培养瓶,225cm2,直角角度颈,密封盖,PS(聚苯乙烯)材质,灭菌,袋装
单位 | 包 |
英文名称 | Corning 225cm2 Angled Neck Cell Culture Flask with Plug Seal Cap |
规格 | 5个/包,5包/箱 |
培养瓶,225cm2,直角角度颈,密封盖,PS(聚苯乙烯)材质,灭菌,袋装
单位 | 包 |
英文名称 | Corning 225cm2 Angled Neck Cell Culture Flask with Plug Seal Cap |
规格 | 5个/包,5包/箱 |
14ml圆底试管/摇菌管, PS材质, 印刷刻度, 双凸位盖, 无菌, 独立包装
货号:BS-PST-14-G-S1
规格:1个/包
品牌:biosharp
商品详情:
产品描述:
14ml圆底试管,常用于流式等细胞实验,双位盖设计,既可密封也可透气,满足多种应用需求。
产品特性:
-尺寸:17×100 mm,体积:14ml
-材料为高品质聚苯乙烯(PS)材料,超精密模具及全自动化生产工艺生产
-双凸位盖设计,盖到底为密封,盖到一半为透气
-管身印刷刻度,1.0ml-12.0ml,增量0.25ml
-高透明度,透光性好,观察清晰,使用方便
-管壁均匀,加厚设计,坚固耐用
-伽马射线灭菌,无DNA酶,无RNA酶,纸塑独立包装
规格:1个/包,500包/箱
货号 | BS-PST-14-G-S1 |
规格 | 1个/包 |
品牌 | biosharp |
移液管,,100ML,宽口,PS材质 PW包装,灭菌,独立包装
单位 | 箱 |
英文名称 | Costar Pipette,100ml,Wide Tip,Pw,Ps,S,Ind,10Bag,100/Cs |
规格 | 10个/包,10包/箱 |
384微孔板,白底透,PS材质 NBS表面,非灭菌 无盖
单位 | 箱 |
英文名称 | PLATE,ASSAY,384WL,WCB,LOW FLANGE,NON-BINDING,WO/LID,NS,BK,25 |
规格 | 25个/包,1包/箱 |
5ml圆底试管/流式管, PS材质, 印刷刻度, 双凸位盖, 无菌, 独立纸塑包装
货号:BS-PST-5-G-S1
规格:1个/包
品牌:biosharp
商品详情:
产品描述:
5ml圆底试管,常用于流式等细胞实验,双位盖设计,既可密封也可透气,满足多种应用需求。
产品特性:
-尺寸:12×75 mm,体积:5ml
-材料为高品质聚苯乙烯(PS)材料,超精密模具及全自动化生产工艺生产
-双凸位盖设计,盖到底为密封,盖到一半为透气
-管身印刷刻度,1.0ml-4.0ml,增量0.1ml
-高透明度,透光性好,观察清晰,使用方便
-管壁均匀,加厚设计,坚固耐用
-伽马射线灭菌,无DNA酶,无RNA酶,纸塑独立包装
规格:1个/包,500包/箱
货号 | BS-PST-5-G-S1 |
规格 | 1个/包 |
品牌 | biosharp |
培养瓶 150cm2 直角斜颈(正方斜口) 聚酯盖 PS(聚苯乙烯)材质 灭菌 袋装
单位 | 箱 |
英文名称 | Corning 150cm2 Rectangular Canted Neck Cell Culture Flask with Phenolic-Style Cap |
规格 | 5个/包,10包/箱 |
产品编号:
市场价:¥0.00元
会员价:¥0.00元
品牌:中文
生产厂家:ILMVAC伊尔姆
型号
|
电压
|
最终压力 mbar
|
抽吸速度
|
重量 (kg)
|
价格
|
编号
|
|
m3/h
|
l/min
|
||||||
PS 650 |
3×400/690V 50HZ |
<0.5 |
630.0 |
10500.0 |
525 |
0 |
321028 |
旋片泵是一种传统的真空泵,伊尔姆公司的设计和制造体现出每个细节的成熟,使旋片泵的功能和使用趋向完美。
伊尔姆公司旋片泵的主要优点是:
·结构紧凑,密封性能好,不漏油
·流速高,短时间内达到稳定的极限真空
·耐水蒸气能力强
·抗化学腐蚀能力相对同类泵较强
·能持久稳定地工作,维修率低
·油雾少,有利于优化实验室环境
·条形油位显示窗,设计更加合理
·关机后机油不会回流,真空密封性能强
·噪音低,体积小,便于携带
旋片泵的主要应用范围:
·真空(冷冻)干燥
·真空蒸馏
·真空抽滤
·作为高真空泵的前泵
·真空探伤
·真空镀膜
·与其它仪器设备配套
伊尔姆公司旋片泵分为P或PK系列的二级旋片泵,以及P系列的单级旋片泵和PS系列的单级旋片泵。
PS系列单级旋片泵:
·极限压力为0.5mbar或1mbar。流速为18.0 m3/h – 630.0 m3/h。
·配有气压载阀。
型号
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电压
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最终压力 mbar
