TaqMan One Step RT-qPCR Kit
| 别名 | Taqman一步法荧光定量PCR试剂盒 一步法实时荧光定量试剂盒 |
| 英文名称 | TaqMan One Step RT-qPCR Kit |
| 储存条件 | -20℃ |
| 单位 | 支 |
| 规格 | 50T 200T |
本产品是采用探针法（TaqMan，Molecular Beacon等）进行一步法Real-Time RTqPCR的专用试剂盒。使用本产品进行RealTime RT-qPCR反应时，逆转录和定量PCR在同一反应体系中进行，反应过程中无需添加试剂，无需打开管盖，避免了污染的同时提高了实验效率。本产品的检测灵敏度高，荧光信号强，信噪比高，非常适合于RNA病毒等微量RNA的检测。其所包含的特殊缓冲系统能使逆转录酶与DNA聚合酶同时发挥最大功效，提高反应效率。使用本产品可以得到更宽广的线性范围，对目的基因定量更准确，重复性好，可信度高。
上海金畔生物科技有限公司代理Takara酶试剂盒全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。
| TaKaRa qPCR Norovirus (GI/GII) Typing Kit | ||||||
| 品牌 | Code No. | 产品名称 | 包装量 | 价格（元） | 说明书 | 数量 |
| Takara | RR250A | TaKaRa qPCR Norovirus (GI/GII) Typing Kit(库存销售完毕即终卖) | 50 Rxns | ￥2,776 |  |
  |
| Takara | RR250B (A × 5) | TaKaRa qPCR Norovirus (GI/GII) Typing Kit(库存销售完毕即终卖) | 50 Rxns × 5 | ￥13,463 | |
|
| ■ 制品内容 (Code No.: RR250A : RT反应50次量、GⅠ反应50次量*1、GⅡ反应50次量*1) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||
| ■ 制品说明 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 本制品是使用GI 和GII 检测用引物与探针进行Real Time PCR 检测诺如病毒的试剂盒。制品中使用的引物和探针碱基序列与日本厚生劳动省 医药食品局 食品安全部 监视安全科下达的通知[有关诺如病毒检测方法]（食安监发第1105001 号)（最终修订：2013 年10 月22 日食安监发1022 第1 号)（以下简称公定法）中记载的碱基序列相同。 利用荧光物质的Real Time PCR 检测方法因其简便性、快速性、高特异性，近年来用于食品中包括诺如病毒等各种病原体的检测。 制品中使用的TaKaRa Ex Taq HS是含抗Taq抗体的Hot Strat 型DNA 聚合酶，与适宜Buffer组合使用，可以在短时间内进行高效扩增、高灵敏度的检出，并能有效防止在热循环前由引物错配或引物二聚体产生的非特异性扩增。本制品适用于反应时间短的快速PCR，在宽广的动态范围内可准确对检测样品基因进行检出和定量，同时还可以进行重复性好、可信度高的Real Time PCR 解析。 |
||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||
页面更新：2021-10-28 13:41:11
上海金畔生物科技有限公司代理Takara酶试剂盒全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。
| TaKaRa qPCR Salmonella Detection Kit China Standard | ||||||
| 品牌 | Code No. | 产品名称 | 包装量 | 价格（元） | 说明书 | 数量 |
| Takara | RR264 | TaKaRa qPCR Salmonella Detection Kit China Standard | 40 Rxns | ￥1,597 | |
|
| ■ 制品内容 (25 μl反应×40次量) | ||||||||||||||||||||||
