PA-824

PA-824

货号:
IP1410

品牌:
Jinpan

PA-824

暂无详情
产品简介
MDL MFCD06809939
EC EINECS 1533716-785-6
别名 Pretomanid
英文名称 PA-824
CAS 187235-37-6
分子式 C14H12F3N3O5
分子量 359.26
纯度 ≥98%
单位
SMILES FC(F)(F)OC(C=C1)=CC=C1CO[C@@H]2COC3=NC([N+]([O-])=O)=CN3C2
靶点 Bacterial
规格 10mg 50mg
是一种双环硝基咪唑并吡喃类似物,是一种新颖,有效且选择性的抗结核化合物

Pi3K9p1102/p82a), active

Pi3K9p1102/p82a), active

货号:
P27-18H

品牌:
Echelon

产品简介
英文名称 Pi3K9p1102/p82a), active
货期 3-5Weeks
规格 10ug
PI3Kalpha 激酶

磷脂酰肌醇 (phosphotidylinositol,PI) 是构成细胞膜的重要组分之一,同时在细胞内外环境信号的传递上也起着非常重要的作用。

美国Echelon提供各类磷脂酰肌醇(PIPn)及检测工具 。助力细胞膜以及细胞信号通路上的研究!

PA Tag 新型标签系统生物试剂-Wako富士胶片和光

PA Tag 新型标签系统生物试剂-Wako富士胶片和光

供货周期 一个月以上 应用领域 生物产业

PA Tag 新型标签系统
PA tag系统是利用高亲和性&高特异性单抗(NE-1)识别肽标签(GVAMPGAEDDVV)的重组蛋白新型检测系统。PA tag系统中的抗体琼脂糖可通过免疫沉淀法纯化PA tag融合蛋白,并可在洗涤后获得再生。中性pH条件下PA tag肽简单方便地竞争性洗脱PA tag融合蛋白。

PA Tag 新型标签系统​

 

  PA tag系统是利用高亲和性&高特异性单抗(NE-1)识别肽标签(GVAMPGAEDDVV)的重组蛋白新型检测系统。PA tag系统中的抗体琼脂糖可通过免疫沉淀法纯化PA tag融合蛋白,并可在洗涤后获得再生。中性pH条件下PA tag肽简单方便地竞争性洗脱PA tag融合蛋白。

  PA tag系统的亲和性和特异性优于现有标签系统,抗体琼脂糖可再生60次降低成本,可用于免疫细胞化学、免疫印迹和流式细胞术,是动物宿主细胞重组蛋白生产的有效工具。

 

原理

PA Tag 新型标签系统生物试剂-Wako富士胶片和光

 

载体列表

产品名称(载体名称)

抗性

规格

产品编号

大肠杆菌抗性

真核细胞抗性

pCAG-Ble PA 标签-C

Bleomycin

20μg

161-26861

pCAG-Ble PA 标签-N 信号 增加型

20μg

168-26871

pCAG-Bsd PA 标签-C

Blasticidin S

20μg

165-26881

pCAG-Bsd PA 标签-N 信号 增加型

20μg

162-26891

pCAG-Neo PA 标签-C

Hygromycin B

20μg

165-26901

pCAG-Hyg PA 标签-N 信号 增加型

20μg

162-26911

pCAG-Neo PA 标签-C

Kanamycin

G418

20μg

169-26921

pCAG-Neo PA 标签-N 信号 增加型

20μg

166-26931

 

优点、特色

PA Tag 新型标签系统生物试剂-Wako富士胶片和光

 

案例、应用

【使用例子:PA标签抗体,大鼠单克隆抗体(NZ-1)】

  NZ-1是特异性识别PA tag(GVAMPGAEDDVV)的单克隆抗体,能用于检测动物细胞表达的PA tag融合蛋白,亲和性很高并能简单地用肽洗脱!已确认不存在交叉反应的物种包括小鼠、大鼠、仓鼠和犬类。

PA Tag 新型标签系统生物试剂-Wako富士胶片和光

浓度:标签表示(约1.0mg/mL)