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抽吸速度
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重量 (kg)
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价格
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编号
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|
m3/h
|
l/min
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||||||
PS 650 |
3×400/690V 50HZ |
<0.5 |
630.0 |
10500.0 |
525 |
0 |
321028 |
PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒 抗小鼠IgG试剂盒-Wako富士胶片和光
供货周期 | 一个月 | 应用领域 | 生物产业 |
---|
PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒 抗小鼠IgG
◆产品概要
本试剂盒是可以定性分析细胞培养上清和体液样品中提取的细胞外囊泡,以及定量分析细胞培养上清样品中的细胞外囊泡的ELISA试剂盒。让细胞外囊泡表面的磷脂酰丝氨酸(PS)特异性结合的蛋白在固定化的板上与细胞外囊泡反应并固定后,用任意细胞外囊泡表面标记蛋白的小鼠单抗作为检测一抗,试剂盒中的HRP标记抗小鼠IgG抗体为二抗。
PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒 抗小鼠IgG
◆产品概要
本试剂盒是可以定性分析细胞培养上清和体液样品中提取的细胞外囊泡,以及定量分析细胞培养上清样品中的细胞外囊泡的ELISA试剂盒。让细胞外囊泡表面的磷脂酰丝氨酸(PS)特异性结合的蛋白在固定化的板上与细胞外囊泡反应并固定后,用任意细胞外囊泡表面标记蛋白的小鼠单抗作为检测一抗,试剂盒中的HRP标记抗小鼠IgG抗体为二抗,可高灵敏度检测表面具有任意标记蛋白的细胞外囊泡。
◆特点
采用PS结合分子Tim4包被板
● 通过磷脂酰丝氨酸(PS)结合分子进行捕获。※1
● 可检测出0.1 μL左右培养上清液的细胞外囊泡。
● 可用纯化细胞外囊泡标准品※2 定量检测。
● 高灵敏度检测(检测灵敏度可达WB※3 的50~1,000倍)。
高灵敏度定性·定量检测培养上清中的细胞外囊泡
※1 本方法比起使用抗体包被板的ELISA法,可以更好地定性·定量分析细胞外囊泡。
※2 请使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS纯化的细胞外囊泡标准品。
※3 WB法:免疫印迹实验
使用优化的试剂组成的试剂盒
● 优化对照用的一抗※4
● 优化检测用的二抗※5
● 采用显色法
操作简便,实验重复性高
※4 配套抗人CD63抗体。检测其他表面标记蛋白可使用任意小鼠单抗。
※5 配套抗小鼠IgG抗体-HRP标记。
◆试剂盒组成
试剂盒组成(96次) |
包装 |
捕获外泌体96孔板 |
1个 (8 well×12 strips) |
反应/洗涤缓冲液(10×) |
50 mL×2瓶 |
外泌体结合增强子(100×) |
10 mL×1瓶 |
对照一抗Anti-CD63(100×) |
120 μL×1瓶 |
二抗HRP缀合抗小鼠IgG(100×) |
120 μL×1瓶 |
TMB溶液 |
12 mL×1瓶 |
终止液 |
12 mL×1瓶 |
封板膜 |
4个 |
说明书 |
1本 |
◆应用实例
从各种细胞培养上清提取细胞外囊泡的定性分析
将1 ng从各种细胞培养上清中提取的细胞外囊泡添加至孔中,使用能识别表面标记蛋白CD9、CD63、CD81的一抗通过本试剂盒对各表面标记量进行定性比较。
另外,作为比较参考数据,将150 ng从各细胞培养上清提取的细胞外囊泡进行电泳,使用能识别表面标记的CD9、CD63、CD81的一抗对各表面标记蛋白量以Western blotting进行定性分析。
提取外泌体(1 ng/well)的定性比较数据 参考比较数据
在ELISA系统和WB分析之间,标记蛋白的表达模式具有相关性。
参考数据:各种细胞的外泌体标记蛋白表达分析
分别使用1 ng各种细胞的培养上清液来源纯化外泌体(使用MagCapture来源外泌体提取试剂盒 PS),外泌体标记蛋白CD9、CD63、CD81对应的抗体,进行表达分析。
检测抗体
<ELISA>
抗CD9小鼠单抗(M-L13)
抗CD63小鼠单抗(H5C6)
<WB>
抗CD9兔多抗
抗CD63小鼠单抗(8A12)
抗CD81小鼠单抗(1D6)
细胞株不同,表达量*不同!
