膜联蛋白(Annexin V)检测酶试剂盒Takara Clontech

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膜联蛋白(Annexin V)检测
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 630109 ApoAlert Annexin V-FITC Apoptosis Kit 50 Rxns ¥3,406 膜联蛋白(Annexin V)检测 膜联蛋白(Annexin V)检测 膜联蛋白(Annexin V)检测
Clontech 630110 ApoAlert Annexin V-FITC Apoptosis Kit 200 Rxns ¥9,913 膜联蛋白(Annexin V)检测 膜联蛋白(Annexin V)检测 膜联蛋白(Annexin V)检测
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ApoAlert Annexin V-FITC 细胞凋亡试剂盒提供了一种简单有效的方法来检测活细胞中最早的细胞凋亡事件之一——磷脂酰丝氨酸 (PS) 的外翻。在诱导细胞凋亡后不久,PS 从质膜的内小叶转移到外小叶。该测定方法使用对 PS 具有强且特异性亲和力的膜联蛋白 V 来监测由于细胞凋亡而发生的 PS 易位。标记的膜联蛋白 V 提供了一种简单的染色分析,可通过流式细胞术或荧光显微镜监测细胞凋亡。
 
概述
易用性:非酶促测定,无需固定
操作简单:只需 10 分钟即可完成的一步法操作流程
通用性:适用于贴壁细胞和悬浮细胞
 
更多信息
应用
早期凋亡检测
通过流式细胞术或荧光显微镜监测磷脂酰丝氨酸易位
 
 
产品详情请点击:膜联蛋白(Annexin V)检测
 
 

页面更新:2021-08-13 14:52:46

Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒

Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒货号: JP50001

产品描述
描述

在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧,细胞发生凋亡最早期,膜磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧,这一变化早于细胞皱缩、染色质浓缩、DNA片断化和细胞膜的通透性增加等凋亡现象。Annexin V是一种磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种核酸染料, 它不能透过完整的细胞膜,但凋亡中晚期的细胞和死细胞由于细胞膜通透性的增加,PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V 与PI 匹配使用,就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。

产品组分
25 Tests 50 Tests 100 Tests
AnnexinV-FITC 125μl 250μl 500μl
10×Binding Buffer 1.5ml 2.5ml 6.5ml
Propidium Iodide 125μl 250μl 500μl
操作步骤
贴壁细胞需用 0.25%的胰酶消化。注意过度消化可损伤细胞。在消化时可加 2%的BSA可防止消化过度。如果用含EDTA的胰酶消化时,注意必须彻底清除EDTA:在标记前用 1×PBS或 1×binding buffer洗涤,清除EDTA,以免残余的EDTA与Ca2+螯合,影响Annexin V的结合。
(1) 用去离子水将 10×Binding Buffer 稀释成 1×Binding Buffer;
(2) 细胞收集:悬浮细胞收集:离心 5 分钟;贴壁细胞:用不含EDTA的胰酶消化收集后( 注:胰酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V-FITC 的结合),在室温中,2000rpm 离心 5~10 分钟,收集细胞;
(3) 细胞洗涤:用预冷 1×PBS(4℃)重悬细胞一次,2000rpm 离心 5~10分钟,弃上清洗涤细胞;
(4) 加入 300μL 的 1×Binding Buffer 悬浮细胞;
(5) Annexin V-FITC 标记:加入 5μL 的 Annexin V-FITC 混匀后,避光,室温孵育 15 分钟;
(6) PI 标记:上机前 5 分钟再加入 5μL 的 PI 染色。
(7) 上机前,补加 200μL 的 1×Binding Buffer。
注意:每个反应体系建议细胞数为1×104至1×106
操作说明
(1) 使用前低速离心,以免液体积存管盖和管壁;
(2) 本试剂只适用于实验,不适用于临床检测;
(3) PI(propidium iodide,溴化丙锭)有毒性,能通过皮肤吸收,对眼睛有刺激作用,使用时需戴手套;
(4) Annexin V-FITC 和 PI 是光敏物质,在操作时请注意避光。在处理和标记时,尽可能在暗处进行。在孵育阶段,用铝箔包裹容器或置于抽屉中。细胞标记后,在暗室内用显微镜观察;
(5) 整个操作过程动作要尽量轻柔,勿用力吹打细胞,尽量在 4℃下操作,以免影响细胞状态。
(6) 在细胞洗涤的最后一步,请尽量将上清弃净,以免 PBS 残留,有可能会影响实验结果。
(7) 为防止荧光衰变,宜在 1 小时内进行流式检测。
(8) PI 染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,建议首先进行Annexin V-FITC 染色,最短可在上机前 5 分钟再加入 PI 染色。
基本信息
别名
Annexin V-FITC apoptosis assay kit
储存/保存方法
4℃保存6个月;避免反复冻融。

Annexin V-PE/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒

Annexin V-PE/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒货号: JP50007

产品描述
描述

Annexin V (or Annexin A5) is a member of the annexin family of intracellular proteins that binds to phosphatidylserine (PS) in a calcium-dependent manner. PS is normally only found on the intracellular leaflet of the plasma membrane in healthy cells, but during early apoptosis, membrane asymmetry is lost and PS translocates to the external leaflet. Fluorochrome-labeled Annexin V can then be used to specifically target and identify apoptotic cells. Annexin V Binding Buffer is recommended for use with Annexin V staining.

Products List:

  25T 100T
Annexin V-PE 150ul 500ul
7-AAD 300ul 1ml
5×Binding buffer 5ml 15ml
Apoptosis Positive Control Solution 5ml 5ml
应用
Each lot of this reagent is quality control tested by immunofluorescent staining with flow cytometric analysis (The amount of the reagent is suggested to be used 5 µl/10^5 cells). Since applications vary, the appropriate dilutions must be determined for individual use.
使用方法
Suggested Staining Protocol:
A.Parameters regulation
1. Harvest cell(1×106-3×106cells), then sepatate the cells in two parts. Wash cells with cold PBS, then centrifuge the cells and disgard the supernatant.
2. Suspend one part of cells in 200μL 1× binding buffer, store at 4℃ for use.
3. Suspend the other part of cells in 500μL Apoptosis Positive Control Solution, and incubate for 10 minutes in room temperature. Wash cells with more than 3.0 mL cold PBS, blot the supernatant, then suspend the cells in 200μL 1× binding buffer.
4. Mix the two parts cells together, then separate the cells in three tubes, and add 100 μL of cells in each tube.
5. The first tube is Blank Control, the second one adds 5μL of Annexin V-PE, and the third one adds 5 μL 7-AAD solution.
6. Gently vortex each tube and incubate for 5 minutes in room temperature, protected from light.
7. Before analyzing by flow cytometry, using the blank control and single dye sample to regulate voltage and compensation.
B.Sample detection
1. Dilute 6 mL 5× binding buffer with 24 mL distilled water for 10 tests.
2. Harvest cell(about 1×106cells per test)then wash with cold PBS.
3. Suspend cells in 1 mL 1× Binding Buffer, 300×g centrifugation for 10 minutes, then remove the Binding Buffer from the cell pellet.
4. Resuspend cells in 1 mL 1×Binding Buffer , adjust cell concentration to 1×106cells/mL.
5. Add 100 μL of cells (1×105cells) to each labeled tube.
6. Add 5 μL of Annexin V-PE to appropriate tubes.
7. Gently vortex each tube and incubate for 10 minutes in room temperature, protected from light.
8. Add 5 μL 7-AAD solution incubation for 5min in room temperature, protected from light.
9. Add PBS to 500μL and vortex gently.
10. Analyze by flow cytometry in 1 hour.
基本信息
别名
Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Analysis Kit
储存/保存方法
Keep as concentrated solution. Store at 4°C and protected from prolonged exposure to light. Do not freeze.The validity period is 6 months.