|
||||||||||||||||||||||
| 【各种引物序列】 | ||||||||||||||||||||||
|
||||||||||||||||||||||
| 序列参考《SN/T 1059.7-2010 进出口食品中沙门氏菌检测方法 实时荧光PCR法》。 | ||||||||||||||||||||||
| ■ 制品说明 | ||||||||||||||||||||||
| 沙门氏菌(Salmonella) 是重要的肠道致病菌，这一类细菌在自然界中分布很广，其中有2,500多种被确认为血清型。近年来由于Salmonella Enteritidis引起的食物中毒急剧增加。本试剂盒是根据中华人民共和国出入境检验检疫行业标准《SN/T 1059.7-2010 进出口食品中沙门氏菌检测方法 实时荧光PCR法》开发的用于定性检测沙门氏菌的Real Time PCR试剂盒。试剂盒中采用一种 2X浓度的Premix Type试剂，进行实验时，PCR反应液的配制十分方便简单。制品中的DNA聚合酶使用了改良后的Hot Start法用 DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq HS，与Takara精心研制的Real Time PCR用Buffer组合使用，可以有效抑制非特异性的PCR扩增，大大提高PCR的扩增效率，能进行高灵敏度的Real Time PCR扩增反应。本检测无需电泳，简单快速，灵敏度高、特异性强。 | ||||||||||||||||||||||
|
||||||||||||||||||||||
| ■ 注意事项 | ||||||||||||||||||||||
| 1. Real Time PCR扩增仪的使用请按照仪器说明书进行。 |
||||||||||||||||||||||
| 2. 判断为阳性的样品，要用微生物学方法进行再确认，参照SN0170。 | ||||||||||||||||||||||
| 3. PCR反应是灵敏度非常高的反应。为防止污染，建议从反应液的配制到检测的实验过程中，设定以下3个实验区域，并进行物理性隔离。 | ||||||||||||||||||||||
| 区域1：反应液的配制及分装。此时不要开闭装有扩增产物或检测样品的Tube管。 | ||||||||||||||||||||||
| 区域2：检测样品的制备。此时不要开闭装有扩增产物或检测样品的Tube管。 | ||||||||||||||||||||||
| 区域3：向反应液中添加检测样品，进行反应、检出。 | ||||||||||||||||||||||
| 由于本制品使用Real Time PCR法，扩增反应与检测同时进行，反应后的扩增产物不需要再进行电泳。为了避免污染，严禁从Tube管中取出扩增产物。 | ||||||||||||||||||||||
| 4. 本制品是使用Real Time PCR扩增仪对结果进行分析、判定。当Real Time PCR扩增仪的Auto功能不适合时，将会导致结果判定错误。此时可参照Real Time PCR扩增仪说明书进行手动设定。 | ||||||||||||||||||||||
| 5. 使用Premix Ex Taq (2X Conc.) 时，请上下颠倒轻轻混合均匀，避免起泡，经轻微离心后使用。试剂没有混匀时反应性能会有所下降，本制品不能用振荡器混匀。Premix Ex Taq (2X Conc.) 于-20℃保存时容易形成沉淀，此时，轻轻用手握一会儿或室温放置一段时间后，颠倒混匀可以完全融解。 | ||||||||||||||||||||||
页面更新：2019-06-18 15:49:26
上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。
上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。
– Luna 一步法酶混合液
上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。
使用探针法 qPCR，快速、灵敏、精准的对目标 RNA 进行检测和定量
