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T7 RNA聚合酶 (low dsRNA)PrimeCap™ T7 RNA Polymerase (low dsRNA)酶试剂盒Takara Clontech

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T7 RNA聚合酶 (low dsRNA)PrimeCap™ T7 RNA Polymerase (low dsRNA)
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara 2560A PrimeCap™ T7 RNA Polymerase (low dsRNA) 20,000 U ￥2,613 T7 RNA聚合酶 (low dsRNA)PrimeCap™ T7 RNA Polymerase (low dsRNA) T7 RNA聚合酶 (low dsRNA)PrimeCap™ T7 RNA Polymerase (low dsRNA) T7 RNA聚合酶 (low dsRNA)PrimeCap™ T7 RNA Polymerase (low dsRNA)
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■ 制品内容（Code No. 2560A）
PrimeCap™ T7 RNA Polymerase(low dsRNA) (200 U/μl) 20,000 U
10X T7 RNA Polymerase Buffer 1 ml
 
■ 制品说明
PrimeCap T7 RNA Polymerase（low dsRNA）是改良的T7 RNA聚合酶*，兼具Cap类似物依赖性RNA合成、低dsRNA生成和耐热性（～52℃）的特点。使用了本酶和Cap类似物的体外转录 （IVT），可大量制备具有高加帽效率的高质量mRNA，同时大幅减少具有免疫原性dsRNA的生成。因此，本制品适用于疫苗等RNA医药领域的研发。
*以T7启动子序列为模板，NTP为底物的双链DNA，通过转录启动子下游区域，在体外合成单链RNA的酶。
 
典型的T7启动子序列和转录起始点（使用 CleanCap Reagent AG（TriLink公司）时的注意事项）
用于制备IVT反应的模板DNA的典型T7启动子序列如下所示。需要根据要合成的RNA序列和用于5′-cap修饰的Cap类似物的特性来设计模板，因此，请根据实验目的准备模板DNA。
 
[使用CleanCap Reagent AG时]
建议转录起点（+1 位置）的 NGG 序列为 AGG
[合成未加帽的RNA或使用ARCA时]
建议转录起点（+1 位置）的 NGG 序列为 GGG
T7 RNA聚合酶 (low dsRNA)PrimeCap™ T7 RNA Polymerase (low dsRNA)
 
■ 保存
－20℃
 
■ 起源
Escherichia coli carrying a plasmid containing the gene for phage T7 RNA polymerase variant.
 
■ 性质
1. 分子量：约99.8 kDa
2. 辅因子：Mg2+
 
■ 活性定义
在 37℃，1 小时内使 1 nmol [3H] GMP 掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位（U)。
 
■ 用途
1. 使用Cap类似物合成带帽的mRNA（共转录加帽）
2. 用于酶法加帽的无帽RNA的合成
※ 与使用Cap类似物时相比，RNA产量减少10%～40%。
 
■ 使用注意
1. 酶不要剧烈搅拌。
2. 当dsDNA模板、试剂、试管或微量移液器吸头被RNase污染时，合成的RNA产量会降低或者出现片段化。在实验过程中应采取预防措施以避免RNase污染，例如戴一次性手套和使用专门用于 RNA实验的试管和微量移液器吸头。
3. 为了合成长度一致的RNA，通常使用线性dsDNA（例如线性化质粒和PCR产物）用于体外转录。我们建议模板DNA末端应为5’-突出或平端，以避免出现非特异性产物。可根据具体情况，使用BspQ I等限制酶使模板DNA线性化。
4. 缓冲液中的亚精胺会与核酸形成复合物并可能产生沉淀，因此模板DNA应在加酶之前即倒数第二步再加入反应体系中。

 
■ 使用例（使用CleanCap Reagent AG合成1.9 kb加帽的mRNA）
T7 RNA聚合酶 (low dsRNA)PrimeCap™ T7 RNA Polymerase (low dsRNA)
 
37℃孵育 1-2 小时。
 
*1：如使用修饰NTP，请等量替换对应的NTP。
*2：CleanCap Reagent AG (TriLink公司：Code. N-7113-1/5/10)
 
 

页面更新：2024-02-28 13:29:41