抗体如何选择？选单克隆还是多克隆？

使用抗体时选单抗还是多抗？相信很多同学都有这个疑问，单克隆抗体和多克隆抗体有什么区别呢？这个问题问得好，因为它们无论是在生产过程还是用途上都非常不同，了解了这些知识以后对选择合适抗体有很大的帮助。本篇总结了很多资料，下面就来给大家一一解答。

首先列出一个表格，让大家对多克隆抗体和单克隆抗体有一个简单的认识和对比

那么到底什么是单克隆抗体呢?

单克隆抗体的定义:单克隆抗体是仅与目标蛋白某一特定表位结合的单一抗体。

单克隆抗体的制备

简单来说就是将免疫原注射到宿主动物体内产生免疫反应，之后把B细胞从脾脏中移出，单种B细胞与骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤，成为一个永生化胞株。这样一来，杂交瘤的B细胞就会一直产出只识别单一表位的单克隆抗体，通常这个胞株会有一个特定的克隆号（clone number），用来与其他胞株区分。

杂交瘤接下来可以被注射到小鼠的腹腔中大量生产，杂交瘤分泌富含抗体的一种液体，被称作腹水，用注射器抽取纯化，就可获得大量的单克隆抗体。

单克隆抗体更适用于:

• 检测单一抗原

• 检测蛋白质家族的单一成员

• 不同实验/批次的抗体检测结果稳定一致

• 细胞染色背景较低-很适用于IHC、ICC、IF 等应用

• 量化蛋白质表达 (例：流式或荧光细胞分选)

• 探测分子结构变化

• 探测磷酸化状态的变化

• 为X射线晶体测试探测目标

• 制作缺少特定细胞类型的动物模型

• 免疫治疗

• 单克隆抗体不建议用于:

• 根据同源性检测不同物种的目标蛋白

• 检测浓度较低的目标蛋白

• 检测形态变化了的蛋白

什么是多克隆抗体呢?

多克隆抗体定义:多克隆抗体是指与目标蛋白上多种不同表位结合的多种不同抗体.

多克隆抗体制备

多克隆抗体的第一步和单克隆抗体一样，都是将免疫原注射到宿主体内产生免疫反应，激活了多种B细胞。不同的是免疫过后，多克隆抗体就直接从免疫宿主的血清中分离出来，或接着进行纯化，没有与骨髓瘤细胞融合的过程。一旦宿主动物死亡，需要免疫新的动物，这时血清中的抗体就会有所不同。

虽然多抗每批次有轻微差别，但是因为它识别的表位多，这个差别影响并不算太大，而单克隆抗体虽然价格偏高，可是特异性更强更稳定。可以说单抗和多抗是各有各的优点。

多克隆抗体更适用于:

• 检测有高同源性的抗原的已知或未知同种型

• 检测浓度较低的抗原

• 捕获尽可能多的抗原 (例如 IP 或 ChiP)

• 检测变性的蛋白

• 检测可能发生了糖基化或形态变化的目标蛋白

• 用多种检测方法检测一种原蛋白时

• 检测 pH 和盐度不同的溶液中的目标蛋白

多克隆抗体不建议用于:

• 量化检测，比如：流式。由于不同表位的结合导致信号被放大加强，可能会导致结果不准确

• 当高同源性蛋白的交叉反应会引起问题时

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多克隆抗体和单克隆抗体的区别详解

多克隆抗体和单克隆抗体的区别：

什么是单克隆抗体?

Monoclonal-Antibodies-Icon/单克隆抗体定义:

单克隆抗体是仅与目标抗原某一特定表位结合的单一抗体

单克隆抗体的制备

单克隆抗体制备时首先要将免疫原注射到宿主动物体内，当免疫原诱发宿主产生免疫反应，脾脏就会产生大量不同种类的B-细胞。此时单一的B-细胞被提取出来，与骨髓瘤细胞杂交 （癌症B-细胞）。

之所以要将B-细胞与骨髓瘤细胞杂交，是因为健康正常的脾细胞无法在细胞培养基无限存活，而与骨髓瘤细胞杂交形成杂交瘤细胞后，该细胞就成为永生化胞株，不断产生抗体。

单一B-细胞从脾脏中分离，形成杂交瘤细胞后，产生的抗体就是单一抗体，只与目标抗原上某一特定的表位反应。

每一个杂交瘤生产出单一的单克隆抗体，这个杂交瘤就被赋予一个克隆号，以此来方便辨别这个特异的抗体是识别哪一个特定的表位。

B-细胞将单克隆抗体分泌至细胞培养基中，然后提取出来做后续的检测和纯化。

一旦单克隆抗体杂交瘤克隆生成，该克隆就十分稳定，可以重复使用，这就确保了每一批次的抗体是完全一致的。

杂交瘤也可以被注射到小鼠的腹腔中大量生产，杂交瘤分泌富含抗体的一种液体，被称作腹水，用注射器抽取，就可获得大量的单克隆抗体。

单克隆抗体适用于:

检测单一抗原

检测蛋白质家族的单一成员

不同实验/批次的结果稳定一致

细胞染色背景较低-很适用于IHC、ICC、IF等应用

量化蛋白质表达（例：流式或荧光细胞分选）

探测分子结构变化

探测磷酸化状态变化

为X射线晶体学探测目标

免疫治疗

单克隆抗体不建议用于:

根据同源性检测不同物种的目标蛋白

检测浓度较低的目标蛋白

检测形态变化了的蛋白

什么是多克隆抗体?