配方:1×PBS (pH7.5) 水溶液

克隆号:NZ-1

亚型:IgG2a

应用:免疫印迹 0.01–1μg/mL  

免疫沉淀 10–50μg/assay  

流式细胞术 0.1–10μg/mL  

免疫细胞化学 0.1–10μg/mL

保存条件:2–10°C避免反复冻融

 

【NZ-1 Fab和PA肽的复合体结构分析】

PA Tag 新型标签系统生物试剂-Wako富士胶片和光

 

◆产品列表

产品编号 产品名称 规格 包装
161-26861 pCAG-Ble PA 标签-C for Genetic Research 20μg
168-26871 pCAG-Ble PA 标签-N 信号 增加型 for Genetic Research 20μg
165-26881 pCAG-Bsd PA 标签-C for Genetic Research 20μg
162-26891 pCAG-Bsd PA 标签-N 信号 增加型 for Genetic Research 20μg
165-26901 pCAG-Neo PA 标签-C for Genetic Research 20μg
162-26911 pCAG-Hyg PA 标签-N 信号 增加型 for Genetic Research 20μg
169-26921 pCAG-Neo PA 标签-C for Genetic Research 20μg
166-26931 pCAG-Neo PA 标签-N 信号 增加型 for Genetic Research 20μg

重组蛋白纯化系统Target tag/PA tag​生物试剂-Wako富士胶片和光

重组蛋白纯化系统Target tag/PA tag​生物试剂-Wako富士胶片和光

供货周期 一个月以上 应用领域 生物产业

重组蛋白纯化系统Target tag/PA tag​

重组蛋白纯化系统Target tag/PA tag​生物试剂-Wako富士胶片和光

重组蛋白纯化系统Target tag/PA tag​

 

 

◆TARGET 标签系统 标签序列【(YPGQ)5V】

 

● 通过树脂再生,降低运作成本

● 温和洗脱、清洗,实现高纯度

● 在动物细胞表达系(HEK293T细胞、CHO细胞等)中有效纯化蛋白

 

  TARGER标签系统使用的是可识别肽标签(21个氨基酸残基)的单抗(P20.1),是日本开发的亲和纯化标签系统。

  TARGET标签系统实践证明,即使在传统系统都难以进行高纯度蛋白纯化的动物细胞表达系中,也可有效地进行亲和纯化。

 

 

TARGET标签系统

 

  A rapid screening method for cell lines producing singly-tagged recombinant proteins using the“ TARGET tag”system. Tabata S. et al., J. Proteomics, 2010 Aug 5;73(9):1777-85.

 

 

TARGET 标签表达载体示意图

 

重组蛋白纯化系统Target tag/PA tag​生物试剂-Wako富士胶片和光

 

 

产品选择

 

载体

表达模式

宿主细胞

MCS启动子

pEBMulti

非整合型稳定表达

灵长类(人、猴)、狗细胞等贴壁细胞

CAG

pCAG

瞬时表达

灵长类(人、猴)、狗细胞等贴壁细胞、大/小鼠等动物细胞

CAG

 

 

和光还推出除上述抗性基因载体外的其他载体。(请点击查看)

测序用引物序列、其他载体序列的相关详细信息,已附在产品随货说明书中。

另外可点击和光主页/TARGET标签,查看序列信息、多克隆位点(MCS)信息。

 

 

TARGET标签融合蛋白的免疫沉淀

重组蛋白纯化系统Target tag/PA tag​生物试剂-Wako富士胶片和光

通过Transient 载体,

表达TARGET标签融合重组蛋白

重组蛋白纯化系统Target tag/PA tag​生物试剂-Wako富士胶片和光

培养上清(培养第7天)

每10 mL中,分别添加0.1 mL(net 0.05 mL)的抗体磁珠(①抗TARGET标签抗体琼脂糖珠、②抗DYKDDDDK标签抗体琼脂糖珠,其他公司产品),4℃条件下,进行2小时免疫沉淀。

清洗后,在回收的各珠中分别添加0.5 mL 0.2 mg/mL

TARGET标签肽/TBS和0.2 mg/mL DYKDDDDK肽/TBS,4℃条件下,平稳震动0.5小时。离心后回收上清。

再分别在各珠中添加0.5 mL 0.1 M Glycine-HCl (pH 2.7),室温下,平稳震动5分钟。离心后,回收上清并用1M Tris-HCl (pH 9.0)中和。

上图为SDS-PAGE处理后的银染结果。

与传统DYKDDDDK tag相比,背景更低

→高纯度!

