荧光示踪分子 — 为细菌、碳水化合物和蛋白质聚集体的荧光成像提供解决方案

光示踪是一种用于荧光显微镜和光谱学分析的创新型可视化方法。研究人员将光示踪定义为结构响应型荧光分子，这些分子在结合并标记样品中的物质时，会产生明亮的荧光，并根据其结合物质的结构表现出独特的光谱特征。荧光与特异性靶向信号的结合，可用于识别各种材料中的生物分子。多年来，光示踪已为纳米科学和有机化学的研究提供了许多可靠的数据成果。

Ebba Biotech成立于2016年，由Agneta Richter-Dahlfors教授创立，已为世界各地的研究实验室、医院和工业客户提供了多种不同类型的专用荧光示踪(光示踪剂)分子。Ebba Biotech的动态荧光示踪分子适用于活体和固定样品的光谱成像。具有快速、简单、稳定、无毒和结果准确的特点。

Ebba Biotech可提供三种不同系列的荧光示踪分子：

 l  Amytracker——检测淀粉样蛋白和其他蛋白质聚集体。

l  Carbotrace——对碳水化合物进行分析，以了解他们的组成。

l  EbbaBiolight——检测细菌和细菌生物膜。

                                           ——用于淀粉样蛋白和其他蛋白质聚集体的荧光示踪剂

Amytracker是一种能使蛋白质聚集体高质量可视化的荧光示踪剂。当Amytracker分子与样本中的淀粉样蛋白或蛋白质聚集体结合时，就会变得色彩鲜艳，荧光强度高。利用Amytracker，早期就可实现荧光染色，可以在组织和活细胞中检测到多肽或来自多种淀粉样蛋白的淀粉样纤维前体。从而帮助科研人员更深入的研究包括阿尔茨海默病在内的许多神经退行性疾病。

优势

•与至少有8个重复β折叠的淀粉样纤维结合，使淀粉样蛋白的形成也能在非硫黄酮类物种中进行研究。

•无非特异性的背景荧光（或非常低）

•适用于组织切片、活细胞成像和原纤维形成的检测

•容易进入细胞和组织

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                                                                                                                                        ——用于碳水化合物分析的荧光示踪剂

Carbotrace是一种用于检测碳水化合物结构的荧光示踪分子，为植物中碳水化合物结构的解剖定位、生物基材料和生物燃料中多糖的非还原性成分的分析提供了方法，同时，Carbotrace也可区分碳水化合物中不同类型的糖苷键。

实验应用

光谱成像：光示踪可以直接识别天然组织中的碳水化合物。如图所示，使用Carbotrace 680示踪剂，在土豆样本中出现两种不同的颜色，对纤维素和淀粉两种结构进行了识别。

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                                              ——用于细菌及细菌生物膜成分检测的荧光示踪剂

EbbaBiolight分子可在不使用抗体和有毒化学物质的前提下，直接观察细菌或细菌生物膜。当其与目标结合时，分子变得高度荧光。EbbaBiolight不仅无毒，在推荐浓度下，还不会对细菌生长或生物膜形成造成干扰，因此可以添加到培养物中，实时跟踪细菌生长或生物膜形成。此外，EbbaBiolight还有耐光和耐热的优点，可以使用在任何实验应用中。

Ebba Biotech提供以下五种不同的EbbaBiolight荧光示踪剂，这些示踪剂可用于筛选不同的细种和菌株。

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如何避免活细胞成像中的光漂白

●如何避免活细胞成像中的光漂白

光漂白，即光照条件下导致的荧光基团降解，其在活细胞成像中是一个非常严重的问题。在活细胞成像中使用高强度激发光可降低荧光基团发射荧光强度，甚至使其完全发射不出荧光。不过，这个问题是可以解决的。目前，在不影响细胞活性的前提下，科学家发现了几种可以保护荧光蛋白和荧光染料所发的荧光不发生衰减并能保持荧光信号强度的方法。

●怎样减少荧光漂白现象呢？

在进行活细胞成像时，可以采取以下几种方式减少光漂白现象的发生。GE医疗集团，细胞分析-基因组学研究领域产品支持和应用领导者Leanna Ferrand给出了如下几个建议：

1、使用与荧光显微镜的激发波长和发射波长相匹配的荧光染料和荧光蛋白进行细胞成像；

2、尽可能降低激发光的强度，减少曝光时间；

3、避免长时间将样品暴露在“无用”的光照条件下，例如在没有收集数据时在镜下长时间观察等；

4、当设计实验时，要仔细考虑所有的实验参数，收集足够多的信息来回答研究的问题即可，不要浪费时间在其他因素上。你考虑的参数包括整个实验的进行时间、实验进行期间的拍照频率、每次拍照使用的荧光通道数量、Z堆栈高度等；

注意，如果研究者拍照时间越长，那么考虑上述四个参数应该越严格，这样才能确保在实验中观察到正确的细胞活动，而不是荧光漂白或者光毒性现象。

●Oxyrase公司的销售市场经理Lisa Stewart同时也建议：

1、当进行观察时，使用中性密度滤光片来减少过多的曝光；

2、尽量选择对光不敏感的染料进行染色。

●使用减少光漂白的试剂

目前，市场上有一些公司可以提供专门用于活细胞成像实验中增强活细胞成像研究的试剂，比如Vector Laboratories公司的VectaCellTM Trolox 抗荧光淬灭剂。Vector Laboratories市场总监Melissa Rebar博士指出，抗荧光淬灭剂通常用于固定样品的成像。由于普通的抗荧光淬灭剂与活细胞不相容性，其不能用于活细胞的成像实验。

Vector Laboratories公司的VectaCell^TM Trolox 抗荧光淬灭剂是专门用于活细胞成像实验使用的抗荧光淬灭剂，该试剂能保持荧光信号强度和时间。并可以保持荧光蛋白或细胞染料在活细胞成像中对光漂白现象的敏感性。

VectaCell^TM Trolox抗淬灭试剂是一种稳定的水溶性的维他命E的形式，该试剂抗光漂白和抗频闪的性能是由于Trolox和其氧化形式Trolox-醌的联合作用。这种氧化还原体系能高效对抗不同的活性氧，比如单质氧，超氧化物阴离子或者过氧化氢。Rebar博士指出，Trolox这种物质对多种细胞均具有保护作用，并呈现低毒性。

因为VectaCell^TM Trolox抗淬灭剂是一种抗氧化剂，这种试剂的最佳工作浓度依赖于细胞类型以及细胞对低氧环境的耐受度。研究者在使用时需要对实验条件进行一些优化。

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