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Ap3, SHG成像染料细胞分析-Wako富士胶片和光

发表于由

Ap3, SHG成像染料细胞分析-Wako富士胶片和光

供货周期 一个月 应用领域 环保,化工,生物产业,农业,制药

Ap3是一种无荧光性SHG染料，在SHG信号成像中不会发出障碍性荧光。它与常规的荧光性膜染色染料不同，可以只观察细胞膜的信号，因此能够用于分析细胞膜的准确位置。另外，由于SHG信号强度和膜电位相关，因此还能用于膜电位的成像。

无荧光性新型SHG成像用染料Ap3, SHG成像染料细胞分析-Wako富士胶片和光

Ap3, SHG成像染料

 

 

Ap3是一种无荧光性SHG染料，在SHG信号成像中不会发出障碍性荧光。它与常规的荧光性膜染色染料不同，可以只观察细胞膜的信号，因此能够用于分析细胞膜的准确位置。另外，由于SHG信号强度和膜电位相关，因此还能用于膜电位的成像。

  

※ 本产品仅供科研用，不可作其他用途。

※ 本产品基于庆应义塾大学 医学部药理学教室以及筑波大学 数理物质系（学际物质科学研究中心）的研究成果，由funakoshi进行商品化并销售。

※ Nuriya M., et al, Nat. Commun., 7:11557 (2016).

※ 庆应义塾大学医学部 药理学教室 塗谷老师的相关采访文章，请复制链接访问 https://www.funakoshi.co.jp/contents/65872。

 

 

 

使用SHG专用染料对细胞膜现象进行成像

利用双光子现象之二次谐波产生（Second Harmonic Generation: SHG）

在显微镜下测量细胞膜形态和变化

 

庆应义塾大学 医学部药理学教室 塗谷睦生 老师

 

 

【背景】

细胞膜分隔细胞内外，可以作为在其周边产生的电信号和化学信息的传递场所，因此在细胞间和细胞内的信息传递中起着十分重要的作用。但是，由于其结构的精细和复杂性等，难以进行生理学上的分析。研究发现，对细胞膜具有高亲和力的染料在细胞膜中会发出强烈的SHG信号，由于该信号会根据膜电位而变化，因此研究认为，SHG成像在细胞膜的标记及其电位变化的分析等方面非常有效。

 

【无荧光性SHG专用染料Ap3】

Ap3是为了SHG成像而开发和合成的一种新型的无荧光性SHG专用染料，使用这种染料可实现观察其他荧光染料的同时观测。利用这一点，使用Ap3进行SHG成像可以观察到响应神经活动引起的膜电位变化，同时通过钙敏感性染料的荧光成像，还可以观察到膜附近钙浓度的变化。研究表明，使用Ap3进行的成像，由于光照射引起的信号衰减和细胞毒性非常低。因此利用Ap3能够可视化细胞膜，捕捉膜电位的变化，还可能同时对荧光蛋白的动态和报告荧光染料的信号变化进行长时间成像。因而使用Ap3对脑细胞、包括肌细胞在内的其他兴奋性细胞的生理学分析，或使用各种系统的离子通道的功能分析等的应用方面备受期待。

 

【展望】

除上述以外，SHG成像还可以对细胞膜的损伤和脂质成分，以及核酸或蛋白等生物分子的结构变化等多种生命现象进行高灵敏度检测。利用具有这种特殊能力的普通多光子显微镜系统，即可轻松地进行SHG成像，而且通过扩展专用染料的应用性，相信SHG成像作为生命科学领域研究中的新型工具会有更进一步的发展。

 

 

◆特点

 

●　Ap3是SHG成像的专用染料。除 SHG信号外，不会发出荧光

●　Ap3无荧光性， SHG成像的同时还能进行钙成像等荧光性成像的多模式成像

●　Ap3是一种光稳定性高的化合物

●　Ap3具有极低的光毒性，对细胞的损伤小

●　推荐光源：钛蓝宝石激光（波长标准：950 nm）

 

※ 在SHG成像中，需要双光子激发显微镜、SHG信号用滤光片（例如465-485 nm的带通滤光片）

※ 在SHG成像的观察中，物镜的另一侧（正置显微镜时为下方）需要检测系统。另外，在检测系统一侧建议使用具有光电倍增管（PMT）的显微镜。

 

◆操作方法要点

 