 M:M.W. Marker

 1.仅转染载体的培养上清

 2.转染了蛋白Y-TARGET 标签表达质粒的细胞培养上清

 3.转染了TARGET标签-蛋白Y 表达质粒的细胞培养上清

  也可使用市售的Transient载体

 

 

确认非整合型载体TARGET   tag C端融合重组蛋白的表达

重组蛋白纯化系统Target tag/PA tag​生物试剂-Wako富士胶片和光

利用可编码表达人源生理活性蛋白基因的质粒转染HEK293N细胞后,从初期细胞数3×10^5cells/mL开始培养,回收0/3/7日的培养上清。

用20μL/lane的培养上清进行SDS-PAGE处理,通过银染和Western blotting,检测出蛋白的表达。

重组蛋白纯化系统Target tag/PA tag​生物试剂-Wako富士胶片和光

 可确认到与市面售卖的Tag系统有相同的表达量和检测灵敏度。

 

 

TARGET 标签系列

 

产品名称

子类
克隆号

适用

实验

规格

产品编号

包装

单抗

抗TARGET标签, 单抗

小鼠IgG1
  P20.1

IP, WB

免疫化学用

016-25481

200 μg

012-25483

1 mg

HRP标签单抗

抗TARGET tag, 单抗, 

过氧化酶结合

小鼠IgG1   P20.1

WB

免疫化学用

015-25571

200 μL

011-25573

1 mL

 

 

产品名称

子类克隆号

规格

产品编号

包装

抗体结合琼脂糖珠

抗TARGET标签抗体琼脂糖珠

小鼠IgG1

P20.1

免疫化学用 018-25561

2 mL

(Net 1 mL)

014-25563

10 mL

(Net 5 mL)

012-25564

50 mL

(Net 25 mL)

 识别N端、C端的TARGET标签

 使用载体:4%琼脂糖
 溶液组成:1×TBS (pH 7.5), 0.05 w/v%叠.氮化钠
 抗体结合量:2.0 mg/mL
 结合容量:1 mL本品可结合约0.1-1.0 mg的TARGET标签融合蛋白

 

 

产品名称

备注

规格

产品编号

包装

TARGET标签肽

含量(HPLC)95%以上

基因研究用

200-19673

5 mg

208-19674

25 mg

清洗液

TARGET标签清洗液

已过滤消毒
即用型

基因研究用

208-19831

50 mL

 

 

