免疫组织化学选择指南
一、选择合适的一抗
• 选择感兴趣特定抗原的抗体
• 考虑组织切片的种类和制备 (固定)
• 考虑抗原修复条件
二、选择合适的二抗和三级检测系统
• 选择HRP或AP酶检测系统
• 考虑检测灵敏度需求
• 考虑一抗种属
• 考虑组织切片种类
三、选择合适的酶底物
• 颜色
• 与其他检测系统试剂兼容性（用于多重染
色的复染试剂、封片剂和其他底物试剂等）
四、选择核复染染料
• 蓝色、绿色或红色
• 与底物、封片剂的兼容性
五、选择封片剂
• 水溶性 vs 非水溶性
• 与底物和复染试剂的兼容性
六、观察
• 使用显微镜明场视野进行观察
更多详细信息，请咨询Vectorlabs代理商-上海金畔生物
Human P-selectin (P选择素) ELISA KIT
货号：BSEH-106-96T
规格：96T
品牌：Biosharp
ELISA KIT又称为ELISA试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒,是一种灵敏度高,特异性强,重复性好的实验方法,且因其试剂稳定、易保存,操作简便、结果判断客观等已广泛应用在免疫学检验的各领域中,得到全世界科研工作者的认可和应用。
ELISA的基本原理是双抗体夹心法,将样本加入预包被了抗原或抗体的酶标板里,然后再加入酶标记的抗原或抗体,从而固相载体上的抗原或抗体与样品中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与样本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。
Biosharp ELISA KIT覆盖人、小鼠、大鼠、猪、通用等多种物种,产品达1000多种。每一个产品均经过严格的质检,结果稳定,重复性和线性范围好,特异性和灵敏度高,应用广泛,涉及免疫学、神经学、微生物学、细胞生物学、表观遗传学等多个科学领域。
| 货号 | BSEH-106-96T |
| 规格 | 96T |
| 品牌 | Biosharp |
| 说明书下载 | 点击下载 |
怎么选择合适的荧光标记？
怎么选择合适的荧光标记？当选择荧光标记时，需要自问以下问题：
一、您显微镜上的滤光片/激光源是什么?
首先您需要知道您显微镜上的滤光片/激光源。他们将会决定您可以使用什么样的荧光蛋白或染料用来激发和显现。
二、您计划在一个样品上应用几个荧光素？
如果您在样品上使用一个以上的荧光素，那么您需要仔细挑选其他的荧光染料来最小化光谱重叠。您可以通过查看激发和发射光谱来决定使用哪一对染料，以降低他们的激发和发射光谱重叠。
如果您使用激光来激发荧光素，您只要确保您的激光 (ie. 488 nm) 不会同时激发两种以上的染料即可。如果该激光可触发到第二个荧光染料的激发光谱，那么在激发第一个染料时您可能会少量地激发到了第二个染料，而如果这时您 的滤光片也能接受第二个染料的发射光，您就会得到不准确的信号。
然而如果您用来接收发射光谱的滤光片刚好不能接收到第二个染料发射的光，那么您拍得的图片就看不到这段重叠光谱，就没有问题。
看完本文，如果大家还不知道怎么选择合适的荧光标记？请联系Stressmarq代理商-上海金畔生物
EpiCypher——优质核小体的选择
越来越多的证据表明，核小体是体外表征许多染色质调节因子的最佳底物。随着携带完全确定组蛋白修饰的重组核小体的出现，为下一代染色质研究提供了新的或更好的方法(如染色质结合蛋白分析、酶分析、抗体谱分析)。EpiCypher拥有令人印象深刻的产品目录，其中包括83个独特的重组核小体库存，并且有能力生产定制设计核小体，质量高、周期短，助力您的研究！
在科研实验中，如果您要使用重组核小体进行染色质实验，则需考虑以下几点：
1、用于开发修饰组蛋白的方法。确保使用无疤痕方法整合所需的PTMs是很重要的，这种方法可以重现天然组蛋白结构。EpiCypher 使用几种不同的方法获得修饰的组蛋白，所有方法都会无疤痕整合组蛋白修饰。
为什么这很重要呢？许多市售的重组核小体是使用组蛋白PTM类似物构建的，如甲基赖氨酸类似物(MLAs) 10，其会导致修饰位点的氨基酸序列发生变化。这些非天然组蛋白修饰类似物已被证明会破坏与染色质调节蛋白和组蛋白PTM特异性抗体的相互作用，并且这对研究生理机制来讲是不理想的。因此，使用这些方法合成的核小体时应格外谨慎11-13。
2、修饰组蛋白的纯度。组装完全定义的同质核小体的下一步是对修饰组蛋白进行严格的质量控制。
在质控结果中，HPLC 迹线应显示是单一洗脱物质，表明组蛋白纯度>95%；平行高分辨率质谱（HRMS）应在预期质量的1道尔顿范围内显示一个单峰，没有任何意义的额外电荷质量（m/z）信号（例如图2A）。EpiCypher的所有修饰组蛋白均通过HPLC和HRMS分析进行验证。
为什么这很重要呢？不必要的物质（如甲硫氨酸氧化）可能引起结构改变，并影响静电相互作用或疏水相互作用，从而损害下游核小体组装的效率。
3、组装核小体的质量控制(QC)指标。DNA组装后核小体的质量验证对最终产品的信任保证至关重要。
EpiCypher使用天然PAGE分析DNA上的dNuc组装，其中使用约150bp DNA的高效组装应该只产生单一物质，这相对于未组装的游离DNA，其迁移率降低(图2B，下图)。
为什么这很重要呢？因为被污染的游离DNA会诱导染色质修饰酶(如NSD2)的异常活性，所以必须避免。此外，次优组装可能导致样品的异质性混合，包括错误定位的核小体。
我们还使用考马斯染色对最终的dNucs进行SDS-PAGE分析，以确保四种组蛋白的化学计量相等（图2C，下图）。然后，我们通过免疫印迹证实了整合组蛋白PTM的存在（图2C，上图）。
为什么这很重要呢？如果其他种类的蛋白质污染或偏离1:1:1:1的比例，则可能表明组蛋白降解或组装不良，因此有必要重新解析每个组蛋白。而免疫印迹对于确定修饰是否存在于组蛋白的正确位置上非常重要。
核小体相关产品
|
分类 |
货号 |
产品名称 |
|
rNucs Human Recombinant Nucleosomes, No PTMs |
