GenomONE™ Neo E仙台病毒包膜转染试剂转染试剂-Wako富士胶片和光

GenomONE™ Neo E仙台病毒包膜转染试剂转染试剂-Wako富士胶片和光

供货周期 一个月 规格 1set
应用领域 生物产业 主要用途 DNA、siRNA、ODN及蛋白转染

GenomONE™-Neo EX仙台病毒包膜转染试剂
原理
待转移的分子(如DNA,蛋白,Antisense Oligonucleotide, siRNA等)与HVJ-Envelope (HVJ-E) 混合后,形成了HVJ-E载体。利用病毒衣壳蛋白的侵染能力,在融合蛋白(F)的作用下,直接与细胞融合,将分子转入目标细胞或组织。

GenomONE®Neo EX 仙台病毒包膜转染试剂

GenomONE™ Neo E仙台病毒包膜转染试剂转染试剂-Wako富士胶片和光

可用于DNA、siRNA、ODN及蛋白转染!

 

 

原理

 

GenomONE™ Neo E仙台病毒包膜转染试剂转染试剂-Wako富士胶片和光

 

  待转移的分子(如DNA,蛋白,Antisense Oligonucleotide, siRNA等)与HVJ-Envelope (HVJ-E) 混合后,形成了HVJ-E载体。利用病毒衣壳蛋白的侵染能力,在融合蛋白(F)的作用下,直接与细胞融合,将分子转入目标细胞或组织。

 

  * HVJ-E:Hemagglutinating Virus of Japan Envelope。

  ** 现已有200多篇文献使用该试剂盒,如需样本案例,请向我司索取。

 

 

优点、特色

 

      目前市面上少有的转染试剂盒,可用于细胞、组织和活体动物。可用于:

 

siRNA
      少量siRNA也可高效发挥敲除作用,无需化学修饰siRNA,高表达量。

 

DNA
      无论序列长短、线性或环状均可
 

Oligonucleotides
      DNA、RNA
 

蛋白
      保持酶和抗体的功能性与特异性
 

体内转染 !!
      大量操作和文献引用证明HVJ-E载体可直接将目标分子转移到活体动物产生作用。
 

高通量筛选
      可同时转染多种分子

1. 运用范围广
     GenomONE HVJ-E载体试剂盒可将多种分子(质粒DNA、siRNA、寡核苷酸、蛋白、抗体等)转进培养细胞(贴壁和非贴壁细胞)和组织。也可用于敏感原代细胞和 活体动物转染。每种领域的GenomONE®-Neo EX运用情况,均有大量文献报道。(如需文献列表,请向我司索取)

 

2. 安全性
     与阳离子脂质体不同,GenomONE®-Neo EX是通过膜融合作用将分子导入细胞,而脂质体转染的内吞作用可能造成转染分子经溶酶体作用而降解。GenomONE®-Neo EX内含*灭活的HVJ病毒颗粒,其具有侵染力而无潜在增殖能力,使用非常安全,无需特殊的防护措施    

 

3. 方便简单
     GenomONE 即开即用,试剂盒内包含了操作中主要使用的HVJ-E冻干粉和各种辅助试剂      

  

案例、应用

 

  GenomONE®-Neo EX和传统的脂质体转染和电穿孔法相比,有更高的转染效率和更低的细胞毒性,可更有效的发挥siRNA的knock-down作用。

 

in vivo

 

大鼠颌下腺逆行注射siRNA

  Ca2+-dependent Cl channel protein (rCLCA)表达的特异性抑制。

 

免疫染色

 

 

GenomONE™ Neo E仙台病毒包膜转染试剂转染试剂-Wako富士胶片和光      GenomONE™ Neo E仙台病毒包膜转染试剂转染试剂-Wako富士胶片和光

   non-injection side            rCLCA siRNA-injection side

 

  rCLCA siRNA(2 nmol)和GenomONE-Neo(2AU)混合后,以逆行注射的方式注入大鼠颌下腺。四十八小时后,用免疫染色检验siRNA注射对氯离子通道蛋白表达的抑制作用。
  ST:纹状管,G:颗粒曲管,A:腺泡