有的细胞株中可能存在对特定标记蛋白的表达较少的外泌体。
从正常人血清中提取的细胞外囊泡的定性分析
从正常人血清的6个样品分别提取细胞外囊泡,通过BCA法算出细胞外囊泡膜上的蛋白浓度。分别添加40、20、10 ng的细胞外囊泡到孔中,用可识别表面标记CD63的对照组检测一抗(试剂盒配套)对检测的OD值进行定性比较。
提取外泌体(1 ng/well)的定性比较数据
即使是从体液样品中纯化的细胞外囊泡也具有良好的线性
从细胞培养上清中提取的细胞外囊泡的检测灵敏度的参考数据
从COLO201细胞培养上清中提取细胞外囊泡,比较本试剂盒和免疫印迹的检测灵敏度。
Western blot和ELISA的检测灵敏度比较
图(a),(b)为使用各种抗CD63抗体(其他公司产品,Wako产品: 012-27063)进行免疫印迹的检测灵敏度数据
样品:COLO201细胞培养上清提取细胞外囊泡(使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS提取)
★:各抗体中免疫印迹的检测上限。
图(c)Exosome ELISA Kit检测上限数据
使用本试剂盒梯度稀释COLO201细胞来源的纯化细胞外囊泡(使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS)后的样品以及仅有缓冲液的空白值检测并制备COLO201标准曲线。利用此标准曲线可算出COLO201来源纯化样品的低检测灵敏度。(按照各浓度点n=6,空白点n=12检测)
相比免疫印迹,可以更高灵敏度地检测标记蛋白。
从细胞培养上清中提取细胞外囊泡的稀释线性(Linearity)参考数据
用从COLOC201细胞培养上清中提取的细胞外囊泡作为标准品制作标准曲线,评价COLO201细胞培养上清样品的5个稀释度(1:100-1:1600)的线性。
COLO201细胞培养上清
COLO201细胞培养上清 |
|||||
细胞伤情量 (μL) |
稀释 |
测定值 (ng/mL) |
期望值 (ng/mL) |
预期百分比 |
|
比例 |
稀释因子(×) |
||||
0.0625 |
1:1600 |
0.000625 |
0.89 |
0.91 |
98.4 |
0.125 |
1:800 |
0.00125 |
1.82 |
1.72 |
105.6 |
0.25 |
1:400 |
0.0025 |
3.44 |
3.52 |
97.8 |
0.5 |
1:200 |
0.005 |
7.04 |
6.78 |
103.9 |
1 |
1:100 |
0.01 |
13.6 |
— |
— |
标准品:COLO201细胞来源外泌体
(使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS纯化)
检测样品:COLO201细胞培养上清
一抗:试剂盒配套抗CD63抗体
可以确认到良好的稀释线性以及可检测出0.1 μL细胞外囊泡。
检测不同接种细胞数和不同培养时间的培养基中的细胞外囊泡
在T75细胞培养瓶中接种1×107、2×107、3×107的COLO201细胞,培养72 h。每24 h回收一部分的培养上清样品,用PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒(抗小鼠IgG POD)和试剂盒配套的Control Primary Antibody Anti CD63 (100×) 进行CD63的吸光度检测。
准备4 μL的细胞培养上清,用添加了Exosome Binding Enhancer的反应液/清洗液(1×)稀释至100 μL。
● 检测样品:COLO201细胞培养上清(25倍稀释)
● 接种细胞数:1×107、2×107、3×107个细胞/瓶
● 培养时间:24 h、48 h、72 h
● 一抗:抗CD63抗体
只需使用4 μL的细胞培养上清液,就可直接检测细胞外囊泡量,在讨论新型的细胞株的培养条件时,省去了讨论条件的时间。
可以简单方便地讨论如何分泌多的细胞外囊泡的条件。
添加药物后引起细胞外囊泡数量的变化
在T225培养瓶接种K562细胞,以无血清培养基培养72 h。之后更换添加终浓度为10 μmol/L的莫能菌素钠和不含莫能菌素钠的无血清培养基,再培养24 h。培养后回收培养上清样品,用PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒(抗小鼠IgG POD)和试剂盒配套Control Primary Antibody Anti CD63(100×),检测CD63的吸光度。
用添加了Exosome Binding Enhancer的反应液/清洗液(1×)稀释回收后的细胞培养上清,分别作为10倍稀释和100倍稀释的细胞培养上清样品。