16-0006 |
Mononucleosomes, biotinylated |
|
16-0009 |
Mononucleosomes, non-biotinylated |
|
|
16-0024 |
Mononucleosomes, desthiobiotinylated |
|
|
16-0027 |
Tailless Nucleosomes, biotinylated |
|
|
16-0023 |
Mononucleosomes, H3.1 ΔN2, biotinylated |
|
|
16-0016 |
Mononucleosomes, H3.1 ΔN32, biotinylated |
|
|
16-1016 |
Mononucleosomes, H3.1 ΔN32, non-biotinylated |
|
|
16-0017 |
Mononucleosomes, H3.3 ΔN32, biotinylated |
|
|
16-1017 |
Mononucleosomes, H3.3 ΔN32, non-biotinylated |
|
|
16-0018 |
Mononucleosomes, H4 ΔN15, biotinylated |
|
|
16-3004 |
Dinucleosomes, biotinylated |
|
|
16-3104 |
Dinucleosomes, non-biotinylated |
|
|
dNucs Designer Recombinant Nucleosomes with PTMs |
16-0321 |
H3K4me1, biotinylated |
|
16-0334 |
H3K4me2, biotinylated |
|
|
16-1334 |
H3K4me2, non-biotinylated |
|
|
16-0316 |
H3K4me3, biotinylated |
|
|
16-1316 |
H3K4me3, non-biotinylated |
|
|
16-0402 |
H3K4,K9me3, biotinylated |
|
|
16-0403 |
H3K4,K27me3, biotinylated |
|
|
16-0335 |
H3K4me3,K9,14,18ac, biotinylated |
|
|
16-0325 |
H3K9me1, biotinylated |
|
|
16-0324 |
H3K9me2, biotinylated |
|
|
16-0315 |
H3K9me3, biotinylated |
|
|
16-0338 |
H3K27me1, biotinylated |
|
|
16-0339 |
H3K27me2, biotinylated |
|
|
16-0317 |
H3K27me3, biotinylated |
|
|
16-1317 |
H3K27me3, non-biotinylated |
|
|
16-0397 |
H3.1K27me3,S28phos, biotinylated |
|
|
16-0322 |
H3K36me1, biotinylated |
|
|
16-0319 |
H3K36me2, biotinylated |
|
|
16-0320 |
H3K36me3, biotinylated |
|
|
16-1320 |
H3K36me3, non-biotinylated |
|
|
16-0390 |
H3.3K36me3, biotinylated |
|
|
16-0367 |
H3K79me1, biotinylated |
|
|
16-0368 |
H3K79me2, biotinylated |
|
|
16-0369 |
H3K79me3, biotinylated |
|
|
16-0393 |
H4K12me1, biotinylated |
|
|
16-0331 |
H4K20me1, biotinylated |
|
|
16-0332 |
H4K20me2, biotinylated |
|
|
16-0333 |
H4K20me3, biotinylated |
|
|
16-1333 |
H4K20me3, non-biotinylated |
|
|
vNucs Histone Variants |
16-0013 |
H2AX, biotinylated |
|
16-1013 |
H2AX, non-biotinylated |
|
|
16-0366 |
H2AXS139phos, biotinylated |
|
|
16-0014 |
H2AZ.1, biotinylated |
|
|
16-1014 |
H2AZ.1, non-biotinylated |
|
|
16-0015 |
H2AZ.2, biotinylated |
|
|
16-0011 |
H3.3, biotinylated |
|
|
16-0012 |
H3.3, non-biotinylated |
|
|
Mutant Nucs Defined Amino Acid Substitutions |
16-0029 |
H2AE61A, biotinylated |
|
16-1029 |
H2AE61A, non-biotinylated |
|
|
16-0030 |
H2AE92K, biotinylated |
|
|
16-1030 |
H2AE92K, non-biotinylated |
|
|
16-0031 |
H2BE105A,E113A, biotinylated |
|
|
16-1031 |
H2BE105A,E113A, non-biotinylated |
|
|
16-0349 |
Oncogenic Nucs (oncoNucs) |
|
|
16-0350 |
H3.3K9M, biotinylated |
|
|
16-1323 |
H3.3K27M, biotinylated |