Luna 通用探针一步法 RT-qPCR 试剂盒（无 ROX）经过优化，适用于水解探针法的 RNA 实时定量。一步法 RT-qPCR 为 RNA 检测和定量提供了一种便捷、强大的方法。在同一管中，RNA 首先由反转录酶转化为 cDNA，然后使用 DNA 依赖型 DNA 聚合酶扩增 cDNA，从而可以进行 qPCR 定量。基于探针法的 qPCR / RT-qPCR 原理是利用聚合酶的 5´ → 3´ 外切酶活性，将淬灭的目标特异性探针切断发出荧光，并实时监测荧光值的增加，以测量 PCR 每个循环中的 DNA 扩增。在荧光信号显著超过背景荧光的位置，可以确定 Cq 值。Cq 值可用于评估两个或多个样品的靶基因相对丰度，通过已知稀释浓度样品的标准曲线，可对靶基因进行绝对定量。
以下试剂随产品提供
|
储存温度 （°C） |
浓度 |
|
|
Luna® Probe One-Step Reaction Mix （No ROX） |
-20 |
2 X |
|
Luna® WarmStart® RT Enzyme Mix |
-20 |
20 X |
|
Nuclease-free Water |
-20 |
-20°C
上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。
快速、灵敏、精确的实时荧光染料定量检测 DNA 和 cDNA
使用实时荧光染料定量 PCR 时，最常用的荧光染料是 SYBR® Green I，后者与双链 DNA 结合，检测每个 PCR 循环中的 DNA 扩增情况。Cq 值是循环数量值，即检测到的荧光信号超过背景本底信号域值所经历的循环数，该 Cq 值可用于评估两个或两个以上的样本之间的相对丰度，也可以与已知浓度系列稀释的标准曲线进行对比，读取样本绝对值。
NEB Luna Universal qPCR Master Mix 是经过优化的 2X 预混液，可以用于实时定量 PCR检测和目标 DNA 的定量，适用于具有 SYBR®/FAM 通道的大部分 qPCR 设备。预混液含有热启动 Taq DNA 聚合酶及独特校正染料，与一系列 qPCR 设备兼容；预混液中使用了 dUTP，以防止产物残留污染；预混液中还加有非荧光染料，便于建立反应时进行肉眼观察，该染料的光谱与 qPCR 荧光染料不重叠，因此不会影响到实时检测数值。
预混液为 2X，包含除了模板和引物以外，用于 PCR 扩增和定量检测的所有组分。可以使用商业化的 qPCR 分析引物，用 Luna qPCR 产品进行基因组 DNA 或者 cDNA 的定量分析。
图表一：NEB 的 Luna Universal qPCR Master Mix 为 qPCR 带来更高灵敏度及可重复性
使用 Luna Universal qPCR Master Mix 检测目标中 GAPDH 基因的表达情况，模板为 6个分别 10 倍稀释的 Jurkat cDNA (20 ng – 0.2 pg),每个浓度的样品做8个复孔。cDNA 是使用 NEB Protoscript® II First Strand cDNA Synthesis Kit (NEB #E6560) 从 Jurkat 的总 RNA 反转录得来。
图表二：NEB 的 Luna Universal qPCR Master Mix 为不同来源的 DNA 都能提供更高灵敏度和精确度的检测和定量
Luna Universal qPCR Master Mix 可以检测不同来源的基因组 DNA。使用 ABI 7500 快速荧光定量仪器，50 ng – 0.5 pg 的基因组 DNA 对目标进行实时定量检测。基因组 DNA使用传统的柱纯化方法纯化。无论从小鼠肾脏的基因组检测 ACTB 基因、烟草基因组 DNA 检测 psbB 基因、还是从酵母基因组 DNA 中检测 rdn18S，Luna 产品都有非常优秀的表现。
图表三：通过与市场上基于染料的 qPCR 试剂对比，NEB 的 Luna 产品体现出了更优的稳定性和特异性