● 检测样品:K562细胞培养上清(更换含莫能菌素钠(产品编号:ALX-380-026-G001)的培养基和对照培养基后培养24 h)
● 一抗:抗CD63抗体
无需提取,少量培养基即可检测。
可检测培养基中外泌体量随时间的变化,由于可数值化外泌体变化量,因此相比WB法更容易进行比较。
使用COLO201细胞培养上清来源和人血清来源纯化外泌体比较检测灵敏度
制备下列①~⑥的样品,比较用PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒、A公司ELISA试剂盒、A公司ELISA试剂盒(高灵敏型)检测外泌体标记蛋白CD63时的灵敏度。
使用样品内容
① A公司ELISA试剂盒配套标准品
② A公司ELISA试剂盒(高灵敏型)配套标准品
③ 用MagCapture™ 外泌体提取试剂盒PS提取COLO201细胞培养上清来源外泌体
④ 用聚合物沉淀法提取COLO201细胞培养上清来源外泌体
⑤ MagCapture™ 外泌体提取试剂盒PS提取人血清来源外泌体
⑥ 聚合物沉淀法提取人血清来源外泌体
① |
② |
③ |
④ |
⑤ |
⑥ |
|
x1 |
1/16 |
1/1000 |
40 ng/mL |
160 ng/mL |
800 ng/mL |
2000 µg/mL |
x0.5 |
1/32 |
1/2000 |
20 ng/mL |
80 ng/mL |
400 ng/mL |
1000 µg/mL |
x0.25 |
1/64 |
1/4000 |
10 ng/mL |
40 ng/mL |
200 ng/mL |
500 µg/mL |
x0.125 |
1/128 |
1/8000 |
5 ng/mL |
20 ng/mL |
100 ng/mL |
250 µg/mL |
x0.0625 |
1/256 |
1/16000 |
2.5 ng/mL |
10 ng/mL |
50 ng/mL |
125 µg/mL |
PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒相比A公司ELISA试剂盒和A公司ELISA试剂盒(高灵敏型),可更灵敏地检测到CD63。另外,A公司ELISA试剂盒和A公司ELISA试剂盒(高灵敏型)对各自试剂盒配套标准品的反应敏感,但对PS提取外泌体的反应性弱。
由此证明,PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒相比公司ELISA试剂盒和A公司ELISA试剂盒(高灵敏型),可以更高特异性且高灵敏性地检测外泌体表面的CD63。
◆产品列表
产品编号 |
产品名称 |
包装 |
297-79201 |
PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒(抗小鼠IgG POD) |
96 tests |
◆相关产品
产品编号 |
产品名称 |
包装 |
299-77603 |
MagCapture™ 外泌体提取试剂盒PS |
2 tests |
293-77601 |
10 tests |
PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒 抗小鼠IgG
PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒 抗小鼠IgG试剂盒-wako富士胶片和光
供货周期 | 一个月 | 应用领域 | 生物产业 |
---|
PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒 抗小鼠IgG
◆产品概要
本试剂盒是可以定性分析细胞培养上清和体液样品中提取的细胞外囊泡,以及定量分析细胞培养上清样品中的细胞外囊泡的ELISA试剂盒。让细胞外囊泡表面的磷脂酰丝氨酸(PS)特异性结合的蛋白在固定化的板上与细胞外囊泡反应并固定后,用任意细胞外囊泡表面标记蛋白的小鼠单抗作为检测一抗,试剂盒中的HRP标记抗小鼠IgG抗体为二抗。
PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒 抗小鼠IgG
◆产品概要
本试剂盒是可以定性分析细胞培养上清和体液样品中提取的细胞外囊泡,以及定量分析细胞培养上清样品中的细胞外囊泡的ELISA试剂盒。让细胞外囊泡表面的磷脂酰丝氨酸(PS)特异性结合的蛋白在固定化的板上与细胞外囊泡反应并固定后,用任意细胞外囊泡表面标记蛋白的小鼠单抗作为检测一抗,试剂盒中的HRP标记抗小鼠IgG抗体为二抗,可高灵敏度检测表面具有任意标记蛋白的细胞外囊泡。
◆特点
采用PS结合分子Tim4包被板
● 通过磷脂酰丝氨酸(PS)结合分子进行捕获。※1