产品名称

可选Marker

产品编号

包装

大肠杆菌

动物细胞

瞬时表达载体

C端插入TARGET标签的pCAG-Ble载体

博莱霉素

165-26381

20 μg

N端插入TARGET标签的pCAG-Ble载体

博莱霉素

162-26391

20 μg

C端插入TARGET标签的pCAG-Bsd载体

杀稻瘟素S

165-26401

20 μg

N端插入TARGET标签的pCAG-Bsd载体

杀稻瘟素S

162-26411

20 μg

C端插入TARGET标签的pCAG-Hyg载体

潮霉素B

169-26421

20 μg

N端插入TARGET标签的pCAG-Hyg载体

潮霉素B

166-26431

20 μg

C端插入TARGET标签的pCAG-Neo载体

卡那霉素

G418

163-26441

20 μg

N端插入TARGET标签的pCAG-Neo载体

卡那霉素

G418

160-26451

20 μg

游离载体

C段插入TARGET标签的pEBMulti-Ble载体

博来霉素

167-26461

20 μg

N段插入TARGET标签的pEBMulti-Ble载体

博来霉素

164-26471

20 μg

C段插入TARGET标签的pEBMulti-Bsd载体

杀稻瘟素S

161-26481

20 μg

N段插入TARGET标签的pEBMultI-Bsd载体

杀稻瘟素S

168-26491

20 μg

C段插入TARGET标签的pEBMulti-Hyg载体

潮霉素B

161-26501

20 μg

N段插入TARGET标签的pEBMulti-Hyg载体

潮霉素B

168-26511

20 μg

C段插入TARGET标签的pEBMulti-Neo载体

卡那霉素

G418

165-26521

20 μg

N段插入TARGET标签的pEBMulti-Neo载体

卡那霉素

G418

162-26531

20 μg

C段插入TARGET标签的pEBMulti-Puro载体 

氨苄青霉素

嘌呤霉素

169-26541

20 μg

N段插入TARGET标签的pEBMulti-Puro载体

氨苄青霉素

嘌呤霉素

166-26551

20 μg

 

 

◆PA标签系统 标签序列【GVAMPGAEDDVV】

 

● 通过树脂再生,降低运行成本

● 超高亲和性抗体,实现高回收率、高纯度纯化

● 在动物细胞表达系(HEK293T细胞、CHO细胞等)中,有效纯化蛋白

● PA标签系统是使用可识别肽标签(12个氨基酸残基)的单抗(NZ-1)。日本开发的亲和性纯化标签系统。

● NZ-1单抗对PA tag具有高亲和性和特异性,可应用于Western Blotting、细胞流式分析、免疫组化(ICC)。

   通过免疫沉淀,可纯化PA标签融合蛋白以及树脂再生。

● PA标签系统,可一步纯化高纯度PA标签融合蛋白。

 

 

PA标签系统

 

  Fujii, Y. et al., “PA tag: A versatile protein tagging system using a super high affi nity antibody against a dodecapeptide derived from human podoplanin.”, Protein Exp. Purif., 95, 240-247(2014).

 

 

Fujii, Y. et al.

  新型亲和标签系统“PA tag”的应用方法~蛋白的纯化及检测~

  蛋白科学学会档案, 7, e075 (2014)

 

 

PA标签表达载体案例

 

重组蛋白纯化系统Target tag/PA tag​生物试剂-Wako富士胶片和光

 

 

载体

表达模式

宿主细胞

MCS启动子

pCAG

瞬时表达

灵长类(人、猴)、犬细胞等粘着细胞
  和啮齿动物细胞

CAG

 

 

和光还推出除上述抗性基因载体外的其他载体。(请点击参考。)

测序用引物序列、其他载体序列的相关详细信息,已附在产品现货说明书中。

另外可点击和光主页/TARGET标签,查看序列信息、Multi Cloning Site(MCS)信息。

 

 

用PA标签从培养上清中亲和提纯的案例

 

重组蛋白纯化系统Target tag/PA tag​生物试剂-Wako富士胶片和光

数据提供:大阪大学 蛋白研究所附属蛋白分析先进研究中心  

分子创制学研究室 高木淳一老师,藤井勇树老师

 

 

Protocol 目的蛋白的纯化

 

1.哺乳类动物细胞转染(HEK293T)
  转染处于40-60%融合状态的细胞
  培养基:D-MEM, 5%FBS

2.回收培养上清和吸附蛋白树脂
  转染48-72小时后,回收约420 mL培养上清,加入8 mL抗PA标签抗体琼脂糖珠,混合2小时(2-10℃)

3.树脂回收
  用50 mL的纯化柱。回收步骤2)中的琼脂糖

4.树脂洗涤
  加入珠4倍量的TBS 缓冲液(20 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl),清洗5次

5.PA标签肽从树脂中竞争性洗脱
  加入经1×TBS溶液, pH 7.5溶解过的PA 标签肽(终浓度0.1 mg/mL),体积量需为珠的一倍,

  然后分10次回收PA标签融合蛋白X

6.SDS-PAGE
  样品量
  c. sup:5 μL, flow through:5 μL, wash:5 μL,
  肽洗脱(1-10):各10 μL

  可纯化PA标签融合蛋白X且不依赖PA标签。→可实现*纯度的亲和纯化。

 

 

通过PA tag降低背景的方法

重组蛋白纯化系统Target tag/PA tag​生物试剂-Wako富士胶片和光
     可在含有高浓度NaCl的TBS溶液中,通过前清洗去除杂质蛋白!!

