炎症小体的细胞实验

InvivoGen提供了用于炎症小体研究的细胞实验工具，并不断扩充这一连串的产品系列。人源单核细胞系THP-1由于表达高水平的NLRP3、ASC和pro-caspase-1而被广泛用于炎症小体的研究。为了帮助您评估特定炎症小体在经典和非经典炎症反应中的作用，我们设计了THP1或RAW264.7衍生细胞，它们敲除（KO）或敲低了（def）NLRP3、ASC、 CASP-1、CASP-4、CASP-11、NLRC4和GSDMD的基因表达。此外，这些细胞可作为对照，应用于筛选新疗法上。这些细胞系的功能验证均使用了HEK-BlueTM IL-1β细胞来检测生物活性 IL-1β 的释放（可咨询上海金畔生物索要相关资料）。

监测NLRP3依赖性应答

THP1-KO-NLRP3 Cells

THP1-KO-NLRP3细胞敲除了NLRP3基因的N端区域，此基因敲除通过了DNA测序、PCR和Western blot验证。这些细胞表达一个非活性NLRP3的C末端片段，因此，它们与尼日利亚霉素或氢氧化铝孵育后，会使IL-1β的分泌和细胞焦亡的发生被阻断。值得注意的是，在Poly(dA:dT)或大肠杆菌外膜囊泡（OMVs）的刺激下，IL-1β的分泌在cGAS-STING-NLRP3或CASP-4/5炎症小体激活时受到严重损害。因此，THP1-KO-NLRP3细胞可以用来区分NLRP3和其他炎症小体传感器的激活。

NLRP3：一个具吸引力的药物靶点

NLRP3的活化可由多种刺激物介导，然而这种拮抗感染的进化优势也可以是一种负担。事实上，NLRP3与多种疾病有关，如2型糖尿病、非酒精性脂肪性肝炎（NASH）、痛风性关节炎、阿尔茨海默病和癌症，因此NLRP3成为了具吸引力的药物研发靶点 [34, 35] 。

监测NLRC4依赖性应答

THP1-KO-NLRC4 Cells& RAW-ASC KO-NLRC4 Cells

THP1-KO-NLRC4 细胞敲除NLRC4的核苷酸结合域（NDB），使得NLRC4蛋白无法为炎症小体的组装而聚合（见第9页）。RAW-ASC KO-NLRC4细胞稳定表达鼠源ASC基因（一般在

RAW264.7细胞中缺失[36]），并经DNA测序、PCR和Western blot证实敲除了双等位基因NLRC4。THP1-KO-NLRC4和RAWASC-KO-NLRC4细胞在分别与Needle-Tox和Rod-Tox孵育时，显示了受损的IL-1β分泌和细胞焦亡。重要的是，两种KO细胞系对其他炎症诱导剂（如Poly(dA:dT)）的应答仅受到轻微影响。

监测ASC依赖性应答

THP1-KO-ASC Cells

THP1-KO-ASC细胞经DNA测序、PCR和Western blot证实，具有ASC基因的双等位基因KO。这些细胞可以用来确定炎症小体是否需要ASC来激活。值得注意的是，它们对NLRP3或CASP-4诱导剂的应答严重受损。

监测CASP-1依赖性应答

THP1-defCASP1 Cells

THP1-defCASP1细胞比其THP1-Null母细胞系表达约少7倍的caspase-1，强烈欠缺capase-1活性。这细胞系有助于筛选新型炎症小体诱导剂。

研究特定炎症小体的工具

单核细胞和巨噬细胞是处于免疫防御前线的天然细胞，因此是研究炎症小体信号最广泛使用的细胞类型。

骨髓源性巨噬细胞（BMDMs）是经过体外分化的原代细胞。

THP-1 细胞系是一种表达高水平NLRP3、ASC和pro-caspase-1的人源单核细胞系 [37] 。

敲除（KO）和敲低（KD）用于研究特定的基因功能，以及它们是否能被另一个基因所补偿。

化学抑制剂可以辅助KO/KD细胞系工具。这些小分子虽然具阻断蛋白的功能，但仍可以允许蛋白组装成大分子复合物。

监测CASP-4依赖性应答

THP1-KO-CASP4 Cells

THP1-KO-CASP4细胞经DNA测序、PCR和Western blot验证，具有CASP4基因的双等位基因KO。这些细胞与预期中一样，对NLRP3诱导剂（如尼日利亚霉素）的应答不受影响，而对CASP-4诱导剂（如转染的LPS）的应答则受到阻碍。尽管CASP4基因已完全敲除，但可能由于被CASP-5部分激活，这些细胞在转染LPS后仍分泌可检测水平的IL-1β。

InvivoGen还提供从RAW-ASC细胞系产生的 RAW-ASC KO-CASP11细胞。这些细胞具有CASP-11基因的双等位基因KO，它们对非经典炎症小体诱导物（如转染的LPS或大肠杆菌OMVs）的应答受损。

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