|
|
16-0323 |
H3.3K27M, non-biotinylated |
|
|
16-0346 |
H3.3G34R, biotinylated |
|
|
16-0347 |
H3.3G34V, biotinylated |
|
|
16-0348 |
H3.3G34W, biotinylated |
|
|
16-0344 |
H3.3K36M, biotinylated |
|
|
Methyl DNA Nucs Nucleosomes with Methylated DNA |
16-2043 |
Mononucleosomes, Recombinant, Hemi-methylated 199×601 DNA, biotinylated |
|
16-2143 |
Mononucleosomes, Recombinant, Hemi-methylated 199×601 DNA, non-biotinylated |
|
|
16-2044 |
Mononucleosomes, Recombinant, 199×601 DNA, biotinylated |
|
|
16-2144 |
Mononucleosomes, Recombinant, 199×601 DNA, non-biotinylated |
|
|
16-2045 |
Mononucleosomes, Recombinant, Symmetrically Methylated 199×601 DNA, biotinylated |
|
|
EpiDyne® Chromatin Remodeling Assay Substrates |
16-4201 |
EpiDyne FRET Nucleosome Remodeling Assay Substrate |
|
16-4101 |
EpiDyne Nucleosome Remodeling Assay Substrate ST601-GATC1 |
|
|
16-4112 |
EpiDyne Nucleosome Remodeling Assay Substrate ST601-GATC1,2, biotinylated |
|
|
16-4113 |
EpiDyne Nucleosome Remodeling Assay Substrate ST601-GATC1,2,3, biotinylated |
|
|
16-4114 |
EpiDyne Nucleosome Remodeling Assay Substrate ST601-GATC1, 50-N-66, biotinylated |
|
|
16-4115 |
EpiDyne Nucleosome Remodeling Assay Substrate ST601-GATC1,2, 50-N-66, biotinylated |
|
|
16-4116 |
EpiDyne Nucleosome Remodeling Assay Substrate ST601-GATC1,2,3, 50-N-66, biotinylated |
|
|
SNAP Spike-in Controls |
19-1002 |
SNAP-CUTANA™ K-MetStat Panel |
|
19-1001 |
SNAP-ChIP K-MetStat Panel |
|
|
19-2001 |
SNAP-ChIP OncoStat Panel |
|
|
19-3001 |
SNAP-ChIP K-AcylStat Panel |
|
|
dCypher™ Nucleosome Panels |
16-9001 |
dCypher™ Nucleosome Full Panel |
想了解更多关于EpiCypher重组核小体技术和产品的信息吗？请联系金畔！
EpiCypher的注册商标和知识产权可见链接：https://www.epicypher.com/intellectual-property/。
本文中的所有其他商标和商品均为其各自公司所有。
本文翻译自链接：https://www.epicypher.com/resources/blog/finding-the-best-substrate-for-studying-histone-modifications/，如与原文有出入的地方，请以英文原文为准。
未经EpiCypher公司事先书面同意，本文件不得部分或全部复制。
关于EpiCypher公司：
EpiCypher是一家成立于2012年的表观遗传学公司。从专有组蛋白肽阵列平台EpiGold™开始，EpiCypher开发了一系列同类产品。同时，EpiCypher是重组核小体制造和开发的全球领导者。利用其独有技术，不断增加产品库中高纯度修饰重组核小体（dNucs™）产品。dNuc™多样性的产品为破译组蛋白编码和加速药物开发提供了强大的工具。
EpiCypher还将dNuc™技术广泛的应用于多种分析测定产品中，包括：SNAP-ChIP® Spike-in Controls（用于抗体分析和ChIP定量）， EpiDyne® 底物（用于染色质重塑和抑制剂筛选及开发），dCyher™测定（用于探究表观遗传蛋白质-组蛋白PTM结合相互作用）。最近，EpiCypher还推出了针对ChIC、CUT&RUN和CUT&Tag的高灵敏度表观基因组图谱CUTANA™分析。
如需了解更多详细信息或相关产品，请联系EpiCypher中国代理商-上海金畔生物
LPS/脂多糖选择指南
|
LPS-B5 from E. coli 055:B5 cat#tlrl-b5lps(standards),tlrl-pb5lps(Ultrapure) 1.常用于LAL检测中的内毒素标准品 2.常用于体外细胞活化
|
应用实例： ●刺激小鼠巨噬细胞中产生促炎性细胞因子分泌[2] 诱导小鼠脾B细胞分泌IL-6[3] ●在大鼠骨髓源性MSCs4中诱导IL-6和生长因子的表达[4] ●诱导硬骨鱼巨噬细胞TNFα和IL-1β的表达[5] ●研究感染猪瘟病毒后，猪组织中TLR4 mRNA的表达[6] |