● 可检测出0.1 μL左右培养上清液的细胞外囊泡。
● 可用纯化细胞外囊泡标准品※2 定量检测。
● 高灵敏度检测(检测灵敏度可达WB※3 的50~1,000倍)。
高灵敏度定性·定量检测培养上清中的细胞外囊泡
※1 本方法比起使用抗体包被板的ELISA法,可以更好地定性·定量分析细胞外囊泡。
※2 请使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS纯化的细胞外囊泡标准品。
※3 WB法:免疫印迹实验
使用优化的试剂组成的试剂盒
● 优化对照用的一抗※4
● 优化检测用的二抗※5
● 采用显色法
操作简便,实验重复性高
※4 配套抗人CD63抗体。检测其他表面标记蛋白可使用任意小鼠单抗。
※5 配套抗小鼠IgG抗体-HRP标记。
◆试剂盒组成
试剂盒组成(96次) |
包装 |
捕获外泌体96孔板 |
1个 (8 well×12 strips) |
反应/洗涤缓冲液(10×) |
50 mL×2瓶 |
外泌体结合增强子(100×) |
10 mL×1瓶 |
对照一抗Anti-CD63(100×) |
120 μL×1瓶 |
二抗HRP缀合抗小鼠IgG(100×) |
120 μL×1瓶 |
TMB溶液 |
12 mL×1瓶 |
终止液 |
12 mL×1瓶 |
封板膜 |
4个 |
说明书 |
1本 |
◆应用实例
从各种细胞培养上清提取细胞外囊泡的定性分析
将1 ng从各种细胞培养上清中提取的细胞外囊泡添加至孔中,使用能识别表面标记蛋白CD9、CD63、CD81的一抗通过本试剂盒对各表面标记量进行定性比较。
另外,作为比较参考数据,将150 ng从各细胞培养上清提取的细胞外囊泡进行电泳,使用能识别表面标记的CD9、CD63、CD81的一抗对各表面标记蛋白量以Western blotting进行定性分析。
提取外泌体(1 ng/well)的定性比较数据 参考比较数据
在ELISA系统和WB分析之间,标记蛋白的表达模式具有相关性。
参考数据:各种细胞的外泌体标记蛋白表达分析
分别使用1 ng各种细胞的培养上清液来源纯化外泌体(使用MagCapture来源外泌体提取试剂盒 PS),外泌体标记蛋白CD9、CD63、CD81对应的抗体,进行表达分析。
检测抗体
<ELISA>
抗CD9小鼠单抗(M-L13)
抗CD63小鼠单抗(H5C6)
<WB>
抗CD9兔多抗
抗CD63小鼠单抗(8A12)
抗CD81小鼠单抗(1D6)
细胞株不同,表达量*不同!
有的细胞株中可能存在对特定标记蛋白的表达较少的外泌体。
从正常人血清中提取的细胞外囊泡的定性分析
从正常人血清的6个样品分别提取细胞外囊泡,通过BCA法算出细胞外囊泡膜上的蛋白浓度。分别添加40、20、10 ng的细胞外囊泡到孔中,用可识别表面标记CD63的对照组检测一抗(试剂盒配套)对检测的OD值进行定性比较。
提取外泌体(1 ng/well)的定性比较数据
即使是从体液样品中纯化的细胞外囊泡也具有良好的线性
从细胞培养上清中提取的细胞外囊泡的检测灵敏度的参考数据
从COLO201细胞培养上清中提取细胞外囊泡,比较本试剂盒和免疫印迹的检测灵敏度。
Western blot和ELISA的检测灵敏度比较
图(a),(b)为使用各种抗CD63抗体(其他公司产品,Wako产品: 012-27063)进行免疫印迹的检测灵敏度数据
样品:COLO201细胞培养上清提取细胞外囊泡(使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS提取)
★:各抗体中免疫印迹的检测上限。
图(c)Exosome ELISA Kit检测上限数据
使用本试剂盒梯度稀释COLO201细胞来源的纯化细胞外囊泡(使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS)后的样品以及仅有缓冲液的空白值检测并制备COLO201标准曲线。利用此标准曲线可算出COLO201来源纯化样品的低检测灵敏度。(按照各浓度点n=6,空白点n=12检测)
相比免疫印迹,可以更高灵敏度地检测标记蛋白。
从细胞培养上清中提取细胞外囊泡的稀释线性(Linearity)参考数据
用从COLOC201细胞培养上清中提取的细胞外囊泡作为标准品制作标准曲线,评价COLO201细胞培养上清样品的5个稀释度(1:100-1:1600)的线性。
COLO201细胞培养上清
COLO201细胞培养上清 |
|||||
细胞伤情量 (μL) |
稀释 |
测定值 (ng/mL) |
期望值 (ng/mL) |
预期百分比 |
|
比例 |
稀释因子(×) |
||||
0.0625 |
1:1600 |
0.000625 |
0.89 |
0.91 |
98.4 |
0.125 |