Annexin I,Rabbit IgG anti-Mouse/Rat/Human,WB/IP/

2nnexin I,Rabbit IgG anti-Mouse/Rat/Human,WB/IP/

产品编号: sc-11387     
产品名称: Annexin I,Rabbit IgG anti-Mouse/Rat/Human,WB/IP/  
供应商: Santa
规格: 200ug
目录价: ¥:2980
库存状态:
CAS编号:
应用范围:
种属来源:
相关信息:
保存条件:
说明书地址: 点击查看详细

Annexin VI,Rabbit IgG anti-Mouse/Rat/Human,WB/IP/

2nnexin VI,Rabbit IgG anti-Mouse/Rat/Human,WB/IP/

产品编号: sc-11388     
产品名称: Annexin VI,Rabbit IgG anti-Mouse/Rat/Human,WB/IP/  
供应商: Santa
规格: 200ug
目录价: ¥:2980
库存状态:
CAS编号:
应用范围:
种属来源:
相关信息:
保存条件:
说明书地址: 点击查看详细

Annexin VII,Rabbit IgG anti-Mouse/Rat/Human,WB/IP/

2nnexin VII,Rabbit IgG anti-Mouse/Rat/Human,WB/IP/

产品编号: sc-11389     
产品名称: Annexin VII,Rabbit IgG anti-Mouse/Rat/Human,WB/IP/  
供应商: Santa
规格: 200ug
目录价: ¥:2980
库存状态:
CAS编号:
应用范围:
种属来源:
相关信息:
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YF®488-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号: Y6002S/Y6002M/Y6002L 规格: 10T/50T/100T

YF®488-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒

产品货号: Y6002S/Y6002M/Y6002L

产品规格: 10T/50T/100T

目录价(元):234/884/1326

推荐仪器:流式细胞仪(主推)、荧光显微镜

大包装询价


产品概述:

产品内容:

            规格

组分                  

  Y6002S10T

 Y6002M50T

 Y6002L100T

  A. 1× Annexin V 结合缓冲液

  10 mL

  50 mL

  50 mL×2

B. YF®488-Annexin V

  50 μL

  250 μL

  500 μL

C. PI

  100 μL

  500 μL

  1 mL


储存条件
4℃避光冷藏,请勿冻存。有效期见外包装。

光谱特性
YF®488-Annexin V: Ex/Em = 490/515 nm
PI: Ex/Em = 535/617 nm (with DNA)

产品介绍

YF®488-Annexin V和PI凋亡试剂盒提供了一种快速简便的方法,通过标记早期凋亡细胞(绿色)和坏死或晚期凋亡的细胞(红色),用于检测细胞凋亡水平。产品可以使用流式细胞仪或其它荧光检测设备进行检测。
Annexin V(膜联蛋白-V)是一种分子量为 35-36KD的 Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白,可于磷脂酰丝氨酸(PS)选择性结合。磷脂酰丝氨酸(PS)主要分布在细胞膜内侧,即与细胞浆相邻的一侧。在细胞发生凋亡的早期,不同类型的细胞都会把磷脂酰丝氨酸外翻到细胞表面,暴露在细胞外环境中。此时,使用绿色荧光探针 YF®488 标记的 Annexin V,即 YF®488-Annexin V,与外翻的磷脂酰丝氨酸(PS)结合,就可用流式细胞仪或荧光显微镜直接检测到磷脂酰丝氨酸的外翻这一细胞凋亡的重要特征。对于坏死或晚期凋亡的细胞,由于细胞完整性已经被破坏,YF®488-Annexin V则可以进入胞浆与处于磷脂层内侧的 PS 结合,从而也使坏死细胞呈现绿色荧光。
碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种 DNA 结合染料,它可以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞的细胞核。PI可以由488,532或546 nm的激光激发,呈现红色荧光。

注意事项
1.使用前请将产品瞬时离心至管底,再进行后续实验。
2.为降低细胞凋亡进程,孵育过程可在冰上操作,但孵育时间至少延长至30 min。
3.由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后 1 h之内进行分析。
4.对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,PI 摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与 YF®488-Annexin V的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后,轻摇时胰酶与细胞充分接触,然后倒掉大部分胰酶,利用剩余的少量胰酶再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用 EDTA,EDTA 会影响 Annexin V 与 PS 的结合。
5.贴壁细胞用胰蛋白酶消化后,建议在最佳培养条件和培养基中恢复约30 min后染色,避免假阳性。
6.为了避免洗涤细胞时损失细胞,在吸液时可以用大的 Tip 头套上小的 Tip 头吸液。
7. 染料的最佳使用浓度由具体实验要求确定。
8. 荧光染料均存在淬灭问题,保存和使用过程中请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
9. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


说明书:

YF®488-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号:               Y6002S/Y6002M/Y6002L  规格:               10T/50T/100T UE-Y6002S/Y6002M/Y6002L    
MSDS:

MSDS Y6002 YF®488-Annexin V&PI
客户使用反馈:


常见问题解答:

为何染色结果显示细胞凋亡率过高?