使用 NEB 公司和其它供应商的试剂，分别对来自于 Jurkat 基因组 DNA或 Jurkat cDNA不同丰度、长度和 GC 含量的 16-18 个目的基因进行检测（使用 Bio-Rad 机器检测 10 个基因组模板和 8 cDNA 模板，使用 ABI 的机器检测9个基因组模板和7 个 cDNA 模板）。每份检测结果由两个实验者根据厂商要求分别得到。使用反应效率、最低检测值以及无模板扩增来衡量结果（ΔCq = average Cq of lowest input – average Cq of non-template control）。此外，一致性、可重复性以及曲线的整体质量评估也作为实验的参考(标准分数)。上面的点状图展示了符合可接受的性能标准的百分比（绿框圈起来的点的标准分＞3）。不同厂商的结果如上图所示，从左到右分别是：NEB；Bio-Rad, SsoAdvanced™ Universal SYBR® Green Supermix； Roche, FastStart™ SYBR Green Master； QIAGEN, QuantiTect® SYBR Green PCR Kit； ABI, PowerUP™ SYBR Green Master Mix； Promega®, GoTaq® qPCR Master Mix。
1. 引物设计
使用相关软件（如 Primer 3）设计 qPCR 引物时，在减少非特异性扩增和引物二聚体的情况下提高扩增成功率。引物的 GC 含量为 40–60% 可以保证最大的扩增效率。在可能的情况下，尽可能多的输入目标周围区域序列，以便引物序列设计更加完善。使用检索功能，检索相关数据库以避免非特异性扩增。如果模板是 cDNA ，在设计引物的时候可以跨内含子区域来避免基因组的非特异性扩增。相反，如果引物设计在内含子区域则可以保证基因组区域的特异性扩增。
2. 引物浓度
对于大多数模板来说，引物的终浓度 250 nM 就可以达到要求。如果需要的话，引物的浓度可以在 100–500 nM 之间优化。
3. 扩增子长度
为了确保 qPCR 结果的成功和一致性，PCR 效率的最大化非常重要。其中一方面就是设计短的 PCR 产物（70-200 bp）。如果反应产物超出范围，可能需要对实验进行优化（比如增加延伸时间等）
4. 模板准备及相关浓度
Luna qPCR 试剂与通过典型的核酸纯化方法纯化的 DNA 样本都兼容。制备好的 DNA 可以长期稳定储存在包含 EDTA 的缓冲液中（如 1X TE），实验时使用 TE buffer 或者水进行稀释。
一般来说，标准品和未知样品的浓度范围应该在 1 个拷贝到 106 个拷贝之间。如果是大型基因组样本（如人类或老鼠的 gDNA）一般浓度为 50 ng-1 pg。如果是小型基因组样本，可以参考使用1 个拷贝到 106 个拷贝的浓度。对于单一样本的稀释，样本中需要包含多个拷贝和空白对照。对于 cDNA 样本，可以使用 1 μg–0.1 pg 的 RNA 的反转录产物。cDNA 样本不需要纯化，但是在使用之前需要至少稀释 10 倍
5. ROX 校正染料
有些实时定量设备建议使用校正染料（通常是 ROX）来校正由于气泡、微小的体积差别、管与管之间的差异及反应过程中尘埃或者微粒的自发荧光造成的反应差距。Luna Universal qPCR Master Mix 包含了通用型的校正染料，可以兼容不需要使用校正染料以及需要使用低浓度或者高浓度校正染料(ROX)的一系列的荧光定量检测仪器。因此，在使用这些仪器进行 qPCR 实验时，不需要额外的组分。
6. 预防污染
qPCR 是一种非常灵敏的检测方法，前个 qPCR 产物污染下一个样本会带来一系列的问题，如假阳性及灵敏度的下降。防止污染的最好办法就是严格按照程序操作，避免扩增后的开盖。为了进一步满足预防交叉污染的要求，Luna Universal qPCR Master Mix 中包含了 dUTP/dTTP，从而可以在扩增过程中将 U 掺入到 DNA 产物中。qPCR 前使用尿嘧啶 DNA 糖基化酶（UDG）进行预先处理，就可以水解含有尿嘧啶的产物，以防止污染后续试验。使用能够完全失活的 UDG 是至关重要的，否则 UDG 会破坏新合成的 qPCR 产物。
为了避免产物携带污染，在反应体系中加入终浓度为 0.025 units/μl 的南极热敏 UDG（NEB #M0372）。欲将污染的可能性降到最低，最好在室温下建立反应或者在变性步骤前加上
25℃ 温育 10 分钟
7. 反应条件设定
由于聚合酶的热启动性，在实验前不需要预热机器，也不需要在冰上加样。