1:800 |
0.00125 |
1.82 |
1.72 |
105.6 |
0.25 |
1:400 |
0.0025 |
3.44 |
3.52 |
97.8 |
0.5 |
1:200 |
0.005 |
7.04 |
6.78 |
103.9 |
1 |
1:100 |
0.01 |
13.6 |
— |
— |
标准品:COLO201细胞来源外泌体
(使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS纯化)
检测样品:COLO201细胞培养上清
一抗:试剂盒配套抗CD63抗体
可以确认到良好的稀释线性以及可检测出0.1 μL细胞外囊泡。
检测不同接种细胞数和不同培养时间的培养基中的细胞外囊泡
在T75细胞培养瓶中接种1×107、2×107、3×107的COLO201细胞,培养72 h。每24 h回收一部分的培养上清样品,用PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒(抗小鼠IgG POD)和试剂盒配套的Control Primary Antibody Anti CD63 (100×) 进行CD63的吸光度检测。
准备4 μL的细胞培养上清,用添加了Exosome Binding Enhancer的反应液/清洗液(1×)稀释至100 μL。
● 检测样品:COLO201细胞培养上清(25倍稀释)
● 接种细胞数:1×107、2×107、3×107个细胞/瓶
● 培养时间:24 h、48 h、72 h
● 一抗:抗CD63抗体
只需使用4 μL的细胞培养上清液,就可直接检测细胞外囊泡量,在讨论新型的细胞株的培养条件时,省去了讨论条件的时间。
可以简单方便地讨论如何分泌多的细胞外囊泡的条件。
添加药物后引起细胞外囊泡数量的变化
在T225培养瓶接种K562细胞,以无血清培养基培养72 h。之后更换添加终浓度为10 μmol/L的莫能菌素钠和不含莫能菌素钠的无血清培养基,再培养24 h。培养后回收培养上清样品,用PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒(抗小鼠IgG POD)和试剂盒配套Control Primary Antibody Anti CD63(100×),检测CD63的吸光度。
用添加了Exosome Binding Enhancer的反应液/清洗液(1×)稀释回收后的细胞培养上清,分别作为10倍稀释和100倍稀释的细胞培养上清样品。
● 检测样品:K562细胞培养上清(更换含莫能菌素钠(产品编号:ALX-380-026-G001)的培养基和对照培养基后培养24 h)
● 一抗:抗CD63抗体
无需提取,少量培养基即可检测。
可检测培养基中外泌体量随时间的变化,由于可数值化外泌体变化量,因此相比WB法更容易进行比较。
使用COLO201细胞培养上清来源和人血清来源纯化外泌体比较检测灵敏度
制备下列①~⑥的样品,比较用PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒、A公司ELISA试剂盒、A公司ELISA试剂盒(高灵敏型)检测外泌体标记蛋白CD63时的灵敏度。
使用样品内容
① A公司ELISA试剂盒配套标准品
② A公司ELISA试剂盒(高灵敏型)配套标准品
③ 用MagCapture™ 外泌体提取试剂盒PS提取COLO201细胞培养上清来源外泌体
④ 用聚合物沉淀法提取COLO201细胞培养上清来源外泌体
⑤ MagCapture™ 外泌体提取试剂盒PS提取人血清来源外泌体
⑥ 聚合物沉淀法提取人血清来源外泌体
① |
② |
③ |
④ |
⑤ |
⑥ |
|
x1 |
1/16 |
1/1000 |
40 ng/mL |
160 ng/mL |
800 ng/mL |
2000 µg/mL |
x0.5 |
1/32 |
1/2000 |
20 ng/mL |
80 ng/mL |
400 ng/mL |
1000 µg/mL |
x0.25 |
1/64 |
1/4000 |
10 ng/mL |
40 ng/mL |
200 ng/mL |
500 µg/mL |
x0.125 |
1/128 |
1/8000 |
5 ng/mL |
20 ng/mL |
100 ng/mL |
250 µg/mL |
x0.0625 |
1/256 |
1/16000 |
2.5 ng/mL |
10 ng/mL |
50 ng/mL |
125 µg/mL |
PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒相比A公司ELISA试剂盒和A公司ELISA试剂盒(高灵敏型),可更灵敏地检测到CD63。另外,A公司ELISA试剂盒和A公司ELISA试剂盒(高灵敏型)对各自试剂盒配套标准品的反应敏感,但对PS提取外泌体的反应性弱。