  【相关文献】

  K. Ishibashi et al., J. Dent. Res., 85(12), 1101-1105 (2006).

 

in vitro

 

【难转染细胞——U937细胞RNAi】

 

  总所周知,用脂质体和电转的方法将siRNA转到U937人单核细胞白血病细胞中非常困难,但我们通过实验证明,siRNA与GenomONE-Neo结合后转染该细胞,其knock-down效率可达85%以上。

 

♦ U937细胞经siRNA转染72小时后收集,用RT-PCR和WB分别检测mRNA和蛋白量的变化情况。

Real-time PCR                         Western blotting

GenomONE™ Neo E仙台病毒包膜转染试剂转染试剂-Wako富士胶片和光      GenomONE™ Neo E仙台病毒包膜转染试剂转染试剂-Wako富士胶片和光

 

 

  左图:转染Cathepsin G的特异性siRNA后,其对应的mRNA减少到14%

  右图:转染Cathepsin G的特异性siRNA后,其蛋白水平减少到15%

 

 【相关文献】 
  Y. Tsuchiya et al, Free Radical Biology & Medicine, 43, 1604-1615 (2007).

 

试剂盒组成

 

产品编号

冻干

HVJ-E

(灭活HVJ)
 0.26 mL/vial
  (重组时)

试剂A

(增强融合)
 0.5 mL/vial

试剂B

(融合试剂)
 0.3 mL/vial

试剂C

(增强导入)
 1.0 mL/vial

缓冲液

(用于悬浮和稀释​)
 6.5 mL/vial

385-18731

1 vial

1 vial

1 vial

1 vial

1 vial

381-18733

4 vials

1 vial

1  vial

1  vial

1 vial

385-18736

40 vials

10 vials

10 vials

10 vials

10 vials

 

 

◆产品列表

 

产品编号 产品名称 规格
385-18731

GenomONE® Neo EX(FD)转染试剂套装

1 set
381-18733 4 sets
389-18734 16 sets
385-18736 40 sets

 

GenomONE™-CF E 仙台病毒包膜细胞融合试剂转染试剂-Wako富士胶片和光

GenomONE™-CF E 仙台病毒包膜细胞融合试剂转染试剂-Wako富士胶片和光

供货周期 一个月以上 应用领域 生物产业

GenomONE ® 仙台病毒包膜细胞融合试剂
GenomONE®-CF EX含有仙台病毒包膜和缓冲液,可促使细胞融合。适用于贴壁或者悬浮状态的任何细胞。仅仅需要30分钟就可完成融合细胞及制造混合动力的操作。

GenomONE ®CF EXGenomONE™-CF E 仙台病毒包膜细胞融合试剂转染试剂-Wako富士胶片和光

GenomONE ® 仙台病毒包膜细胞融合试剂

 

 

GenomONE™-CF E 仙台病毒包膜细胞融合试剂转染试剂-Wako富士胶片和光

 

  GenomONE®CF EX含有仙台病毒包膜和缓冲液,可促使细胞融合。适用于贴壁或者悬浮状态的任何细胞。仅仅需要30分钟就可完成融合细胞及制造混合动力的操作。

 

 

◆用途

 

● 肿瘤疫苗·癌症免疫研究

● 癌细胞和树突细胞融合等

 再生医疗·细胞治疗研究

● 脏器来源细胞和干细胞融合等

 单克隆抗体的制备

● 抗原B细胞和髓过氧化物酶细胞融合

 分生·分化·育种研究

● 对脱核未受精卵的核移植(核置换)

● 其他

● PEG&电融合的使用介绍

 

 

HVJ Envelope(HVJ-E):

 

