脂质体2000/Lip2000转染试剂

货号：BL623A

规格：0.5ml

品牌：Biosharp

Lip2000Transfection Reagent

产品简介：

Lip2000是一种新型的阳离子脂质体转染试剂,适合于将核酸(DNA和RNA)转染至真核细胞,具有低细胞毒性、对多种类型的细胞都具有高转染效率、转染时血清的存在不影响转染效率的优点。

适用范围：贴壁细胞和悬浮细胞（哺乳动物细胞系）的转染。

质粒DNA的转染：对大多数细胞来说,DNA(µg)与Lip2000(µl)的比例为1:2~1:3。转染时高的细胞密度可以得到高的转染效率和表达水平,并能减少细胞毒性。

使用说明：（以 24 孔板为例）

1、细胞铺板：

贴壁细胞：转染前一天,用500µl不含抗生素的培养基接种0.5-2×10⁵ 细胞,使之第二天能达到 70-90%汇合。 

悬浮细胞：在准备 DNA-Lip2000 复合物之前,用500µl不含抗生素的培养基接种4-8×10⁵细胞即可。

2、对每个转染样品,进行以下操作

（1）在离心管里分别加入50µl无血清培养基（如OPTI-MEM Ⅰ 培养基）和 0.8µg DNA,轻柔混匀,制成DNA稀释液。

（2）在另一个离心管里分别加入50µl无血清培养基（如OPTI-MEM Ⅰ 培养基）和2.0µl Lip2000（注意用前先混匀）,轻柔混匀,制成 Lip2000稀释液,室温静置 5 分钟。

（3）将 DNA 稀释液和 Lip2000 稀释液混合,轻柔混匀,室温静置 20分钟,形成DNA-Lip2000 复合物。DNA-Lip2000 复合物在室温下可稳定存在 6 小时。

3、将 DNA-Lip2000 复合物加入到接种好的细胞中,将培养板轻轻地前后摇动,使复合物分散均匀。

4、在 37℃CO₂ 培养箱中培养 4-6 小时后更换培养基,继续培养18-48 小时

5、如果要筛选稳定细胞株,则在转染24小时后将细胞按照1:10 或更高的比例接种到新鲜培养基中,第二天加入选择性培养基进行筛选。

质粒 DNA 转染的优化：为达到最高的转染效率和降低细胞毒性的影响,可以对 DNA 和 Lip2000 的比例以及细胞密度进行优化,一般在1:0.5~1:5 的范围内优化DNA (µg) 和 Lip2000 (µl) 的比例。

保存条件：

       2-4℃保存一年（避免冷冻）。