M: Marker
I: input 100ng分
P: 纯化前样品
1: wash片段①
2: wash片段②
3: wash片段③
4: wash片段④
5: wash片段⑤
6: wash片段⑥
7: wash片段⑦
8: wash片段⑧
9: wash片段⑨
10: 酸洗脱①
11: 酸洗脱②
12: 酸洗脱③
13: 酸洗脱④
14: 酸洗脱⑤

 

  在20 mL的昆虫细胞溶解液中加入蛋白Z,使其浓度变为1.0 mg/L后,添加200 μL抗PA标签抗体琼脂糖珠,4℃温度条件下,搅拌3小时。

  分别用不同浓度的TBS溶液(0.15 M、0.5 M、1.0 M NaCl)进行调整,用琼脂糖珠50倍量清洗。在回收的各珠中加入0.5 mL 0.1 M Glycine-HCl(pH 2.7),室温条件下平稳震动5 min。

  离心后回收上清,用1 M Tris-HCl (pH 9.0)做中和处理。

  SDS-PAGE后进行银染,比较去除污染蛋白之后,不同浓度下的结果。

 

 

使用案例:Western Blotting

重组蛋白纯化系统Target tag/PA tag​生物试剂-Wako富士胶片和光
数据提供:东北大学研究生院医学系研究科 

地域革新领域 加藤 幸成老师,金子   美华老师

NZ-1显示出与天然抗体具有相同的高检测灵敏度。

Lane 1

一抗:抗IDH1抗体(RcMab-1), 1 μg/mL

二抗:抗大鼠IgG-HRP标签, 1000倍稀释
 
 Lane 2

一抗:抗PA tag抗体, 1 μg/mL

二抗:抗大鼠IgG-HRP标签, 1000倍稀释
 
Lane 3

一抗:抗DYKDDDDK标签抗体, 3.5 μg/mL

二次抗体:抗小鼠IgG-HRP标签, 1000倍稀释
 
样品量:各10 μg
曝光时间:10分钟

 

 

PA标签系列

 

产品名称

子类克隆号

适用实验

规格

产品编号

包装

单抗

抗PA标签, 大鼠单抗

大鼠IgG2a
  NZ-1

IP, WB, FCM, ICC

免疫化学用

016-25861

200 μL

012-25863

1 mL

HRP标签单抗

抗PA标签, 大鼠单抗,过氧化酶结合

大鼠IgG2a

NZ-1

WB

免疫化学用

015-25951

200 μL

011-25953

1 mL

 

 

产品名称

子类克隆号

规格

产品编号

包装

抗体结合琼脂糖珠

抗PA标签抗体琼脂糖珠

大鼠IgG2a   NZ-1

免疫化学用

012-25841

2 mL(Net 1 mL)

018-25843

10 mL

(Net 5 mL)

016-25844

50 mL

(Net 25 mL)

 识别N端、C端的PA标签
 使用载体:4% 琼脂糖
 溶液组成:1 x PBS (pH7.2), 0.05 w/v%叠.氮化钠
 抗体结合量:参见标签记载
 结合容量:1 mL本品可结合约0.015-1.0 mg的PA标签融合蛋白

抗体结合磁珠

MagCaptureTM HP 抗PA标签抗体磁珠

大鼠IgG2a   NZ-1

免疫化学用

137-18751

2 mL

溶液组成:1×TBS(pH 7.4), 50% glycerol, 0.05 w/v% sodium azide

 

 