1. 凋亡时间处理过长,使细胞全部死亡。建议重新摸索细胞凋亡条件,使细胞处于不同的凋亡状态。
2. 对于贴壁细胞,胰蛋白酶消化时间过长或机械刮擦细胞会暂时破坏质膜,使Annexin V能够与细胞膜胞内面上的磷脂酰丝氨酸结合,导致假阳性染色。建议在胰蛋白酶消化或机械刮擦细胞后,让细胞在最佳细胞培养条件和培养基中培养约30分钟,以恢复其膜完整性。

实验结果使用什么仪器观察?
实验结果可以通过流式细胞仪和荧光显微镜进行观察,但更推荐使用流式细胞仪。因为正常的细胞和凋亡的细胞膜上都有磷脂酰丝氨酸(PS),只是凋亡细胞膜外更多,可以结合更多的Annexin V,流式细胞仪更灵敏,可以区分出微小差异,将正常细胞与凋亡细胞分成不同的两群,但如果用荧光显微镜,可能观察不到这一差别,尤其是贴壁细胞。若要在成像测定中检测细胞凋亡,推荐使用SuperView™ 488 Caspase-3 Assay Kit for Live Cells。

流式细胞仪检测细胞凋亡,结果图中的各个象限代表什么状态的细胞?
左上角:Annexin V-/PI+,机械损伤细胞;右上角: AnnexinV+/PI+,晚期凋亡细胞或坏死;右下角:AnnexinV+/PI-,早期凋亡细胞;左下角:AnnexinV-/PI-,正常细胞。

这款试剂盒可同时检测出凋亡率和细胞周期分布吗?
不可以。检测细胞凋亡时PI结合的是核酸,包括DNA和RNA。而PI用于检测细胞周期时需要只结合DNA,由于RNA的干扰,用细胞凋亡检测试剂盒测出来的细胞周期不准。同时,凋亡检测与周期检测时PI的工作浓度以及样本处理都不一样。 如果需要进行细胞周期检测,推荐Cell Cycle and Apoptosis Kit(C6031)

各象限代表的细胞状态问题?
Q1:(AnnexinV-染料)-/PI+,此区域的细胞为坏死细胞。也可能有少数的晚期凋亡细胞在其中,甚至机械损伤的细胞也包含其中。Annexin V-/PI+越多,实验结果越不可信,建议实验中尽量控制这一象限细胞比例。
Q2: (AnnexinV+染料)+/PI+,此区域的细胞为晚期凋亡细胞或坏死。
Q3:(AnnexinV-染料)+/PI-,此区域的细胞为早期凋亡细胞。
Q4:(AnnexinV-染料)-/PI-,此区域的细胞为活细胞。

YF®488-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号:               Y6002S/Y6002M/Y6002L  规格:               10T/50T/100T

假阳性问题?
1. 消化液中含有EDTA或消化时间过长引起的假阳性。Annexin V和PS的结合需要Ca2+,而EDTA是Ca2+螯合剂,使用含有EDTA的胰酶会造成假阴性。其次消化时间不宜过长,吹打细胞要轻柔,因为胰酶的过度消化和机械损伤都会引起细胞膜的损伤,造成假阳性。细胞消化下来后,建议在培养箱中在孵育30min,使细胞膜恢复完整性,避免假阳性,或者将细胞报讯在含2% BSA的PBS中,防止进一步的损伤。
2. 如果样品来源于血液,必须去除血液中的血小板,因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,干扰实验结果。建议:可以含有EDTA的缓冲液200g离心去除血小板, 最后细胞多洗几遍,减小EDTA螯合钙离子产生的影响。
3. 神经细胞膜容易破坏外翻,导致假阳性,所以Annexin V/PI 双染法流式检测细胞凋亡不适用于神经细胞。
4. 诱导时间过长。一般情况下诱导几个小时就可以出现早期凋亡,因此通常不需要处理大于48小时以上,诱导时间过长会使营养物质耗尽,导致细胞状态差,假阳性结果偏高。

荧光染料选择的问题?
1. 实验样本是否带荧光,因为感染病毒或质粒转染的细胞往往带GFP荧光,GFP与YF488/FITC通道重叠,不能选择YF488/FITC标记的Annexin V,此时如果只有488 nm一根激光管可以用PE标记Annexin V,用7-AAD代替PI,若有633 nm激光管,可以改用YF647 Annexin V代替YF488。
2. 如果流式细胞仪带有488 nm和633 nm两个或以上激光管,首先考虑用APC或YF647标记 Annexin V,因为它和PI通道几乎不用考虑光重叠问题,可以减少调节补偿的烦恼,如果只有488 nm激光管则可选择YF488/FITC标记的Annexin V。
3. 处理因素是否带有荧光,本实验室就碰到过一个促凋亡药物Doxorubicin本身发红色荧光,对PI通道的检测造成严重干扰,而且浓度越大干扰越明显。这时建议选用A6079或Y6102 。

 圈门问题?
1.要特别注意在FSC/SSC圈门时,所选细胞范围会对结果造成较大影响,所以在分析数据时,要把所有细胞都圈进FSC/SSC的门内,这样实验结果才会更可信。如图,使细胞群大概位于对角线上,并且细胞群较集中,群内细胞比例要在80%以上,如果细胞全部圈入,细胞比例才50%或者更低,说明细胞被压在了坐标轴上,这时要重新调节FSC和SSC。
2.贴壁细胞做Annexin V凋亡检测,通常分群不太规则,这时我们可以根据不加药细胞来画不规则的十字门。如上面图形的设门方式:
YF®488-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号:               Y6002S/Y6002M/Y6002L  规格:               10T/50T/100TYF®488-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号:               Y6002S/Y6002M/Y6002L  规格:               10T/50T/100T

免疫染色与凋亡染色顺序问题?
Annexin V凋亡染色可以和抗体一起对细胞进行染色吗?
可以,但建议Annexin V和其它抗体分开染色。例如Annexin V、PI和CD3、CD8同时标记淋巴细胞,可以先在PBS中标记CD3/CD8后洗去,再在Binding buffer(含钙离子)中标记Annexin V。

这款试剂盒可同时检测出凋亡率和细胞周期分布吗?
不可以。检测细胞凋亡时PI结合的是核酸,包括DNA和RNA。而PI用于检测细胞周期时需要只结合DNA,由于RNA的干扰,用细胞凋亡检测试剂盒测出来的细胞周期不准。同时,凋亡检测与周期检测时PI的工作浓度以及样本处理都不一样。 若果需要进行细胞周期检测,推荐Cell Cycle and Apoptosis Kit(C6031)

固定、冷冻、切片或解离的组织,还可以做流式细胞分析吗?
不建议做流式细胞分析。因为流式细胞分析要求细胞分散、单个,活性好,这些状态下的样本外膜上的PS及膜的完整性都受到了影响,因此无法依赖膜的完整性区分健康细胞和凋亡细胞。组织在冻存、复温的过程中会有大量的细胞死亡,同时经过这一过程的组织在分离成单个细胞的时候会形成许多细胞碎片,不宜上流式检测,所以用于流式检测的标本最好是新鲜标本,即取材后立即检测,效果最好。 液氮保存的组织块,可以将组织标本进行切片,然后做原位染色,观察组织细胞的凋亡。