|
LPS-EB from E. coli 0111:B4 cat#tlrl-eblps,tlrl-3pelps(Ultrapure), tlrl-lpsbiot(Biotin),vac-3pelps(VacciGrade™) 1.0111:B4菌株是大肠杆菌的一种致病性血清型，已知可引起严重的胃病 2.文献引用量最多的LPS 3.另有VacciGrade™级别，适合用于活体动物研究 4.在体外和体内均有广泛的应用，包括巨噬细胞分化研究 |
应用实例： ●体外诱导人巨噬细胞(M1)极化[7] ●刺激小鼠巨噬细胞表达siglec蛋白[ 8] ●诱导大西洋鳕鱼和鲑鱼单核细胞的炎症反应[9] ●在小鼠模型中诱导感染性休克和急性肝衰竭[10] ●用于腹腔注射LPS治疗小鼠低铁血症的研究[11] ●在感染诺如病毒的人肠上皮细胞中，诱导形态学改变[12] |
|
LPS-PG from Porphyromonas gingivalis cat#tlrl-pglps(standards),tlrl-ppglps(Ultrapure) 1.牙周病机制中的一个重要致病因素 2.具有独特的异质性化学结构，有别于传统公认的肠道 3.适用于牙周炎相关研究 InvivoGen畅销产品 |
应用实例: ●在小鼠和大鼠牙周炎模型中诱发炎症反应[13,14] ●研究风湿病人树突状细胞牙龈卟啉单胞菌诱导的细胞因子反应[15] ●诱导人牙周韧带(PDL)细胞中NF-KB的激活[16] ●刺激人牙髓细胞(HDPCs)研究mRNA表达[17] ●刺激破骨细胞前体细胞，研究破骨细胞基因调控[18] |
|
LPS-EK from E. coli K12 cat#tlrl-eklps,tlrl-peklps(Ultrapure) 1.大肠杆菌K12菌株是典型的实验室菌株 2.拥有异质结构 3.一种有效的TLR4激动剂，主要用于体外试验
|
应用实例: ●在骨髓源性巨噬细胞和人外周血单个核细胞内 刺激促炎细胞因子的产生[19] ●诱导小鼠脾细胞B细胞增殖[20] ●刺激小鼠的造血和气道上皮细胞进行哮喘研究[21] ●用于在HIV感染时刺激树突状细胞和CD4+ T细胞[22] ●诱导COVID-19患者的PBMC产生IL-6、TNF-a和CCL2 [23] ●启动THP-1细胞，促进炎性小体激活[24] |
|
LPS-SM from Salmonella minnesota R595 cat#tlrl-smlps(Ultrapure)
1.仅由脂类A和3-deoxy- d –甘露八酸组成 2. 只提供VacciGrade™级别 3.通常用于体外细胞活化
|
示例应用: ●刺激肉鸡血小板中促炎细胞因子的产生[25] ●诱导PBMC分泌IL-6、TNF-α和IL-8[26] ●刺激腹腔巨噬细胞产生IL-1β[27] ●刺激小鼠骨髓来源的树突状细胞产生前IL -1β前体和Caspase 1前体的产生[28] ●诱导大西洋鳕鱼和鲑鱼单核细胞的炎症反应[9]
|
|
LPS-RS from Rhodobacter sphaeroides (TLR4拮抗剂) cat#tlrl-rslps, tlrl-prslps(Ultrapure)
1. LPS-RS标准品是TLR2的有效激动剂，而LPS-RS超纯特异性拮抗TLR4 – 拮抗剂浓度超过100倍以上可以完全竞争性抑制LPS活性 – 能够被LAL试剂检测
|
示例应用: ●抑制人子宫内膜内皮细胞(HEECs)中TLR-4依赖性细胞因子的分泌[29] ●抑制中耳胆脂瘤干细胞(ME-CSCs)的TLR-4依赖性炎症反应[30] ●研究LPS对大鼠急性肺损伤的抑制作用[31] ●研究小鼠血管痉挛和神经损伤的减轻作用[32] ●抑制TLR-4诱导的CD14内吞[33]
|
更多详情请联系InvivoGen中国代理商上海金畔生物
如何选择核小体(nucleosomes)?
如何选择核小体(nucleosomes)?
作者：Ellen N. Weinzapfel 博士，Lu Sun 博士
染色质及其调控在包括癌症等多种人类疾病中都发挥重要作用，并共同构成了学术、工业和临床研究中快速发展的研究领域1。染色质结构的基本亚单位是核小体，由大约147bp的DNA缠绕在核心组蛋白八聚体上构成（图1）2。组蛋白亚基有多种化学修饰，如甲基化、乙酰化和磷酸化，这些修饰被称为组蛋白修饰或翻译后修饰(PTMs)。
组蛋白修饰的功能:一种组蛋白编码
这些修饰调节染色质对各种蛋白质的可及性，如转录因子和核小体重塑复合物3,4。此外，组蛋白PTMs可以直接与染色质相互作用或招募染色质相互作用蛋白。因此，不同的组蛋白修饰与独特的基因组功能相关。例如，组蛋白H3赖氨酸27（H3K27me3）上的三甲基化与基因抑制密切相关5，而H3K4me3定位于活性转录起始位点，因此与基因激活相关6。
总之，这些组蛋白修饰网络及其动态调控协调了硬编码基因组的表观遗传控制，从而影响各种细胞过程，如基因调控、细胞分化和发育4,7。
研究组蛋白修饰的理想底物
越来越多的证据表明，核小体是体外表征许多染色质调节因子的最佳底物。这与之前的研究不同，之前的研究通常使用修饰的组蛋白肽来识别染色质抑制剂或定义新的组蛋白PTM相互作用。
在之前一篇关于组蛋白肽和核小体用于组蛋白PTM抗体验证的博客文章(https://www.epicypher.com/resources/blog/histone-peptides-vs-nucleosomes-which-is-better-for-chip-antibody-validation/)中，我们已经讨论了这个主题。然而，这些问题也与染色质修饰酶的研究有关。例如，NSD2甲基转移酶(与多发性骨髓瘤中的致癌重编程相关)需要核小体底物才能发挥体外活性8。同样，当使用重组核小体时，通过SETD8甲基转移酶的Km显示SAM辅因子比使用组蛋白肽底物时降低了10000倍9。
随着携带完全确定组蛋白修饰的重组核小体的出现，为下一代染色质研究提供了新的或更好的方法(如染色质结合蛋白分析、酶分析、抗体谱分析)。
如何获得重组核小体?