1. 在玻璃底培养皿中培养细胞；

2. 向细胞中添加终浓度为20 μM的Ap3溶液；

3. 使用双光子激发显微镜进行观察。

 

 

◆应用实例1

 

 

■　Ap3的SHG信号和无荧光性

 

Ap3, SHG成像染料细胞分析-Wako富士胶片和光

 

950 nm激光照射时，通过Ap3可观察到 SHG 信号，但未观察到荧光信号。

 

 

■　脑切片中SHG成像的膜电位变化

 

Ap3, SHG成像染料细胞分析-Wako富士胶片和光

 

A：电压固定时SHG信号的膜电位敏感性

B：动作电位依赖性SHG信号变化（左）和通过膜片钳测量的电位变化（右）

Nuriya M., et al, Nat. Commun., 7:11557 (2016).

 

 

■　同时测量脑切片中SHG成像的膜电位变化和荧光成像的钙浓度

 

Ap3, SHG成像染料细胞分析-Wako富士胶片和光

 

在脑切片中反复施加动作电位时（左；比例尺20 mV，5 s），观察Ap3的SHG信号和荧光性钙检测试剂Rhod-2的双光子荧光信号（TPF）（右）。在成像中同时测量的膜电位变化和钙浓度变化。

Nuriya M., et al, Nat. Commun., 7:11557 (2016).

 

 

◆应用实例2

 

■　比较多模式双光子显微镜下的细胞膜选择性SHG成像和细胞膜荧光成像

 

Ap3, SHG成像染料细胞分析-Wako富士胶片和光

 

用Ap3对表达细胞膜观察用膜锚定GFP的细胞进行染色，同时可视化在950 nm飞秒激光照射下GFP的双光子荧光（TPF，绿色）和Ap3的SHG（洋红色）信号。

由于GFP信号不仅从细胞膜，还会从囊泡等许多细胞内的膜结构中发出强烈的荧光，因此难以准确地识别出细胞膜的位置。与之相对的，Ap3的 SHG 信号只能从细胞膜发出，从而可以实现细胞膜的选择性成像和位点的准确识别。

Mizuguchi T., et al, iScience., Nov 30 ; 9 :359～366 (2018).

 

 

■　分析多模式双光子显微镜下细胞膜正下方的囊泡动态和肌动蛋白

 

Ap3, SHG成像染料细胞分析-Wako富士胶片和光

 

在表达GFP标记肌动蛋白的细胞中，分别用红色荧光标记Dextran染色胞吞后的囊泡，用Ap3染色细胞膜，同时利用多模式双光子显微镜进行可视化。

Ap3的SHG信号具有细胞膜特异性，而且可以与荧光信号*分离，因此能够通过Ap3的SHG信号准确识别细胞膜的位置，从而准确地测量从细胞膜到肌动蛋白骨架的距离。

Mizuguchi T., et al, iScience., Nov 30 ; 9 :359～366 (2018).

 

 

■　分析多模式双光子显微镜下质膜正下方的囊泡动态和微管蛋白

 

Ap3, SHG成像染料细胞分析-Wako富士胶片和光

 

在经过微管蛋白可视化试剂染色的细胞中，分别用红色荧光标记Dextran标记胞吞后的囊泡，用Ap3标记细胞膜，利用多模式双光子显微镜进行可视化。

Ap3的SHG信号具有细胞膜特异性，而且可以与荧光信号*分离，因此能够通过Ap3的SHG信号准确识别细胞膜的位置，而且可以测量从细胞膜到微管，以及细胞膜正下方囊泡移动的准确距离。

Mizuguchi T., et al, iScience., Nov 30 ; 9 :359～366 (2018).

 

◆产品列表

 

产品编号

产品名称

包装

FDV-0008

 Ap3, SHG Imaging Dye
Ap3, SHG成像染料

1 mg

 