Annexin V可以用在植物和细菌中吗?
Annexin V也可以用在植物和细菌中检测凋亡,具体实验步骤可参考相关文献。


使用本产品的文献:

1.Iron Accumulation Leads to Bone Loss by Inducing Mesenchymal Stem Cell Apoptosis Through the Activation of Caspase3
Ye YuanFei XuYan CaoLi XuChen YuFan YangPeng ZhangLiang WangGuangsi ShenJianrong WangYoujia Xu
Biological Trace Element Research(2018) 434–441
应用方向:流式细胞仪检测:骨髓间充质干细胞的凋亡

2.
铁蓄积诱导间充质干细胞凋亡并抑制成骨活性的研究
袁晔, 张鹏王亮, 徐非, 俞晨, 杨帆, 张辉, 易剑桥, 徐又佳
中华实验外科杂志 (2017) 1839-1842 
应用方向:流式细胞仪检测:骨髓间充质干细胞(BMSCs)的凋亡

3.Near-infrared upconversion–activated CRISPR-Cas9 system: A remote-controlled gene editing platform
Yongchun Pan, Jingjing Yang, Xiaowei Luan, Xinli Liu, XUEqing Li, Jian Yang, Ting Huang, Lu Sun, Yuzhen Wang.
Science Advances(2019)
应用方向:流式细胞仪检测:A549细胞的凋亡

4.外泌体介导乳腺癌 MCF-7 细胞对多柔比星耐药性的机制
张如月; 李朵璐; 杨哲; 郭金秀; 周玉冰
药学学报(2019)
应用方向:荧光显微镜凋亡检测:MCF-7、MCF-7/Exo、MCF-7/Dox细胞的凋亡

5.MS-275联合顺铂对食管鳞状细胞癌9706细胞氧化损伤和凋亡的影响
刘腾飞,王亚苹,李亚,张振坤,李喆,周馨魁,张璐玉,王文杰,刘红涛,张彦婷,关方霞,马珊珊
郑州大学生命科学学院
应用方向:流式细胞仪检测:食管鳞状细胞癌(鳞癌) EC9706细胞的凋亡

6.MS-275 combined with cisplatin exerts synergistic antitumor effects in human esophageal squamous cell carcinoma cells
Tengfei Liu,Fangxia Guan,Yaping Wang,Zhenkun Zhang,Ya Li,Yuanbo Cui,Zhe Li,Hongtao Liu,Yanting Zhang,Yuming Wang,Shanshan Ma
Toxicology and Applied Pharmacology Volume 395, 15 May 2020, 114971

7.Deformable liposomal codelivery of vorinostat and simvastatin promotes antitumor responses through remodeling tumor microenvironment
Bin Tu,Yang He,Binfan Chen,Yonghui Wang,Yanrong Gao,Mingjie Shi,Tuanbing Liu,Akmal M. Asrorov,Yongzhuo Huang
Biomaterials Science

FITC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号: F6012S/F6012M/F6012L 规格: 10T/50T/100T

FITC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒

产品货号: F6012S/F6012M/F6012L

产品规格: 10T/50T/100T

目录价(元):220/737/1244

推荐仪器:流式细胞仪(主推)、荧光显微镜

大包装询价


产品概述:

产品内容:

组分

  F6012S10T

  F6012M50T

  F6012L100T

   A. 1× Annexin V 结合缓冲液

10 mL

50 mL

50 mL×2

B. FITC-Annexin V

50 μL

250 μL

500 μL

C. PI

100 μL

500 μL

1 mL

储存条件
4℃避光冷藏,请勿冻存。有效期见外包装。

光谱特性
FITC-Annexin V: Ex/Em = 494/518 nm
PI: Ex/Em = 535/617 nm (with DNA)

产品介绍

FITC-Annexin V/PI凋亡试剂盒提供了一种快速简便的方法,通过标记早期凋亡细胞(绿色)和坏死或晚期凋亡的细胞(红色)检测细胞凋亡水平。产品可以使用流式细胞仪或其它荧光检测设备进行检测。
Annexin V(膜联蛋白-V)是一种分子量为35-36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,可于磷脂酰丝氨酸(PS)选择性结合。磷脂酰丝氨酸(PS)主要分布在细胞膜内侧,即与细胞浆相邻的一侧。在细胞发生凋亡的早期,不同类型的细胞都会把磷脂酰丝氨酸外翻到细胞表面,暴露在细胞外环境中。此时,使用绿色荧光探针FITC标记的Annexin V,即FITC – Annexin V,与外翻的磷脂酰丝氨酸(PS)结合,就可用流式细胞仪或荧光显微镜直接检测到磷脂酰丝氨酸的外翻这一细胞凋亡的重要特征。对于坏死或晚期凋亡的细胞,由于细胞完整性已经被破坏,FITC – Annexin V则可以进入胞浆与处于磷脂层内侧的PS结合,从而也使坏死细胞呈现绿色荧光。
碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种DNA结合染料,它可以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞的细胞核。PI可以由488、532或546 nm的激光激发,呈现红色荧光。

注意事项
1. 使用前请将产品瞬时离心至管底,再进行后续实验。
2. 为降低细胞凋亡进程,孵育过程可在冰上操作,但孵育时间至少延长至30 min。
3. 由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后 1 h之内进行分析。
4. 对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,PI 摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与 FITC-Annexin V的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后,轻摇时胰酶与细胞充分接触,然后倒掉大部分胰酶,利用剩余的少量胰酶再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用 EDTA,EDTA 会影响 Annexin V 与 PS 的结合。
5. 贴壁细胞用胰蛋白酶消化后,建议在最佳培养条件和培养基中恢复约30 min后染色,避免假阳性。
6. 为了避免洗涤细胞时损失细胞,在吸液时可以用大的 Tip 头套上小的 Tip 头吸液。
7. 染料的最佳使用浓度由具体实验要求确定。
8. 荧光染料均存在淬灭问题,保存和使用过程中请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
9. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


说明书:

FITC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号:               F6012S/F6012M/F6012L  规格:               10T/50T/100T UE-F6012S/F6012M/F6012L    
MSDS:

MSDS F6012 FITC-Annexin V&PI
常见问题解答:

为何染色结果显示细胞凋亡率过高?