获得重组核小体的制造工艺有很多种，如EpiCypher通过设计来获得核小体(EpiCypher designer nucleosomes, dNucs)。一般来说，大部分相关的方法基本遵循相同的一系列步骤:
然而，并非所有的重组核小体都具有相同的质量！不同供应商的合成过程和质量验证标准可能存在很大差异。
如何挑选优质的核小体？
如果您要使用重组核小体进行染色质实验，则需考虑以下几点：
1、用于开发修饰组蛋白的方法。确保使用无疤痕方法整合所需的PTMs是很重要的，这种方法可以重现天然组蛋白结构。EpiCypher 使用几种不同的方法获得修饰的组蛋白，所有方法都会无疤痕整合组蛋白修饰。
为什么这很重要呢？许多市售的重组核小体是使用组蛋白PTM类似物构建的，如甲基赖氨酸类似物(MLAs) 10，其会导致修饰位点的氨基酸序列发生变化。这些非天然组蛋白修饰类似物已被证明会破坏与染色质调节蛋白和组蛋白PTM特异性抗体的相互作用，并且这对研究生理机制来讲是不理想的。因此，使用这些方法合成的核小体时应格外谨慎11-13。
2、修饰组蛋白的纯度。组装完全定义的同质核小体的下一步是对修饰组蛋白进行严格的质量控制。
在质控结果中，HPLC 迹线应显示是单一洗脱物质，表明组蛋白纯度>95%；平行高分辨率质谱（HRMS）应在预期质量的1道尔顿范围内显示一个单峰，没有任何意义的额外电荷质量（m/z）信号（例如图2A）。EpiCypher的所有修饰组蛋白均通过HPLC和HRMS分析进行验证。
为什么这很重要呢？不必要的物质（如甲硫氨酸氧化）可能引起结构改变，并影响静电相互作用或疏水相互作用，从而损害下游核小体组装的效率。
3、组装核小体的质量控制(QC)指标。DNA组装后核小体的质量验证对最终产品的信任保证至关重要。
EpiCypher使用天然PAGE分析DNA上的dNuc组装，其中使用约150bp DNA的高效组装应该只产生单一物质，这相对于未组装的游离DNA，其迁移率降低(图2B，下图)。
为什么这很重要呢？因为被污染的游离DNA会诱导染色质修饰酶(如NSD2)的异常活性，所以必须避免。此外，次优组装可能导致样品的异质性混合，包括错误定位的核小体。
我们还使用考马斯染色对最终的dNucs进行SDS-PAGE分析，以确保四种组蛋白的化学计量相等（图2C，下图）。然后，我们通过免疫印迹证实了整合组蛋白PTM的存在（图2C，上图）。
为什么这很重要呢？如果其他种类的蛋白质污染或偏离1:1:1:1的比例，则可能表明组蛋白降解或组装不良，因此有必要重新解析每个组蛋白。而免疫印迹对于确定修饰是否存在于组蛋白的正确位置上非常重要。
EpiCypher拥有令人印象深刻的产品目录，其中包括83个独特的重组核小体库存，并且有能力生产定制设计核小体，质量高、周期短，助力您的研究！
想了解更多关于EpiCypher重组核小体技术和产品的信息吗？请联系金畔！
EpiCypher核小体相关产品系列
◆ Recombinant Nucleosomes
◆ SNAP-ChIP® Spike-ins
◆ SNAP-CUTANA™ Spike-in Controls
◆ Modified Designer Nucleosomes (dNucs™)
◆ dCypher™ Nucleosome Panels
◆ EpiDyne® Chromatin Remodeling Substrates
◆ Recombinant Nucleosomes (rNucs)
◆ Mutant Nucleosomes
◆ Purified Nucleosomes (HeLa, Avian)
◆ Nucleosome Components and Subunits
◆ Variant Nucleosomes (vNucs)
◆ Methyl DNA Designer Nucleosomes
参考文献
1. Valencia AM, Kadoch C. Chromatin regulatory mechanisms and therapeutic opportunities in cancer. Nat Cell Biol, 2019. p. (PubMed PMID: 30602726)
2. Luger K, et al. Crystal structure of the nucleosome core particle at 2.8 A resolution. Nature, 1997. 389(6648): p. 251-60. (PubMed PMID: 9305837)
3. Jenuwein T, Allis CD. Translating the histone code. Science, 2001. 293(5532): p. 1074-80. (PubMed PMID: 11498575)
4. Rothbart SB, Strahl BD. Interpreting the language of histone and DNA modifications. Biochim Biophys Acta, 2014. 1839(8): p. 627-43. (PubMed PMID: 24631868) (PMC4099259)
5. Cao R, et al. Role of histone H3 lysine 27 methylation in Polycomb-group silencing. Science, 2002. 298(5595): p. 1039-43. (PubMed PMID: 12351676)
6. Liang G, et al. Distinct localization of histone H3 acetylation and H3-K4 methylation to the transcription start sites in the human genome. Proc Natl Acad Sci U S A, 2004. 101(19): p. 7357-62. (PubMed PMID: 15123803) (PMC409923)