由此证明,PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒相比公司ELISA试剂盒和A公司ELISA试剂盒(高灵敏型),可以更高特异性且高灵敏性地检测外泌体表面的CD63。
◆产品列表
产品编号 |
产品名称 |
包装 |
297-79201 |
PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒(抗小鼠IgG POD) |
96 tests |
◆相关产品
产品编号 |
产品名称 |
包装 |
299-77603 |
MagCapture™ 外泌体提取试剂盒PS |
2 tests |
293-77601 |
10 tests |
PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒 抗小鼠IgG
PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒分析用试剂-Wako富士胶片和光
供货周期 | 一个月以上 | 应用领域 | 生物产业 |
---|
PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒(链霉亲和素HRP)
本试剂盒是可用于细胞培养上清和体液样本中细胞外囊泡的定性分析以及定量分析的酶联免疫试剂。将能与细胞外囊泡表面的磷脂酰丝氨酸(PS)特异性结合的蛋白质预包被到板上,细胞外囊泡与其反应被固定后,以目的细胞外囊泡表面标记蛋白的生物素标记抗体作为检测一抗,以试剂盒中的HRP标记链霉亲和素为二抗,可高灵敏度检测表面具有靶标记蛋白的细胞外囊泡
体液样本中细胞外囊泡的分析工具
PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒(链霉亲和素HRP)
本试剂盒是可用于细胞培养上清和体液样本中细胞外囊泡的定性分析以及定量分析的酶联免疫试剂。将能与细胞外囊泡表面的磷脂酰丝氨酸(PS)特异性结合的蛋白质预包被到板上,细胞外囊泡与其反应被固定后,以目的细胞外囊泡表面标记蛋白的生物素标记抗体作为检测一抗,以试剂盒中的HRP标记链霉亲和素为二抗,可高灵敏度检测表面具有靶标记蛋白的细胞外囊泡。同时,可用不同物种的生物素标记抗体作为检测一抗。此外,二抗采用HRP标记链霉亲和素,与血液成分的非特异性结合低,可高灵敏度检测血液样本中的细胞外囊泡。
◆特点
● 高灵敏度和定量检测
可以直接检测样本中的细胞外囊泡(无需分离)
可以从2.5微升左右的血液样本中检测细胞外囊泡(节约样本)
灵敏度是WB法的50~1000倍(检测微量信号)
● 应用广泛
可定性或定量检测培养上清和血液样本中的细胞外囊泡
测定EV-depleted FBS中残留的细胞外囊泡数量
使用凝集素分析外泌体的糖链
● 通用的生物素标记检测方法
一抗可灵活更换成不同动物来源的抗体或凝集素等的生物素标记一抗
● 操作简单以及再现性高
优化细胞外囊泡检测用的试剂盒和试剂
◆检测原理
Wako试剂盒PS Capture™ 外泌体ELISA 试剂盒(抗小鼠IgG POD)(图右)中,一抗使用小鼠抗体,二抗使用抗小鼠IgG抗体,但是本试剂盒(图左),使用生物素标记抗体作为一抗,二抗使用HRP标记的链霉亲和素。因此,可以不受限于抗体种类分析细胞外囊泡。
◆试剂盒组成
试剂盒组成(96次用) |
容量 |
Exosome Capture 96 Well Plate |
1块(8 well×12 strips) |
Reaction Buffer |
80毫升×1支 |
Washing Buffer (10×) |
100毫升×1支 |
Exosome Binding Enhancer (100×) |
10毫升×1支 |
Control Biotinylated Antibody Anti-CD63 (100×) |
120微升×1支 |
HRP-conjugated Streptavidin (100×) |
240微升×1支 |
TMB Solution |
12毫升×1支 |
Stop Solution |
12毫升×1支 |
Plate Seal |
4块 |
使用说明书 |
1份 |
◆对应样本
样本 |
定性分析 |
定量分析 |
细胞培养上清液 |
可以实现○ |
可以实现○ |
体液样本 |
可以实现○ |
可以实现○ |
◆数据
■ 血液样本以及培养上清液样本的稀释线性
用从COLO201细胞培养上清液中纯化的细胞外囊泡制成的标准曲线为基准,检测①人血清稀释样本,②人肝素血浆稀释样本,③人EDTA血浆稀释样本(各2个样本,稀释4次)以及④COLO201细胞培养上清液稀释4次的样本中的外泌体浓度(检测CD63),评价各个样本的稀释线性。