1. 凋亡时间处理过长,使细胞全部死亡。建议重新摸索细胞凋亡条件,使细胞处于不同的凋亡状态。
2. 对于贴壁细胞,胰蛋白酶消化时间过长或机械刮擦细胞会暂时破坏质膜,使Annexin V能够与细胞膜胞内面上的磷脂酰丝氨酸结合,导致假阳性染色。建议在胰蛋白酶消化或机械刮擦细胞后,让细胞在最佳细胞培养条件和培养基中培养约30分钟,以恢复其膜完整性。

实验结果使用什么仪器观察?
实验结果可以通过流式细胞仪和荧光显微镜进行观察,但更推荐使用流式细胞仪。因为正常的细胞和凋亡的细胞膜上都有磷脂酰丝氨酸(PS),只是凋亡细胞膜外更多,可以结合更多的Annexin V,流式细胞仪更灵敏,可以区分出微小差异,将正常细胞与凋亡细胞分成不同的两群,但如果用荧光显微镜,可能观察不到这一差别,尤其是贴壁细胞。若要在成像测定中检测细胞凋亡,推荐使用SuperView™ 488 Caspase-3 Assay Kit for Live Cells。

流式细胞仪检测细胞凋亡,结果图中的各个象限代表什么状态的细胞?
左上角:Annexin V-/PI+,机械损伤细胞;右上角: AnnexinV+/PI+,晚期凋亡细胞或坏死;右下角:AnnexinV+/PI-,早期凋亡细胞;左下角:AnnexinV-/PI-,正常细胞。

这款试剂盒可同时检测出凋亡率和细胞周期分布吗?
不可以。检测细胞凋亡时PI结合的是核酸,包括DNA和RNA。而PI用于检测细胞周期时需要只结合DNA,由于RNA的干扰,用细胞凋亡检测试剂盒测出来的细胞周期不准。同时,凋亡检测与周期检测时PI的工作浓度以及样本处理都不一样。 如果需要进行细胞周期检测,推荐Cell Cycle and Apoptosis Kit(C6031)

各象限代表的细胞状态问题?
Q1:(AnnexinV-染料)-/PI+,此区域的细胞为坏死细胞。也可能有少数的晚期凋亡细胞在其中,甚至机械损伤的细胞也包含其中。Annexin V-/PI+越多,实验结果越不可信,建议实验中尽量控制这一象限细胞比例。
Q2: (AnnexinV+染料)+/PI+,此区域的细胞为晚期凋亡细胞或坏死。
Q3:(AnnexinV-染料)+/PI-,此区域的细胞为早期凋亡细胞。
Q4:(AnnexinV-染料)-/PI-,此区域的细胞为活细胞。

FITC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号:               F6012S/F6012M/F6012L  规格:               10T/50T/100T


假阳性问题?

1. 消化液中含有EDTA或消化时间过长引起的假阳性。Annexin V和PS的结合需要Ca2+,而EDTA是Ca2+螯合剂,使用含有EDTA的胰酶会造成假阴性。其次消化时间不宜过长,吹打细胞要轻柔,因为胰酶的过度消化和机械损伤都会引起细胞膜的损伤,造成假阳性。细胞消化下来后,建议在培养箱中在孵育30min,使细胞膜恢复完整性,避免假阳性,或者将细胞报讯在含2% BSA的PBS中,防止进一步的损伤。
2. 如果样品来源于血液,必须去除血液中的血小板,因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,干扰实验结果。建议:可以含有EDTA的缓冲液200g离心去除血小板, 最后细胞多洗几遍,减小EDTA螯合钙离子产生的影响。
3. 神经细胞膜容易破坏外翻,导致假阳性,所以Annexin V/PI 双染法流式检测细胞凋亡不适用于神经细胞。
4. 诱导时间过长。一般情况下诱导几个小时就可以出现早期凋亡,因此通常不需要处理大于48小时以上,诱导时间过长会使营养物质耗尽,导致细胞状态差,假阳性结果偏高。

荧光染料选择的问题?
1. 实验样本是否带荧光,因为感染病毒或质粒转染的细胞往往带GFP荧光,GFP与YF488/FITC通道重叠,不能选择YF488/FITC标记的Annexin V,此时如果只有488 nm一根激光管可以用PE标记Annexin V,用7-AAD代替PI,若有633 nm激光管,可以改用YF647 Annexin V代替YF488。
2. 如果流式细胞仪带有488 nm和633 nm两个或以上激光管,首先考虑用APC或YF647标记 Annexin V,因为它和PI通道几乎不用考虑光重叠问题,可以减少调节补偿的烦恼,如果只有488 nm激光管则可选择YF488/FITC标记的Annexin V。
3. 处理因素是否带有荧光,本实验室就碰到过一个促凋亡药物Doxorubicin本身发红色荧光,对PI通道的检测造成严重干扰,而且浓度越大干扰越明显。这时建议选用A6079或Y6102 。

圈门问题?
1.要特别注意在FSC/SSC圈门时,所选细胞范围会对结果造成较大影响,所以在分析数据时,要把所有细胞都圈进FSC/SSC的门内,这样实验结果才会更可信。如图,使细胞群大概位于对角线上,并且细胞群较集中,群内细胞比例要在80%以上,如果细胞全部圈入,细胞比例才50%或者更低,说明细胞被压在了坐标轴上,这时要重新调节FSC和SSC。
2.贴壁细胞做Annexin V凋亡检测,通常分群不太规则,这时我们可以根据不加药细胞来画不规则的十字门。如上面图形的设门方式:
FITC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号:               F6012S/F6012M/F6012L  规格:               10T/50T/100TFITC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号:               F6012S/F6012M/F6012L  规格:               10T/50T/100T

免疫染色与凋亡染色顺序问题?
Annexin V凋亡染色可以和抗体一起对细胞进行染色吗?
可以,但建议Annexin V和其它抗体分开染色。例如Annexin V、PI和CD3、CD8同时标记淋巴细胞,可以先在PBS中标记CD3/CD8后洗去,再在Binding buffer(含钙离子)中标记Annexin V。

这款试剂盒可同时检测出凋亡率和细胞周期分布吗?
不可以。检测细胞凋亡时PI结合的是核酸,包括DNA和RNA。而PI用于检测细胞周期时需要只结合DNA,由于RNA的干扰,用细胞凋亡检测试剂盒测出来的细胞周期不准。同时,凋亡检测与周期检测时PI的工作浓度以及样本处理都不一样。 若果需要进行细胞周期检测,推荐Cell Cycle and Apoptosis Kit(C6031)