如果使用96 孔板，建议使用 20 μl 反应体积。
如果使用 384 孔板，建议使用 10 μl 反应体积。在设定仪器的循环条件时，保证在延伸结束时包含一次读板并在循环结束后生成溶解曲线以分析产物的特异性。
大部分应用分析反应 40 个循环就可以，低起始量的样本可以反应 45 个循环。
上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。
上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。
Luna 通用探针一步法 RT-qPCR 4X 预混液，含 UDG 可精准检测目标 RNA，多重扩增检测性能优异，一次可检测多达 5 个靶标。
• 单管预混液剂型使反应体系的建立更便捷
• 4X 浓度的预混液可增加样品加入量，提高 RT-qPCR 灵敏度
• 一次可检测多达 5 个靶标，增加检测通量
• Luna 温启动反转录酶与 Taq 热启动 DNA 聚合酶联合使用，提高反应特异性及稳定性并可室温建立体系
• 预混液中包含 UDG 和 dUTP，防止模板残留污染
• 无干扰的可见示踪染料避免加样错误
• 点击 COVID-19 research 了解 NEB 如何将多种 RT-qPCR 病毒检测方法用于新冠研究
Luna 通用探针一步法 RT-qPCR 4X 预混液，含 UDG 用于探针法实时荧光定量检测靶标 RNA。首先反转录酶将 RNA 转化为 cDNA，然后 DNA 聚合酶对 cDNA 进行扩增，完成靶标的实时荧光定量 PCR（qPCR），整个过程在单管内一次性完成。基于探针法的 qPCR / RT-qPCR 原理是利用聚合酶的 5´ → 3´ 外切酶活性，将淬灭的目标特异性探针切断发出荧光，并实时监测荧光值的增加，以测量每个循环中的 DNA 扩增。在荧光信号显著超过背景荧光的位置，可以确定 Cq 值。Cq 值可用于评估两个或多个样品的靶基因相对丰度。
两位实验人员按照操作说明书，在几天的时间内，使用 Applied Biosystems™ QuantStudio™ 6 实时 PCR 系统，用两种荧光定量试剂盒分别对 8 个不同丰度、长度和 GC 含量的靶标（通过不同颜色显示）进行一步法 RT-qPCR 测试。反应结果就以下方面进行评估：扩增效率、低样品量检测能力及无模板扩增值（ΔCq=无模板对照的平均 Cq-最低起始量的平均 Cq）。此外，基于前面的度量值（质量得分）还评估了扩增结果的一致性、可重复性和总体曲线质量。结果显示：参与测试的两种试剂均表现不错，但 NEB 测试结果落在绿框里的数量更多，因此 Luna 通用探针一步法 RT-qPCR 4X 预混液，含 UDG 性能优于 TaqPath 1-Step RT-qPCR预混液。
RT-qPCR 的高灵敏度使得避免 DNA 污染尤为重要。由于先前扩增产物可作为后续反应的底物，因此反应体系加入 dUTP 和热敏 UDG 可防止模板残留污染。热敏 UDG 超过50°C时会完全失活，因此对 qPCR 性能没有影响。
该预混液包含无荧光的可见蓝色示踪染料，有助于透明管加样。该示踪染料与 qPCR 常用荧光基团的光谱没有重叠，也不会干扰实时检测。
Luna 通用探针一步法 RT-qPCR 4X 预混液，含 UDG 包含无干扰的可见蓝色示踪染料可避免加样错误
上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。
Luna 探针一步法 RT-qPCR 4X 预混液，含 UDG（无 ROX）可精准检测目标 RNA，多重扩增检测性能优异，一次可检测多达 5 个靶标。
Luna 探针一步法 RT-qPCR 4X 预混液，含 UDG（无 ROX）用于探针法实时荧光定量检测靶标 RNA。首先反转录酶将 RNA 转化为 cDNA，然后 DNA 聚合酶对 cDNA 进行扩增，完成靶标的实时荧光定量 PCR（qPCR），整个过程在单管内一次性完成。基于探针法的 qPCR / RT-qPCR 原理是利用聚合酶的 5´ → 3´ 外切酶活性，将淬灭的目标特异性探针切断发出荧光，并实时监测荧光值的增加，以测量每个循环中的 DNA 扩增。在荧光信号显著超过背景荧光的位置，可以确定 Cq 值。Cq 值可用于评估两个或多个样品的靶基因相对丰度。