7. Bernstein BE, et al. A bivalent chromatin structure marks key developmental genes in embryonic stem cells. Cell, 2006. 125(2): p. 315-26. (PubMed PMID: 16630819)
8. Li Y, et al. The target of the NSD family of histone lysine methyltransferases depends on the nature of the substrate. J Biol Chem, 2009. 284(49): p. 34283-95.(PubMed PMID: 19808676)(PMC2797197)
9. Strelow JM, et al. The Use of Nucleosome Substrates Improves Binding of SAM Analogs to SETD8. J Biomol Screen, 2016. 21(8): p. 786-94.(PubMed PMID: 27369108)
10. Simon MD, et al. The site-specific installation of methyl-lysine analogs into recombinant histones. Cell, 2007. 128(5): p. 1003-12. (PubMed PMID: 17350582)(PMC2932701)
11. Gloss LM, Kirsch JF. Decreasing the basicity of the active site base, Lys-258, of Escherichia coli aspartate aminotransferase by replacement with gamma-thialysine. Biochemistry, 1995. 34(12): p. 3990-8. (PubMed PMID: 7696264)
12. Gellman SH. On the role of methionine residues in the sequence-independent recognition of nonpolar protein surfaces. Biochemistry, 1991. 30(27): p. 6633-6. (PubMed PMID: 2065050)
13. Seeliger D, et al. Quantitative assessment of protein interaction with methyl-lysine analogues by hybrid computational and experimental approaches. ACS Chem Biol, 2012. 7(1): p. 150-4. (PubMed PMID: 21991995) (PMC3265130)
EpiCypher的注册商标和知识产权可见链接：https://www.epicypher.com/intellectual-property/。
本文中的所有其他商标和商品均为其各自公司所有。
本文翻译自链接：https://www.epicypher.com/resources/blog/finding-the-best-substrate-for-studying-histone-modifications/，如与原文有出入的地方，请以英文原文为准。
未经EpiCypher公司事先书面同意，本文件不得部分或全部复制。
关于EpiCypher公司：
EpiCypher是一家成立于2012年的表观遗传学公司。从专有组蛋白肽阵列平台EpiGold™开始，EpiCypher开发了一系列同类产品。同时，EpiCypher是重组核小体制造和开发的全球领导者。利用其独有技术，不断增加产品库中高纯度修饰重组核小体（dNucs™）产品。dNuc™多样性的产品为破译组蛋白编码和加速药物开发提供了强大的工具。
EpiCypher还将dNuc™技术广泛的应用于多种分析测定产品中，包括：SNAP-ChIP®Spike-in Controls（用于抗体分析和ChIP定量）， EpiDyne®底物（用于染色质重塑和抑制剂筛选及开发），dCyher™测定（用于探究表观遗传蛋白质-组蛋白PTM结合相互作用）。最近，EpiCypher还推出了针对ChIC、CUT&RUN和CUT&Tag的高灵敏度表观基因组图谱CUTANA™分析。
如需了解更多详细信息或相关产品，请联系EpiCypher中国代理商-上海金畔生物
怎样选择合适的显微镜浸油？
用于普通光学显微镜——Type A和B
Type A和B浸油相比其他型号产量大，也是最经济的型号。A型和B型可以互换，并且可以混溶以获得中等粘度。可以根据您的具体应用的最佳粘度来选择。
A型（低粘滞度）:Cargille浸油中粘度最低的一款(150cSt)，
易于使用，尤其适合初学的学生使用。
B型（高粘滞度）:1250cSt，可以同时观察多张切片，
在批量处理过程中可节省时间。
产品信息
| 产品货号 | 产品名称 | 规格 |
| 16482 |
Immersion Oil Type A | 1/4 fl.oz., 1 fl.oz., 4 fl.oz., 16 fl.oz. |
| 16484 | Immersion Oil Type B | 1/4 fl.oz., 1 fl.oz., 4 fl.oz., 16 fl.oz. |
用于自动血液学系统——Type 300
自动血液学系统依赖于精确控制的浸油的物理和光学特性来实现成功成像和机械加工。Type 300的设计和生产满足该类设备的严格要求，包括专门的粘度和对一致性的严格控制。
产品信息
| 产品货号 | 产品名称 | 规格 |
| 16252 | Immersion Oil Type 300 | 1/4 fl.oz., 1 fl.oz., 4 fl.oz., 16 fl.oz. |
用于倒置、倾斜、投影和长焦距的仪器——Type NVH和OVH
盖玻片和物镜之间，或者玻片和聚光镜之间的间隙越大 ，就越需要高粘度的浸油。非常高粘度的型号NVH(21,000cSt)和OVH(46,000cSt)在这些应用中效果极佳。