固定、冷冻、切片或解离的组织,还可以做流式细胞分析吗?
不建议做流式细胞分析。因为流式细胞分析要求细胞分散、单个,活性好,这些状态下的样本外膜上的PS及膜的完整性都受到了影响,因此无法依赖膜的完整性区分健康细胞和凋亡细胞。组织在冻存、复温的过程中会有大量的细胞死亡,同时经过这一过程的组织在分离成单个细胞的时候会形成许多细胞碎片,不宜上流式检测,所以用于流式检测的标本最好是新鲜标本,即取材后立即检测,效果最好。 液氮保存的组织块,可以将组织标本进行切片,然后做原位染色,观察组织细胞的凋亡。

Annexin V可以用在植物和细菌中吗?
Annexin V也可以用在植物和细菌中检测凋亡,具体实验步骤可参考相关文献。
使用本产品的文献:

1.MTP18 overexpression contributes to tumor growth and metastasis and associates with poor survival in hepatocellular carcinoma
Zhang, Yu Li, Hui Chang, Hulin Du, LixUE  Hai, Jun Geng, Xilin Yan, Xiang
cell death and disease(2018) 
应用方向:流式细胞仪检测:SMMC7721和 HLF 细胞的凋亡

2.
MS-275对食管鳞癌KYSE-70细胞存活、凋亡、细胞周期以及迁移的影响
刘腾飞,周建康,黄团结,王亚苹,周馨魁,张 乐,张璐玉,陈一豪,刘红涛,关方霞,马珊珊
郑州大学学报(医学版)(2018) 5 547-552
应用方向:流式细胞仪检测:食管鳞癌KYSE-70细胞的凋亡

3.
Histone deacetylases inhibitor MS‐275 suppresses human esophageal squamous cell carcinoma cell growth and progression via the PI3K/Akt/mTOR pathway
Shanshan Ma  Tengfei Liu  Ling Xu  Yaping Wang  Jiankang Zhou  Tuanjie Huang  Peng Li  Hongtao Liu Yanting Zhang  Xinkui Zhou  Yuanbo Cui  Xingxing Zang  Yuming Wang  Fangxia Guan
Journal of Cellular Physiology (23 May 2019)
应用方向:细胞凋亡检测:食管鳞状癌细胞(ESCC)

4.
SDHC-related deficiency of SDH complex activity promotes growth and metastasis of hepatocellular carcinoma via ROS/NFκB signaling
JibinLi,NingLiang,XiaoyuLong,JingZhao,JinYang,XiaohongDu,TaoYang,PengYuan,XiaojunHuang,JianshengZhang,XianliHe,JinliangXing
Cancer Letters Volume 461, 1 October 2019, Pages 44-55
应用方向:细胞凋亡检测::肝细胞癌(HCC)

5.
MTFP1 overexpression promotes the growth of oral squamous cell carcinoma by inducing ROS production
Tingying Xiao,Jian Sun,Zhankui Xing,Fuqiang Xie,Lan Yang,Wenjuan Ding
CELL BIOLOGY INTERNATIONAL
应用方向:细胞凋亡检测:口腔鳞状细胞(OSCC)

6.ALG-2 couples T cell activation and apoptosis by regulating proteasome activity and inflUEncing MCL1 stability
Tian-Sheng He, Wangsheng Ji, Junqi Zhang, Jing Lu,Xinqi Liu 
Cell Death & Disease(11, Article number: 5 (2020))

7.Over‐expression of TFB2M facilitates cell growth and metastasis via activating ROS‐Akt‐NF‐κB signaling in hepatocellular carcinoma
Xilin Geng,Zhimin Gen,Hui Li,Yu Zhang,Jibin Li,Hulin Chang
liver international

8.CRIF1 overexpression facilitates tumor growth and metastasis through inducing ROS/NFκB pathway in hepatocellular carcinoma
Hulin Chang,Juntang Li,Kai Qu,Yong Wan,Sinan Liu,Wei Zheng,Zhiyong Zhang,Chang Liu
 Cell Death & Disease volume 11, Article number: 332 (2020) 

9.Caffeine Targets G6PDH to Disrupt Redox Homeostasis and Inhibit Renal Cell Carcinoma Proliferation
Huanhuan Xu,Lihong Hu, Titi Liu1, Fei Chen, Jin Li, Jing Xu, Li Jiang, Zemin Xiang, Xuanjun Wang,Jun Sheng
Frontiers in Cell and Developmental Biology

10.A Network Pharmacology Approach to Investigate the Anticancer Mechanism and Potential Active Ingredients of Rheum palmatum L. Against Lung Cancer via Induction of Apoptosis
Qing Zhang, Jia Liu, Ruolan Li, Rong Zhao, Mengmeng Zhang, Shujun Wei, Dong Ran, Wei Jin, Chunjie Wu
Frontiers in Pharmacology

11.MIEF2 over-expression promotes tumor growth and metastasis through reprogramming of glucose metabolism in ovarian cancer
Shuhua Zhao, Xiaohong Zhang, Yuan Shi, Lu Cheng, Tingting Song, Bing Wu, Jia Li & Hong Yang
Journal of Experimental & Clinical Cancer Research

12.Repurposing Erythrocytes as a “Photoactivatable Bomb”: A General Strategy for Site-Specific Drug Release in Blood Vessels
Ya-Xuan Zhu,Hao-Ran Jia,Yuxin Guo,Xiaoyang Liu,Ningxuan Zhou,Peidang Liu,Fu-Gen Wu
Small

13.Multienzyme-like Reactivity Cooperatively Impairs Glutathione Peroxidase 4 and Ferroptosis Suppressor Protein 1 Pathways in Triple-Negative Breast Cancer for Sensitized Ferroptosis Therapy
Ke Li, Chuanchuan Lin, Menghuan Li, Kun Xu, Ye He, Yulan Mao, Lu Lu, Wenbo Geng, Xuemin Li, Zhong Luo, Kaiyong Cai
ACS Nano

14.A multiple functional supramolecular system for synergetic treatments of hepatocellular carcinoma
LijingSun, LiyuanChen, KeYang, Wei FengDai, YeYang, XiumingCui, BoYang, ChengxiaoWang
International Journalof Pharmaceutics

APC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号: A6030S/A6030M/A6030L 规格: 10T/50T/100T

APC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒

产品货号: A6030S/A6030M/A6030L

产品规格: 10T/50T/100T

目录价(元):264/995/1474

推荐仪器:流式细胞仪(主推)、荧光显微镜

大包装询价


产品概述:

储存条件
4℃ 避光冷藏,请勿冻存。有效期见外包装。

组分  

规格

 A6030S10T

 A6030M50T

 A6030L100T

A. 1×Annexin V 结合缓冲液

10 mL

50 mL

50 mL×2

B. Annexin V-APC

50 μL

250 μL

500 μL

C. PI

100 μL

500 μL

1 mL

储存条件
4℃ 避光冷藏,请勿冻存。有效期见外包装。

光谱特性
Annexin V-APC: Ex/Em = 650/660 nm
PI: Ex/Em=535 nm/617 nm (with DNA)