产品名称

备注

规格

产品编号

包装

PA标签肽

含量(HPLC)95%以上

基因研究用

167-25501

5 mg

163-25503

25 mg

清洗溶液

PA标签清洗溶液

已过滤消毒
即用型

基因研究用

169-27261

50 mL

 

 

产品名称

可选Marker

产品编号

包装

大肠杆菌

动物细胞

瞬时载体

pCAG-Ble PA 标签-C

Bleomycin

161-26861

20 μg

pCAG-Ble PA 标签-N 信号 增加型

Bleomycin

168-26871

20 μg

pCAG-Bsd PA 标签-C

Blasticidin S

165-26881

20 μg

pCAG-Bsd PA 标签-N 信号 增加型

Blasticidin S

162-26891

20 μg

pCAG-Neo PA 标签-C

Hygromycin B

165-26901

20 μg

pCAG-Hyg PA 标签-N 信号 增加型

Hygromycin B

162-26911

20 μg

pCAG-Neo PA 标签-C

Kanamycin

G418

169-26921

20 μg

pCAG-Neo PA 标签-N 信号 增加型

Kanamycin

G418

166-26931

20 μg

 

 

Rabbit anti-t-PA Recombinant Monoclonal Antibody(215-4)

Rabbit anti-t-PA Recombinant Monoclonal Antibody(215-4)别名宿主反应种属应用免疫原形式浓度纯化方法类型克隆号储存/保存方法存储溶液背景说明UniProt

概述
别名
Tissue-type plasminogen activator; t-plasminogen activator; tPA
宿主
Rabbit
反应种属
Human
应用
Sandwich ELISA
免疫原
Recombinant protein
性能
形式
Liquid
浓度
2 mg/ml
纯化方法
Protein A affinity column
类型
Monoclonal Antibody
克隆号
215-4
储存/保存方法
Store at 2 to 8℃ for one year.
存储溶液
PBS, pH 7.4, 0.03% Proclin 300
靶标
背景说明
Tissue plasminogen activator (abbreviated tPA or PLAT) is a protein involved in the breakdown of blood clots. It is a serine protease (EC 3.4.21.68) found on endothelial cells, the cells that line the blood vessels. As an enzyme, it catalyzes the conversion of plasminogen to plasmin, the major enzyme responsible for clot breakdown. Human tPA has a molecular weight of ~70 kDa in the single-chain form. tPA can be manufactured using recombinant biotechnology techniques; tPA produced by such means are referred to as recombinant tissue plasminogen activator (rtPA). Specific rtPAs include alteplase, reteplase, and tenecteplase. They are used in clinical medicine to treat embolic or thrombotic stroke. The use of this protein is contraindicated in hemorrhagic stroke and head trauma. The antidote for tPA in case of toxicity is aminocaproic acid. Increased levels of PAI-1 and tPA are associated with increased risk of cardiovascular disease, especially in patients with concomitant insulin resistance. It has been suggested that the tPA/PAI-1 complex would be an even stronger marker for thrombotic events than tPA antigen, and increased levels of tPA/PAI-1 complex were indeed recently shown to predict increased risk for first-ever stroke.
UniProt
P00750

实验结果图

Rabbit anti-t-PA Recombinant Monoclonal Antibody(215-4)

配对表格

PA (224–233), Influenza

PA (224–233), Influenza分子量: 1185.3描述序列储存/保存方法别名参考文献

产品描述
描述

This is a murine H-2 Db- and Kb-restricted immunodominant CTL epitope of influenza PR8 virus. The CD8+ T cells recovered by the bronchoalveolar lavage (BAL) from PR8-infected animals responded dominantly to stimulation with NP366–374 and PA224–233

序列
H – Ser – Ser – Leu – Glu – Asn – Phe – Arg – Ala – Tyr – Val – OH
储存/保存方法
-20°C
基本信息
别名
SSLENFRAYV
参考文献
参考文献
Ref: Zhong, W. et al. J. Biol. Chem. 278, 45135 (2003).