产品信息
| 产品货号 | 产品名称 | 规格 |
| 16485 | Immersion Oil Type NVH | 1/4 fl.oz., 1 fl.oz., 4 fl.oz., 16 fl.oz. |
| 16487 | Immersion Oil Type OVH | 1 fl.oz., 4 fl.oz., 16 fl.oz. |
用于荧光显微镜—— Type LDF，HF和FF
LDF和HF型荧光极低，FF型几乎无荧光，但不符合ISO标准。HF型的荧光比LDF型略强，但不含卤素。对于大多数非重要的荧光显微镜应用，A型和B型的荧光强度足够低。LDF，HF和FF型浸油的粘滞度分别为500cSt, 700cSt和170cSt。
产品信息
| 产品货号 | 产品名称 | 规格 |
| 16241 | Immersion Oil Type LDF | 1/4 fl.oz., 1 fl.oz., 4 fl.oz., 16 fl.oz. |
| 16245 | Immersion Oil Type HF | 1 fl.oz., 4 fl.oz., 16 fl.oz. |
| 16212 | Immersion Oil Type FF | 1/4 fl.oz., 1 fl.oz., 4 fl.oz., 16 fl.oz. |
高温（> 23℃至37℃）——Type 37
温度升高可能是由于台下照明，“热台”，或其他原因造成的，Type37是用于这些情况的理想浸油。Type37专门为在人体温度下工作而开发，37℃时的折射率为1.515，粘度为1250cSt，解决了高于标准校准温度23℃时图像退化的问题。用户可以根据自己的工作温度混合Type B（23℃时粘度为1250cSt）使用，来保持恒定的粘度和光学值，并将校准温度按比例设于23℃至37℃之间。
产品信息
| 产品货号 | 产品名称 | 规格 |
| 16237 | Immersion Oil Type 37 | 1 fl.oz., 4 fl.oz., 16 fl.oz. |
| 16240 | Immersion Oil Type 37LDF | 1/4 fl.oz., 1 fl.oz., 4 fl.oz., 16 fl.oz. |
可混溶浸油组合
|
Type A，B，300，NVH和OVH浸油可以混溶。混合任何两个浸油可得到中间粘度的浸油，同时保持两者共同的光学特性。Cargille可以提供小包装浸油套装。 |
产品信息
| 产品货号 | 产品名称 | 规格 |
| 16490 | Immersion Oil Sampler (5) Poly-Pak | 1/4 fl. oz Type A Immersion Oils*2瓶 |
| 1/4 fl. oz Type B Immersion Oil*1瓶 | ||
| 1/4 fl. oz Type 300 Immersion Oil*1瓶 | ||
| 1/4 fl. oz Type NVH Immersion Oil*1瓶 |
*1 fl.oz.约为30ml
关于Cargille Laboratories：
美 国Cargille Laboratories公司成立于1924年，服务于涉及显微镜和光学研究的许多实验室。几十年来，Cargille一直在显微镜浸油的开发和标准化方面处于领先地位，Cargille浸油无色、无味、无毒，达到甚至超过ISO 8036-1标准，Cargille也参与了浸油ISO规范的制订。此外，Cargille还可提供高稳定性的激光液体、折射率匹配液、糖度标准液、封片剂、光学凝胶、熔融石英匹配液体等。
显微镜浸油主要用于浸泡显微镜物镜，其配方要求具有良好的光学效应，在使用过程中浸油构成了显微镜光学系统的一部分，在采用高倍物镜观察玻片标本时，能获得最佳的光学效果，以保证成像质量。
更多详细信息，请咨询Cargille Laboratories全国代理-上海金畔生物
抗体如何选择？选单克隆还是多克隆？
使用抗体时选单抗还是多抗？相信很多同学都有这个疑问，单克隆抗体和多克隆抗体有什么区别呢？这个问题问得好，因为它们无论是在生产过程还是用途上都非常不同，了解了这些知识以后对选择合适抗体有很大的帮助。本篇总结了很多资料，下面就来给大家一一解答。
首先列出一个表格，让大家对多克隆抗体和单克隆抗体有一个简单的认识和对比
| 多克隆抗体 | 单克隆抗体 |
| 与目标蛋白上不同表位结合的多种不同抗体 | 只识别目标蛋白上一种表位的单一抗体 |
| 非表位特异的 | 表位特异的 |
| 与相似抗原有更多的交叉反应 | 交叉反应少 |
| 背景干扰较高 | 背景干扰低 |
| 各批次抗体有所不同 | 每批次抗体完全一样 |
| 成本较低 | 成本较高 |
| 制备耗时短 (大约 3 个月) | 制备耗时较长 (大约 6 个月) |
| 很多宿主物种可选 | 宿主物种选择不多 |
那么到底什么是单克隆抗体呢?
单克隆抗体的定义:单克隆抗体是仅与目标蛋白某一特定表位结合的单一抗体。
单克隆抗体的制备
简单来说就是将免疫原注射到宿主动物体内产生免疫反应，之后把B细胞从脾脏中移出，单种B细胞与骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤，成为一个永生化胞株。这样一来，杂交瘤的B细胞就会一直产出只识别单一表位的单克隆抗体，通常这个胞株会有一个特定的克隆号（clone number），用来与其他胞株区分。
杂交瘤接下来可以被注射到小鼠的腹腔中大量生产，杂交瘤分泌富含抗体的一种液体，被称作腹水，用注射器抽取纯化，就可获得大量的单克隆抗体。
单克隆抗体更适用于:
检测单一抗原
检测蛋白质家族的单一成员
不同实验/批次的抗体检测结果稳定一致
细胞染色背景较低-很适用于IHC、ICC、IF 等应用
量化蛋白质表达 (例：流式或荧光细胞分选)
探测分子结构变化
探测磷酸化状态的变化
为X射线晶体测试探测目标
制作缺少特定细胞类型的动物模型
免疫治疗
单克隆抗体不建议用于:
根据同源性检测不同物种的目标蛋白
检测浓度较低的目标蛋白
检测形态变化了的蛋白
什么是多克隆抗体呢?
多克隆抗体定义:多克隆抗体是指与目标蛋白上多种不同表位结合的多种不同抗体.