产品介绍
Annexin V(膜联蛋白-V)是一种分子量为35-36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,可于磷脂酰丝氨酸(PS)选择性结合。磷脂酰丝氨酸(PS)主要分布在细胞膜内侧,即与细胞浆相邻的一侧。在细胞发生凋亡的早期,不同类型的细胞都会把磷脂酰丝氨酸外翻到细胞表面,暴露在细胞外环境中。此时,使用远红外荧光蛋白APC标记的Annexin V,即Annexin V-APC,与外翻的磷脂酰丝氨酸(PS)结合,就可用流式细胞仪或荧光显微镜直接检测到磷脂酰丝氨酸的外翻这一细胞凋亡的重要特征。对于坏死或晚期凋亡的细胞,由于细胞完整性已经被破坏,Annexin V-APC则可以进入胞浆与处于磷脂层内侧的 PS 结合,从而也使坏死细胞呈现远红外荧光。
碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种 DNA 结合染料,它可以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞的细胞核。PI可以由488,532或546 nm的激光激发,呈现红色荧光。


注意事项
1. 使用前请将产品瞬时离心至管底,再进行后续实验。
2. 为降低细胞凋亡进程,孵育过程可在冰上操作,但孵育时间至少延长至30 min。
3. 由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后 1 h之内进行分析。
4. 对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,PI 摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与 Annexin V-APC的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后,轻摇时胰酶与细胞充分接触,然后倒掉大部分胰酶,利用剩余的少量胰酶再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用 EDTA,EDTA 会影响 Annexin V 与 PS 的结合。
5. 贴壁细胞用胰蛋白酶消化后,建议在最佳培养条件和培养基中恢复约30 min后染色,避免假阳性。
6. 为了避免洗涤细胞时损失细胞,在吸液时可以用大的 Tip 头套上小的 Tip 头吸液。
7. 染料的最佳使用浓度由具体实验要求确定。
8. 荧光染料均存在淬灭问题,保存和使用过程中请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
9. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


说明书:

APC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号:               A6030S/A6030M/A6030L  规格:               10T/50T/100T UE-A6030S/A6030M/A6030L    
MSDS:

MSDS A6030 Annexin V-APC&PI
常见问题解答:

为何染色结果显示细胞凋亡率过高?

1. 凋亡时间处理过长,使细胞全部死亡。建议重新摸索细胞凋亡条件,使细胞处于不同的凋亡状态。
2. 对于贴壁细胞,胰蛋白酶消化时间过长或机械刮擦细胞会暂时破坏质膜,使Annexin V能够与细胞膜胞内面上的磷脂酰丝氨酸结合,导致假阳性染色。建议在胰蛋白酶消化或机械刮擦细胞后,让细胞在最佳细胞培养条件和培养基中培养约30分钟,以恢复其膜完整性。

实验结果使用什么仪器观察?
实验结果可以通过流式细胞仪和荧光显微镜进行观察,但更推荐使用流式细胞仪。因为正常的细胞和凋亡的细胞膜上都有磷脂酰丝氨酸(PS),只是凋亡细胞膜外更多,可以结合更多的Annexin V,流式细胞仪更灵敏,可以区分出微小差异,将正常细胞与凋亡细胞分成不同的两群,但如果用荧光显微镜,可能观察不到这一差别,尤其是贴壁细胞。若要在成像测定中检测细胞凋亡,推荐使用SuperView™ 488 Caspase-3 Assay Kit for Live Cells。

流式细胞仪检测细胞凋亡,结果图中的各个象限代表什么状态的细胞?
左上角:Annexin V-/PI+,机械损伤细胞;右上角: AnnexinV+/PI+,晚期凋亡细胞或坏死;右下角:AnnexinV+/PI-,早期凋亡细胞;左下角:AnnexinV-/PI-,正常细胞。

这款试剂盒可同时检测出凋亡率和细胞周期分布吗?
不可以。检测细胞凋亡时PI结合的是核酸,包括DNA和RNA。而PI用于检测细胞周期时需要只结合DNA,由于RNA的干扰,用细胞凋亡检测试剂盒测出来的细胞周期不准。同时,凋亡检测与周期检测时PI的工作浓度以及样本处理都不一样。 如果需要进行细胞周期检测,推荐Cell Cycle and Apoptosis Kit(C6031)

各象限代表的细胞状态问题?
Q1:(AnnexinV-染料)-/PI+,此区域的细胞为坏死细胞。也可能有少数的晚期凋亡细胞在其中,甚至机械损伤的细胞也包含其中。Annexin V-/PI+越多,实验结果越不可信,建议实验中尽量控制这一象限细胞比例。
Q2: (AnnexinV+染料)+/PI+,此区域的细胞为晚期凋亡细胞或坏死。
Q3:(AnnexinV-染料)+/PI-,此区域的细胞为早期凋亡细胞。
Q4:(AnnexinV-染料)-/PI-,此区域的细胞为活细胞。

APC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号:               A6030S/A6030M/A6030L  规格:               10T/50T/100T


假阳性问题?

1. 消化液中含有EDTA或消化时间过长引起的假阳性。Annexin V和PS的结合需要Ca2+,而EDTA是Ca2+螯合剂,使用含有EDTA的胰酶会造成假阴性。其次消化时间不宜过长,吹打细胞要轻柔,因为胰酶的过度消化和机械损伤都会引起细胞膜的损伤,造成假阳性。细胞消化下来后,建议在培养箱中在孵育30min,使细胞膜恢复完整性,避免假阳性,或者将细胞报讯在含2% BSA的PBS中,防止进一步的损伤。
2. 如果样品来源于血液,必须去除血液中的血小板,因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,干扰实验结果。建议:可以含有EDTA的缓冲液200g离心去除血小板, 最后细胞多洗几遍,减小EDTA螯合钙离子产生的影响。
3. 神经细胞膜容易破坏外翻,导致假阳性,所以Annexin V/PI 双染法流式检测细胞凋亡不适用于神经细胞。
4. 诱导时间过长。一般情况下诱导几个小时就可以出现早期凋亡,因此通常不需要处理大于48小时以上,诱导时间过长会使营养物质耗尽,导致细胞状态差,假阳性结果偏高。