结果表明,在CD63检测中,血清和肝素血浆样本在双倍稀释或更高稀释度下可获得良好的线性。EDTA血浆样本在5倍以上稀释度下可获得良好的线性。
■ PS亲和法和抗体法的比较(捕获EVs的能力)
将预处理※1的各个细胞培养上清液分别添加至已固相化的抗CD抗体(CD9, CD63, CD81)或Tim4微孔板的各个孔中进行反应。然后,用各个生物素标记抗CD抗体(CD9, CD63, CD81)检测结合的外泌体。
※1 预处理条件: 10,000×g, 30分钟
PS亲和法与抗体法相比,更高效率地捕抓到了各种细胞株来源的外泌体
■ 测定市面上“无外泌体血清”中残留的外泌体数量
用生物素标记抗CD9抗体※4检测未处理的FBS,市场上售卖的“无外泌体血清”(EV-depleted FBS)以及超离处理的FBS (UC-treated FBS)※3 中残存的外泌体。
※3 超离条件: 160,000×g, 16小时
※4 用Biotin Labeling Kit-SH 标记抗CD9抗体。
Capture: Tim4 / Detection: 生物素标记抗CD9抗体
使用PS亲和法的ELISA系统,可以简单便利地检测到外泌体残留量。
■ 应用于糖链分析:rBC2LCN凝集素和Tim4的双抗夹心ELISA
用生物素标记抗CD63抗体和生物素标记rBC2LCN凝集素※6检测预处理完成※5的5倍稀释iPS细胞培养上清液中的外泌体。
※5 预处理条件: 10,000×g, 30分钟
※6用 EZ-Link™ Sulfo-NHS-LC-LC-Biotin标记rBC2LCN。
捕获用抗体: Tim4 / 检测用抗体: 各生物素标记体
通过与各种凝集素相组合,可应用于外泌体表面上的糖链分析。
■ 检测人正常血液样本中外泌体标记物的相对浓度
准备人血清(10个样本),EDTA血浆(9个样本)和肝素血浆(9个样本)作为正常血液样本,检测外泌体标记物CD63和CD9,以及被认为是癌细胞外泌体特异性标记物的EpCAM。
结果显示,在各个血液样本中均检测出了外泌体标记物CD63和CD9,但只有在癌细胞外泌体中才检测出极微量的表面抗原EpCAM。
■ COLO201来源纯化外泌体的添加回收测试
准备混合血清,EDTA血浆,肝素血浆的2倍稀释液,并添加从COLO 201细胞培养上清中提取的3种浓度的COLO201来源外泌体,以EpCAM检测来确认回收率。
在EpCAM检测中,添加回收率在100%±10%的范围内,显示出良好的回收性能※。
※考虑到【血液检体的稀释线性】,EDTA血浆样本建议稀释5倍以上进行检测。
◆产品列表
产品编号 |
产品名称 |
规格 |
包装 |
298-80601 |
PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒(链霉亲和素HRP) |
基因研究用 |
96 次 |
◆抗外泌体标记抗体系列
产品编号 |
产品名称 |
交叉反应 |
包装 |
018-27761 |
抗CD9单克隆抗体(1K) |
人,牛 |
20微升 |
014-27763 |
100微升 |
||
016-27061 |
抗CD63,单克隆抗体(3-13) |
人 |
20微升 |
012-27063 |
100微升 |
||
015-27771 |
抗CD81单克隆抗体(17B1) |
人,牛 |
20微升 |
011-27773 |
100微升 |
||
产品编号 |
产品名称 |
偶联基团 |
包装 |
018-27641 |
抗CD63,单克隆抗体(3-13),荧光素结合 |
绿色荧光素 |
25次用 |
014-27643 |
100次用 |
||
011-27751 |
抗CD63单克隆抗体(3-13),红色荧光染料(635)偶联 |
红色荧光素 |
25次用 |
017-27753 |
100次用 |
||
013-27711 |
抗CD63单克隆抗体(3-13),生物素偶联 |
生物素 |
20微升 |
019-27713 |
100微升 |
◆相关产品
产品编号 |
产品名称 |
规格 |
包装 |
299-77603 |
MagCapture™ 外泌体提取试剂盒PS |
基因研究用 |
2次 |
293-77601 |
10次 |
||
297-79201 |
PS Capture™ 外泌体ELISA 试剂盒(抗小鼠IgG POD) |
基因研究用 |
96次 |
297-79701 |
PS Capture™外泌体流式试剂盒 |
基因研究用 |
300次 |
016-27061 |
抗CD63,单克隆抗体(3-13) |
免疫化学用 |
20微升 |
012-27063 |
100微升 |