxing Zang  Yuming Wang  Fangxia Guan
Journal of Cellular Physiology (23 May 2019)
应用方向:细胞凋亡检测:食管鳞状癌细胞(ESCC)

4.
SDHC-related deficiency of SDH complex activity promotes growth and metastasis of hepatocellular carcinoma via ROS/NFκB signaling
JibinLi,NingLiang,XiaoyuLong,JingZhao,JinYang,XiaohongDu,TaoYang,PengYuan,XiaojunHuang,JianshengZhang,XianliHe,JinliangXing
Cancer Letters Volume 461, 1 October 2019, Pages 44-55
应用方向:细胞凋亡检测::肝细胞癌(HCC)

5.
MTFP1 overexpression promotes the growth of oral squamous cell carcinoma by inducing ROS production
Tingying Xiao,Jian Sun,Zhankui Xing,Fuqiang Xie,Lan Yang,Wenjuan Ding
CELL BIOLOGY INTERNATIONAL
应用方向:细胞凋亡检测:口腔鳞状细胞(OSCC)

6.ALG-2 couples T cell activation and apoptosis by regulating proteasome activity and inflUEncing MCL1 stability
Tian-Sheng He, Wangsheng Ji, Junqi Zhang, Jing Lu,Xinqi Liu 
Cell Death & Disease(11, Article number: 5 (2020))

7.Over‐expression of TFB2M facilitates cell growth and metastasis via activating ROS‐Akt‐NF‐κB signaling in hepatocellular carcinoma
Xilin Geng,Zhimin Gen,Hui Li,Yu Zhang,Jibin Li,Hulin Chang
liver international

8.CRIF1 overexpression facilitates tumor growth and metastasis through inducing ROS/NFκB pathway in hepatocellular carcinoma
Hulin Chang,Juntang Li,Kai Qu,Yong Wan,Sinan Liu,Wei Zheng,Zhiyong Zhang,Chang Liu
 Cell Death & Disease volume 11, Article number: 332 (2020) 

9.Caffeine Targets G6PDH to Disrupt Redox Homeostasis and Inhibit Renal Cell Carcinoma Proliferation
Huanhuan Xu,Lihong Hu, Titi Liu1, Fei Chen, Jin Li, Jing Xu, Li Jiang, Zemin Xiang, Xuanjun Wang,Jun Sheng
Frontiers in Cell and Developmental Biology

10.A Network Pharmacology Approach to Investigate the Anticancer Mechanism and Potential Active Ingredients of Rheum palmatum L. Against Lung Cancer via Induction of Apoptosis
Qing Zhang, Jia Liu, Ruolan Li, Rong Zhao, Mengmeng Zhang, Shujun Wei, Dong Ran, Wei Jin, Chunjie Wu
Frontiers in Pharmacology

11.MIEF2 over-expression promotes tumor growth and metastasis through reprogramming of glucose metabolism in ovarian cancer
Shuhua Zhao, Xiaohong Zhang, Yuan Shi, Lu Cheng, Tingting Song, Bing Wu, Jia Li & Hong Yang
Journal of Experimental & Clinical Cancer Research

12.Repurposing Erythrocytes as a “Photoactivatable Bomb”: A General Strategy for Site-Specific Drug Release in Blood Vessels
Ya-Xuan Zhu,Hao-Ran Jia,Yuxin Guo,Xiaoyang Liu,Ningxuan Zhou,Peidang Liu,Fu-Gen Wu
Small

13.Multienzyme-like Reactivity Cooperatively Impairs Glutathione Peroxidase 4 and Ferroptosis Suppressor Protein 1 Pathways in Triple-Negative Breast Cancer for Sensitized Ferroptosis Therapy
Ke Li, Chuanchuan Lin, Menghuan Li, Kun Xu, Ye He, Yulan Mao, Lu Lu, Wenbo Geng, Xuemin Li, Zhong Luo, Kaiyong Cai
ACS Nano

14.A multiple functional supramolecular system for synergetic treatments of hepatocellular carcinoma
LijingSun, LiyuanChen, KeYang, Wei FengDai, YeYang, XiumingCui, BoYang, ChengxiaoWang
International Journalof Pharmaceutics