多克隆抗体制备
多克隆抗体的第一步和单克隆抗体一样，都是将免疫原注射到宿主体内产生免疫反应，激活了多种B细胞。不同的是免疫过后，多克隆抗体就直接从免疫宿主的血清中分离出来，或接着进行纯化，没有与骨髓瘤细胞融合的过程。一旦宿主动物死亡，需要免疫新的动物，这时血清中的抗体就会有所不同。
虽然多抗每批次有轻微差别，但是因为它识别的表位多，这个差别影响并不算太大，而单克隆抗体虽然价格偏高，可是特异性更强更稳定。可以说单抗和多抗是各有各的优点。
多克隆抗体更适用于:
检测有高同源性的抗原的已知或未知同种型
检测浓度较低的抗原
捕获尽可能多的抗原 (例如 IP 或 ChiP)
检测变性的蛋白
检测可能发生了糖基化或形态变化的目标蛋白
用多种检测方法检测一种原蛋白时
检测 pH 和盐度不同的溶液中的目标蛋白
多克隆抗体不建议用于:
量化检测，比如：流式。由于不同表位的结合导致信号被放大加强，可能会导致结果不准确
当高同源性蛋白的交叉反应会引起问题时
更多详情请咨询上海金畔生物
如何选择ImmPRESS Polymer Kit
选择酶检测系统
●过氧化物酶
● 碱性磷酸酶
选择合适的ImmPRESS试剂盒
为了获得最佳的染色结果(无背景或最低背景),在选择ImmRESS Polymer Kit时应注意以下几个方面：
● 一抗来源
● 检测组织的种类–选择经特定预吸附的检测试剂盒（样本有可能存在交叉反应）
● 单染还是双染
● 灵敏度（ImmPRESS Excel HRP双染试剂盒是最灵敏的，不建议用于山羊， 牛或绵羊组织的检测）
● 使用小鼠来源一抗检测小鼠组织时，选择M.O.M
选择合适的酶底物*
合适的选择要考虑：
•检测的酶系统种类（过氧化物酶或碱性磷酸酶）
•单抗原染色或多抗原染色颜色需求
•灵敏度
•复染兼容性
•水溶性或非水溶性封片剂的选择（酶底物选择请咨询上海金畔生物）
*ImmPRESS PLUS,ImmPRESS Duet和ImmPRESS Excel Kits包含底物
| Product |
Peroxidase (HRP) |
Peroxidase PLUS* (HRP) |
Veterinary Reagents
(HRP) |
Excel Amplified*
(HRP) |
Alkaline Phosphatase
(AP) |
Duet Double
Staining* (HRP & AP) |
| ImmPRESS Anti-Rabbit IgG Kit
(made in horse) |
MP-7401 | MP-7801 | MP-6401 | MP-7601 | MP-5401 | |
| ImmPRESS Anti-Rabbit IgG Kit
(made in goat) |
MP-7451 | |||||
| ImmPRESS Anti-Mouse IgG Kit
(made in horse) |
MP-7402 | MP-7802 | MP-6402 | MP-7602 | MP-5402 | |
| ImmPRESS Anti-Mouse IgG Kit
(made in goat) |
MP-7452 | |||||
| ImmPRESS Anti-Mouse IgG,
Rat Adsorbed, Kit (made in horse) |
MP-7422 | |||||
| ImmPRESS Anti-Rat IgG Kit
(made in horse) |
MP-7404 | MP-5404 |
| ImmPRESS Anti-Rat IgG,
Mouse Adsorbed, Kit (made in goat) |
MP-7444 | MP-5444 | ||||
| ImmPRESS Anti-Goat IgG Kit
(made in horse) |
MP-7405 | MP-5405 | ||||
| ImmPRESS Universal Antibody Kit
Anti-Rabbit/Mouse Kit (made in horse) |
MP-7500 | MP-7800 | ||||
| ImmPRESS Duet Anti-Rabbit (HRP,
Brown)Anti-Mouse (AP, magenta) |
MP-7714 | |||||
| ImmPRESS Duet Anti-Mouse (HRP,
Brown)Anti-Rabbit (AP, magenta) |
MP-7724 |
*表示试剂盒内包含BLOXALL blocking solution封闭试剂和底物
多抗原染色流程简化
ImmPRESS聚合物试剂的显著优势在于它大大缩短了多抗原标记实验(multiplexing)的染色时间。
● 与传统实验方法相比，减少了切片处理的步骤。
● 针对内源性生物素样本无需封闭操作。
 |
 |
 |
| 乳腺癌组织染色：
● Ki67(rm),ImmPRES试剂(HRP;Universal), Vector DAB(棕色), ● CD34, ImmPRESS试剂(HRP; Universal), Vector VIP(紫色)。 |
结肠组织染色： ● M2A抗原(m),VECTASTAIN ABC-AP 试剂盒 (Universal),Vector Blue(蓝色), ● CD20(m),ImmPRES试剂(HRP; Universal), Vector VIP(紫色)。 |
结肠组织染色：
● CD3(rm),ImmPRESS试剂(HRP)抗兔IgG, ImmPACT AMEC Red , ● CD34(m),ImmPRESS-AP 抗小鼠IgG试剂, Vector Blue(蓝色)。 |
ImmPRESS多聚物试剂盒选择注意事项：
● 对于使用小鼠和兔来源一抗同时检测同一切片样本上的两种抗原(比如人/灵长类样本)，我们推荐使用ImmPRESS Duet Double Staining Polymer试剂盒。
● 如果使用小鼠或兔来源一抗搭配山羊或大鼠来源一抗同时检测非人类/灵长类动物组织切片中的两个或多个抗原时，我们推荐选择具有物种特异性的ImmPRESS试剂盒(咨询上海金畔生物)，满足您的检测要求，并按下图所示顺序使用。
使用ImmPRESS Polymer试剂盒进行多种抗原染色
更多详细信息，请咨询Vectorlabs代理商-上海金畔生物