Polyclonal-Antibodies-Icon/多克隆抗体定义

多克隆抗体是与目标蛋白上多种不同表位结合的多种不同抗体。

多克隆抗体制备

多克隆抗体的第一步和单克隆抗体一样，都是将免疫原注射到宿主体内产生免疫反应，激活了多种B细胞。不同的是免疫过后，多克隆抗体就直接从免疫宿主的血清中分离出来，或纯化，没有与骨髓瘤细胞融合的过程。一旦宿主动物死亡，需要免疫新的动物，这时血清中的抗体就会有所不同。

根据制备方法的不同，功能自然也就有所不同了。虽然多抗每批次有轻微差别，但是因为它识别的表位多，这个差别影响并不算太大，而单克隆抗体虽然价格偏高，可是特异性更强更稳定。

多克隆抗体适用于:

检测有高同源性的抗原的已知或未知同种型

检测浓度较低的抗原

捕获尽可能多的抗原（例：IP或ChIP）

检测变性的蛋白

检测可能发生了糖基化或形态变化的目标蛋白

用多种检测方法检测一种原蛋白时

检测pH和盐度不同的溶液中的目标蛋白

多克隆抗体不建议用于:

量化检测，例：流式。由于不同表位的结合导致信号被放大加强，可能会导致结果不准确

当高同源性蛋白的交叉反应会引起问题时

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单克隆抗体与多克隆抗体的区别

单克隆抗体和多克隆抗体，虽然只有一字之差，但是两者的区别，还是比较大的，本篇欣欣就为各位科研的老师们整理单克隆抗体与多克隆抗体的区别，供大家参考使用。

单克隆抗体

特点：

不易产生批次间差异。

仅由一种抗体亚型组成（例如 IgG1、IgG2、IgG3）。如需使用二抗进行检测，应针对正确的亚类选择抗体。

抗体制备：

技术要求较高。

应用技术之前需接受专门培训。

需要花费较长时间制备杂交瘤细胞。

优点：

制得的杂交瘤细胞为持续且可再生产的单克隆抗体来源，而且所有批次均相同，有助于提升实验过程和实验结果的一致性和标准化水平。

单克隆抗体只检测每个抗原上的一个表位，因此具有以下优点:

切片和细胞染色产生的背景信号更少。特异性地检测一个靶表位，不易与其它蛋白质发生交叉反应。

由于具有高特异性，单克隆抗体非常适于用作实验中的一抗，其产生的背景染色信号通常显著低于多克隆抗体。

相较于多克隆抗体，单克隆抗体的同质性非常高。在相同的实验条件下，单克隆抗体实验之间的结果重现性非常高。

得益于其高特异性，单克隆抗体能够在相关分子的混合物中（例如在亲和纯化过程中）极为高效地结合抗原。

缺点：

特异性过高，以致于无法进行跨物种的检测。

与多克隆抗体相比，更易受化学处理造成的抗原表位丢失的影响。这可通过合并靶抗原相同的两种或多种单克隆抗体进行补偿（例如使用抗体组合试剂盒）。

多克隆抗体

特点：

识别任一抗原上的多个表位。所得血清为异质性抗体混合物，其亲和力各有不同。

多克隆抗体主要由 IgG 亚类组成。

通常使用多肽免疫原制备以独有表位为靶标的多克隆抗体，尤其是针对高同源性的蛋白家族。

抗体制备：

制备成本低廉且制备速度较快。

制备过程比单克隆抗体简单。

优点：

多克隆抗体可识别任一抗原上的多个表位，因此具有以下优点:

高亲和性：由于靶蛋白上的多个表位能够结合不止一个抗体分子，多克隆抗体可放大低表达水平靶蛋白的信号。但是，这会影响定量实验（如流式细胞术实验）结果的准确性。

可识别多个表位，有利于免疫沉淀 (IP) 和染色质免疫沉淀 (ChIP) 实验获得更好的结果。

与单克隆抗体相比，对微小抗原变化（例如多态性、糖基化异质性或者轻微变性）的包容性更强。

可识别与免疫原蛋白质具有高度同源性的蛋白质，还可用于筛查非免疫原物种的靶蛋白。

通常是检测变性蛋白质的首选。

多表位通常可提升检测的稳定性。

缺点：

易产生批次间差异。

产生大量非特异性抗体，可能会在某些应用中产生背景信号。

由于具有多个表位，检测免疫原序列的交叉反应性非常重要。

不适用于探测抗原的特定结构域，因为抗血清通常会识别多个结构域。

单克隆与多克隆抗体的主要区别总结：

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