GenomONE™-CF E 仙台病毒包膜细胞融合试剂转染试剂-Wako富士胶片和光

 

  HVJ包膜(HVJ-E)是*灭活和纯化仙台病毒(HVJ*),即只留下细胞膜融合能力的衣壳蛋白包膜。仙台病毒的HN蛋白可与细胞膜外的唾液酸受体结合,通过F蛋白的作用,引起细胞膜融合。在HVJ-E中,仙台病毒的基因组RNA已经*失活,在人类和实验动物体内不存在感染或增殖。因而不需要特殊的操作和设备,它可以安全地在普通的实验室使用。

*HVJ:日本仙台病毒

 

 

HVJ-E细胞融合原理

 

在低温(0 – 8℃)条件下,每一个细胞与数百个以上的HVJ – E接触,HVJ – E与细胞膜上的唾液酸受体结合,通过细胞表面吸附(步骤1),细胞通过HVJ-E相互连接(步骤2),形成细胞彼此聚集的状态。当该细胞/ HVJ-E的复合物加热到37℃时,细胞膜干扰就会进一步扩大,细胞膜内膜结构也暂时改变。这种变化是短暂的,随后会立即返回到正常结构,但是在这个期间,细胞膜利用强疏水性结合力进行相互融合(步骤3)。

 

步骤一

步骤二

步骤三

GenomONE™-CF E 仙台病毒包膜细胞融合试剂转染试剂-Wako富士胶片和光

GenomONE™-CF E 仙台病毒包膜细胞融合试剂转染试剂-Wako富士胶片和光

GenomONE™-CF E 仙台病毒包膜细胞融合试剂转染试剂-Wako富士胶片和光

 

 

应用方法

 

悬浮法

电镀法

GenomONE™-CF E 仙台病毒包膜细胞融合试剂转染试剂-Wako富士胶片和光

GenomONE™-CF E 仙台病毒包膜细胞融合试剂转染试剂-Wako富士胶片和光

 

 

悬浮细胞融合案例

 

同种细胞融合
GenomONE™-CF E 仙台病毒包膜细胞融合试剂转染试剂-Wako富士胶片和光

异种细胞融合

GenomONE™-CF E 仙台病毒包膜细胞融合试剂转染试剂-Wako富士胶片和光

 

 

  荧光标记的红(* 1)细胞和绿色荧光标记(* 2)细胞(每1.0×105个)在融合缓冲液50 μL混合后,加入HVJ-E冰敷5分钟,随后37℃下反应15分钟后,融合细胞(黄色)进行了观察。

 

 

黏着态和悬浮态细胞融合案例

 

在粘合状态BHK-21(红)和在浮动状态(绿色)的P19细胞的融合

GenomONE™-CF E 仙台病毒包膜细胞融合试剂转染试剂-Wako富士胶片和光

胶粘状态的HeLa S3(红)在浮动状态(绿色)的P19细胞的融合

GenomONE™-CF E 仙台病毒包膜细胞融合试剂转染试剂-Wako富士胶片和光

 

  荧光标记的(* 1)中的红,附着的细胞在12孔平板,绿色荧光标记(* 2)中,添加预先准备的HVJ-E,来处理漂浮细胞1×105个的悬浮液(融合缓冲污染),并在室温下离心(1000转),每个板5分钟。随后孵育37℃15分钟后,更换增殖用的培养基继续细胞培养。观察3个小时后的融合细胞(黄色)。

 

 

和PEG法的比较

GenomONE™-CF E 仙台病毒包膜细胞融合试剂转染试剂-Wako富士胶片和光

 

  红色荧光标志(* 1)的ratMSC(骨髓由来老鼠间叶系细胞)和绿色荧光标识的老鼠原代培养心肌细胞2×105个融合缓冲液50 μL中混合后,添加HVJ – E,冰浴5分钟,然后37℃孵育反应15分钟,观察融合细胞(黄色)。1 – 2日培养后,观察到粘着的融合细胞。在PEG法中融合紧接之后细胞毒性强烈,融合细胞的数量很少。

 

 

◆安全性说明

 

HVJ-E失活的确认(确认无感染性病毒的存在)

 

1. 