荧光染料选择的问题?
1. 实验样本是否带荧光,因为感染病毒或质粒转染的细胞往往带GFP荧光,GFP与YF488/FITC通道重叠,不能选择YF488/FITC标记的Annexin V,此时如果只有488 nm一根激光管可以用PE标记Annexin V,用7-AAD代替PI,若有633 nm激光管,可以改用YF647 Annexin V代替YF488。
2. 如果流式细胞仪带有488 nm和633 nm两个或以上激光管,首先考虑用APC或YF647标记 Annexin V,因为它和PI通道几乎不用考虑光重叠问题,可以减少调节补偿的烦恼,如果只有488 nm激光管则可选择YF488/FITC标记的Annexin V。
3. 处理因素是否带有荧光,本实验室就碰到过一个促凋亡药物Doxorubicin本身发红色荧光,对PI通道的检测造成严重干扰,而且浓度越大干扰越明显。这时建议选用A6079或Y6102 。

圈门问题?
1.要特别注意在FSC/SSC圈门时,所选细胞范围会对结果造成较大影响,所以在分析数据时,要把所有细胞都圈进FSC/SSC的门内,这样实验结果才会更可信。如图,使细胞群大概位于对角线上,并且细胞群较集中,群内细胞比例要在80%以上,如果细胞全部圈入,细胞比例才50%或者更低,说明细胞被压在了坐标轴上,这时要重新调节FSC和SSC。
2.贴壁细胞做Annexin V凋亡检测,通常分群不太规则,这时我们可以根据不加药细胞来画不规则的十字门。如上面图形的设门方式:
APC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号:               A6030S/A6030M/A6030L  规格:               10T/50T/100TAPC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号:               A6030S/A6030M/A6030L  规格:               10T/50T/100T


免疫染色与凋亡染色顺序问题?

Annexin V凋亡染色可以和抗体一起对细胞进行染色吗?
可以,但建议Annexin V和其它抗体分开染色。例如Annexin V、PI和CD3、CD8同时标记淋巴细胞,可以先在PBS中标记CD3/CD8后洗去,再在Binding buffer(含钙离子)中标记Annexin V。

这款试剂盒可同时检测出凋亡率和细胞周期分布吗?
不可以。检测细胞凋亡时PI结合的是核酸,包括DNA和RNA。而PI用于检测细胞周期时需要只结合DNA,由于RNA的干扰,用细胞凋亡检测试剂盒测出来的细胞周期不准。同时,凋亡检测与周期检测时PI的工作浓度以及样本处理都不一样。 若果需要进行细胞周期检测,推荐Cell Cycle and Apoptosis Kit(C6031)

固定、冷冻、切片或解离的组织,还可以做流式细胞分析吗?
不建议做流式细胞分析。因为流式细胞分析要求细胞分散、单个,活性好,这些状态下的样本外膜上的PS及膜的完整性都受到了影响,因此无法依赖膜的完整性区分健康细胞和凋亡细胞。组织在冻存、复温的过程中会有大量的细胞死亡,同时经过这一过程的组织在分离成单个细胞的时候会形成许多细胞碎片,不宜上流式检测,所以用于流式检测的标本最好是新鲜标本,即取材后立即检测,效果最好。 液氮保存的组织块,可以将组织标本进行切片,然后做原位染色,观察组织细胞的凋亡。

Annexin V可以用在植物和细菌中吗?
Annexin V也可以用在植物和细菌中检测凋亡,具体实验步骤可参考相关文献。
使用本产品的文献:

参考文献
1.Terminating the criminal collaboration in pancreatic cancer: Nanoparticle-based synergistic therapy for overcoming fibroblast-induced drug resistance.
应用方向:检测胰腺导管腺癌(PDAC)细胞的凋亡

2.Ribosomal protein L23 negatively regulates cellular apoptosis via the RPL23/Miz-1/c-Myc circuit in higher-risk myelodysplastic syndrome.
应用方向:检测高危骨髓增生异常综合征(MDS)患者CD34+细胞的凋亡

3.Chlamydia trachomatis plasmid-encoded protein Pgp3 inhibits apoptosis via the PI3K-AKT-mediated MDM2-p53 axis.
应用方向:检测Hela细胞的凋亡

Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡检测试剂盒(增强型)

Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡检测试剂盒(增强型)

货号:BL107A

规格:50 T

品牌:Biosharp

Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit

Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒(增强型) 

产品简介:

在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V 是一种分子量为 35~36kD  Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此 Annexin V 被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将 Annexin V 进行荧光素 FITC 标记,以标记了的 Annexin V 作为荧 光探针,利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。

碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但对凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将 Annexin V PI 匹配使用,就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。

本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测(不推荐用于检测组织样本)。

产品组分:

产品编号

产品名称

规格

储存条件

1

AnnexinV-FITC

250uL

2-8,避光

2

Propidium   Iodide

250uL

2-8,避光

3

Binding   Buffer

25 mL

2-8

 

使用方法:

1、悬浮细胞离心(2000rpm 离心 5min)收集;贴壁细胞用不含 EDTA 的胰酶消化收集(注:胰酶消化时间不 易过长,否则容易引起假阳性);

2、用 PBS 洗涤细胞二次(2000rpm 离心5min)收集 1~5×105 细胞;

3、加入500uL  Binding Buffer 悬浮细胞;

4、加入5uL Annexin V-FITC 混匀后,加入 5 uL Propidium Iodide,混匀;

5、室温、避光、反应515min

6、请在1h 内,进行下述荧光显微镜或流式细胞仪的观察和检测。

A.荧光显微镜观察

1)     滴一滴上述染色后的细胞悬液于载玻片上,并用盖玻片盖上细胞;

2)     对于贴壁细胞来说,也可直接用盖玻片来培养细胞并诱导细胞凋亡;

1、将细胞于盖玻片上生长,用适当的凋亡诱导剂诱导细胞凋亡,并设立阴性对照组;

2、用PBS洗涤细胞两次;

3、在500uLBinding Buffer 中加入 5uL Annexin V-FITC5 uL Propidium Iodide,混匀;

4、将上述溶液滴加于盖玻片表面,使盖玻片表面均匀覆盖;

5、避光、室温反应5 min

6、将盖玻片倒置于载玻片上,于荧光显微镜下、双色滤光片(FITC和罗丹明)观察。Annexin V-FITC  光信号呈绿色,PI 荧光信号呈红色。

B.    流式细胞仪分析

1) 用流式细胞仪检测,激发波长 Ex=488 nm;  发射波长 Em=530 nm

2) Annexin V-FITC 的绿色荧光通过 FITC 通道(FL1)检测;PI 红色荧光(流式 Ex=488nm,Em630nm)通  FL2  FL3 通道检测,建议使用 FL3

3) 荧光补偿调节:使用经凋亡诱导处理的正常细胞,作为对照进行荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。

注意事项:

1、微量试剂取用前请离心收集。

2Annexin V-FITC

货号 BL107A
规格 50 T
品牌 Biosharp
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