小鼠和大鼠[2]给予具有M24met异种移植肿瘤(400-600mm 3)的小鼠单剂量的Axitinib或对照(0.5%羧甲基纤维素/ H 2 O)。收集血液和肿瘤组织样品用于药代动力学和VEGFR-2测量。使用Bradford比色测定法测定肿瘤组织中的总蛋白质浓度。给6日龄Sprague-Dawley大鼠腹膜内注射两次Axitinib(30mg/kg)。处死动物,收集视网膜并裂解,并进行免疫沉淀/免疫印迹实验。 ECL-Plus用于检测,使用Alpha Imager 8800进行光密度分析。
细胞实验
在1%FBS(HUVEC)或0.1%FBS(肿瘤细胞)存在下使内皮细胞或肿瘤细胞饥饿18小时。加入Axitinib并将细胞在1mM Na 3 VO 4存在下于37℃温育45分钟。将适当的生长因子加入细胞中,5分钟后,用冷PBS冲洗细胞,并在裂解缓冲液和蛋白酶抑制剂混合物中裂解。将裂解物与免疫沉淀抗体一起在4℃下孵育过夜的蛋白质。将抗体复合物与蛋白A珠缀合,并通过SDS-PAGE分离上清液[2]。
数据来源文献
[1]. Fenton BM, et al. The addition of AG-013736 to rractionated radiation improves tumor response without functionally normalizing the tumor vasculature. Cancer Res. 2007 Oct 15;67(20):9921-8. [2]. Hu-Lowe DD, et al. Nonclinical antiangiogenesis and antitumor activities of axitinib (AG-013736), an oral, potent, and selective inhibitor of vascular endothelial growth factor receptor tyrosine kinases 1, 2, 3. Clin Cancer Res. 2008 Nov 15;14(22):7272-83 [3]. Allen E, et al. Metabolic Symbiosis Enables Adaptive Resistance to Anti-angiogenic Therapy that Is Dependent on mTOR Signaling. Cell Rep. 2016 May 10;15(6):1144-60