细胞增值实验(荧光灶单元(FFU)法)

处理LLC-MK2细胞,一到两天后,病毒生长性的HVJ融合蛋白F抗体通过荧光抗体法测定,已证实未检测到病毒蛋白。<制造阶段实验>

2. 

受精卵生长试验(血凝单位测定)

处理受精卵,3天后的病毒增殖,包括在HVJ表面的HN蛋白的红血细胞聚合活性(HAU)测量作为指标,已经证实,没有看到病毒的生长。<制造阶段实验>

3. 

小鼠感染性研究

鼻腔给药小鼠和未处理小鼠(SIX周)在相同笼中饲养,通过测定血清中的抗HVJ抗体滴度进行了个体之间感染性的检测。其结果是,在非给药的情况下未观察到抗体滴度增加,表明未感染HVJ-E。

4. 

动物个体的遗传基因导入实验

小鼠、大鼠等实验动物的各种药物实验(肺、气管、肝和静脉等)。已证实*没有病毒感染或是可疑的事例

 

 

◆产品列表

 

产品编号 产品名称 规格
388-18721

GenomONE®-CF EX SeV-E (HVJ-E) 1 vial Cell Fusion Reagents

GenomONE®– CF EX 仙台病毒包膜(1只装)细胞融合试剂

1 set 
384-18723 4 sets
382-18724 16 sets

 

GenomONE™ Neo E仙台病毒包膜转染试剂转染试剂-wako富士胶片和光

GenomONE™ Neo E仙台病毒包膜转染试剂转染试剂-wako富士胶片和光

供货周期 一个月 规格 1set
应用领域 生物产业 主要用途 DNA、siRNA、ODN及蛋白转染

GenomONE™-Neo EX仙台病毒包膜转染试剂
原理
待转移的分子(如DNA,蛋白,Antisense Oligonucleotide, siRNA等)与HVJ-Envelope (HVJ-E) 混合后,形成了HVJ-E载体。利用病毒衣壳蛋白的侵染能力,在融合蛋白(F)的作用下,直接与细胞融合,将分子转入目标细胞或组织。

GenomONE®Neo EX 仙台病毒包膜转染试剂

GenomONE&trade; Neo E仙台病毒包膜转染试剂转染试剂-wako富士胶片和光

可用于DNA、siRNA、ODN及蛋白转染!

 

 

原理

 

GenomONE&trade; Neo E仙台病毒包膜转染试剂转染试剂-wako富士胶片和光

 

  待转移的分子(如DNA,蛋白,Antisense Oligonucleotide, siRNA等)与HVJ-Envelope (HVJ-E) 混合后,形成了HVJ-E载体。利用病毒衣壳蛋白的侵染能力,在融合蛋白(F)的作用下,直接与细胞融合,将分子转入目标细胞或组织。

 

  * HVJ-E:Hemagglutinating Virus of Japan Envelope。

  ** 现已有200多篇文献使用该试剂盒,如需样本案例,请向我司索取。

 

 

优点、特色

 

      目前市面上少有的转染试剂盒,可用于细胞、组织和活体动物。可用于:

 

siRNA
      少量siRNA也可高效发挥敲除作用,无需化学修饰siRNA,高表达量。

 

DNA
      无论序列长短、线性或环状均可
 

Oligonucleotides
      DNA、RNA
 

蛋白
      保持酶和抗体的功能性与特异性
 

体内转染 !!
      大量操作和文献引用证明HVJ-E载体可直接将目标分子转移到活体动物产生作用。
 

高通量筛选
      可同时转染多种分子

1. 运用范围广
     GenomONE HVJ-E载体试剂盒可将多种分子(质粒DNA、siRNA、寡核苷酸、蛋白、抗体等)转进培养细胞(贴壁和非贴壁细胞)和组织。也可用于敏感原代细胞和 活体动物转染。每种领域的GenomONE®-Neo EX运用情况,均有大量文献报道。(如需文献列表,请向我司索取)

 

2. 安全性
     与阳离子脂质体不同,GenomONE®-Neo EX是通过膜融合作用将分子导入细胞,而脂质体转染的内吞作用可能造成转染分子经溶酶体作用而降解。GenomONE®-Neo EX内含*灭活的HVJ病毒颗粒,其具有侵染力而无潜在增殖能力,使用非常安全,无需特殊的防护措施    

 

3. 方便简单
     GenomONE 即开即用,试剂盒内包含了操作中主要使用的HVJ-E冻干粉和各种辅助试剂      

  

案例、应用

 

  GenomONE®-Neo EX和传统的脂质体转染和电穿孔法相比,有更高的转染效率和更低的细胞毒性,可更有效的发挥siRNA的knock-down作用。

 

in vivo

 

大鼠颌下腺逆行注射siRNA

  Ca2+-dependent Cl channel protein (rCLCA)表达的特异性抑制。

 

免疫染色

 

 

GenomONE&trade; Neo E仙台病毒包膜转染试剂转染试剂-wako富士胶片和光      GenomONE&trade; Neo E仙台病毒包膜转染试剂转染试剂-wako富士胶片和光

   non-injection side            rCLCA siRNA-injection side

 

  rCLCA siRNA(2 nmol)和GenomONE-Neo(2AU)混合后,以逆行注射的方式注入大鼠颌下腺。四十八小时后,用免疫染色检验siRNA注射对氯离子通道蛋白表达的抑制作用。
  ST:纹状管,G:颗粒曲管,A:腺泡

  【相关文献】

  K. Ishibashi et al., J. Dent. Res., 85(12), 1101-1105 (2006).

 

in vitro

 

【难转染细胞——U937细胞RNAi】

 

  总所周知,用脂质体和电转的方法将siRNA转到U937人单核细胞白血病细胞中非常困难,但我们通过实验证明,siRNA与GenomONE-Neo结合后转染该细胞,其knock-down效率可达85%以上。

 

♦ U937细胞经siRNA转染72小时后收集,用RT-PCR和WB分别检测mRNA和蛋白量的变化情况。

Real-time PCR                         Western blotting

GenomONE&trade; Neo E仙台病毒包膜转染试剂转染试剂-wako富士胶片和光      GenomONE&trade; Neo E仙台病毒包膜转染试剂转染试剂-wako富士胶片和光

 

 

  左图:转染Cathepsin G的特异性siRNA后,其对应的mRNA减少到14%

  右图:转染Cathepsin G的特异性siRNA后,其蛋白水平减少到15%

 

 【相关文献】 
  Y. Tsuchiya et al, Free Radical Biology & Medicine, 43, 1604-1615 (2007).

 

试剂盒组成

 

产品编号

冻干

HVJ-E

(灭活HVJ)
 0.26 mL/vial
  (重组时)

试剂A

(增强融合)
 0.5 mL/vial

试剂B

(融合试剂)
 0.3 mL/vial

试剂C

(增强导入)
 1.0 mL/vial

缓冲液

(用于悬浮和稀释​)
 6.5 mL/vial

385-18731

1 vial

1 vial

1 vial

1 vial

1 vial

381-18733

4 vials

1 vial

1  vial

1  vial

1 vial

385-18736

40 vials

10 vials

10 vials

10 vials

10 vials

 

 

◆产品列表

 

产品编号 产品名称 规格
385-18731

GenomONE® Neo EX(FD)转染试剂套装

1 set
381-18733 4 sets
389-18734 16 sets
385-18736 40 sets