AP标记山羊抗兔IgG

发表于由

AP标记山羊抗兔IgG

货号：BL023A

规格：0.1ml

品牌：Biosharp

山羊抗兔IgG-AP说明书

Goat Anti-Rabbit IgG, Alkaline Phosphatase Conjugated, H+L

 纯化方式：亲和纯化

浓度：0.6mg/ml

规格：原装进口为1.0ml                  进口分装为0.1ml （另加0.1ml甘油）

稀释范围：1:5,000 – 1:50,000 for ELISA and Western blotting

缓冲液：0.01M Tris-HCl, 0.25M NaCl, pH 8.0

防腐剂：0.05% Sodium Azide

分装及储存：

1、在进口原装抗体分装时,加入50%灭菌的甘油,能延长试剂的保存期。但应注意的是,此时抗体的浓度及稀释比例应降低一倍。

2、初次使用参考推荐的稀释比例,实际实验操作过程中需根据抗原和抗体的具体情况适当调节二抗的稀释比例。但应注意,需现用现配,因为稀释后抗体的有效活性会很快降低。

3、-20℃保存,避免反复冻融。

保存条件：-20℃保存一年

货号 BL023A
规格 0.1ml
品牌 Biosharp
说明书下载 点击下载

默克密理博PVDF（聚偏二氟乙烯）过滤膜0.22um孔径142mm直径亲水GVWP14250

发表于由

【简单介绍】

默克密理博PVDF（聚偏二氟乙烯）过滤膜0.22um孔径142mm直径亲水GVWP14250,Durapore表面滤膜具有高流速高通量、低溶出以及广泛的化学相容性。亲水性Durapore表面滤膜的蛋白质吸附能力远低于尼龙、硝化纤维素或PTFE膜。

【详细说明】

默克密理博PVDF（聚偏二氟乙烯）过滤膜0.22um孔径142mm直径亲水GVWP14250

默克密理博PVDF（聚偏二氟乙烯）过滤膜0.22um孔径142mm直径亲水GVWP14250,Durapore表面滤膜具有高流速高通量、低溶出以及广泛的化学相容性。亲水性Durapore表面滤膜的蛋白质吸附能力远低于尼龙、硝化纤维素或PTFE膜。

技术指示：

颜色：白色

表面：光面

厚度：125 um

灭菌方法：高温高压灭菌（121℃，1 bar）、EO或γ射线

操作温度：85℃

细菌内毒素：0.5 EU/ml

重量溶出物：<0.5%

详细说明

应用 过滤膜代码*

孔径

（um）

 可湿性

泡点

（bar）

水的流速

（ml/min/cm平方）

空气流速

（L/min/cm平方）

蛋白质吸附

（ug/cm平方）
减少生物溶液中的支原体 VVLP 0.1 亲水 
≥4.8
 2.5 0.15 4
除菌过滤生物溶液 GVWP 0.22 亲水 
≥3.45
 6.7 2 4
澄清过滤生物溶液

HVLP

DVPP

0.45

0.45

亲水

亲水

 
≥1.55
≥1.10

29

69

4

9

4

4
澄清过滤生物溶液；颗粒监测 SVLP 5 亲水 
≥0.2
 288 32 4
空气除菌，气体除菌 VVHP 0.1 疏水 
≥4.8
 3 150
空气除菌，气体除菌，溶剂过滤 GVHP 0.22 疏水 
≥1.24
 15 16 150
空气净化，气体过滤，溶剂过滤 HVHP 0.45 疏水 
≥0.56
 35 20 150

*对应目录编号的前四位

订货信息：

订购信息

孔径，um      滤膜直径，mm    数量/包装    目录编号

亲水性Durapore表面滤膜

0.22          13            100pk       GVWP 013 00  

              25            100pk       GVWP 025 00

              47            100pk       GVWP 047 00

              50            100pk       GVWP 050 00

              90            50pk        GVWP 090 50

              100           50pk        GVWP 100 50

              142           50pk        GVWP 142 50

附件

滤膜镊子，平头，不锈钢       1         XX62 000 06

*圆片膜 SVWG 047 00 具有网格表面

Ap219

发表于由

Ap219CAS号： 779282-36-9分子式： C28H34O2P分子量： 433.6描述纯度储存/保存方法参考文献

产品描述
描述
AP39 (Item No. 17100) is a compound used to increase the levels of hydrogen sulfide (H2S) within mitochondria.1 It consists of a mitochondria-targeting motif (triphenylphosphonium) coupled to an H2S-donating moiety (dithiolethione) by an aliphatic linker. AP219 is a control compound for AP39, containing the triphenylphosphonium scaffold but lacking the H2S-releasing portion.1
纯度
≥98%
储存/保存方法
Store at -20℃
参考文献
参考文献
1.Szczesny, B.,Módis, K.,Yanagi, K., et al. AP39, a novel mitochondria-targeted hydrogen sulfide donor, stimulates cellular bioenergetics, exerts cytoprotective effects and protects against the loss of mitochondrial DNA integrity in oxidatively stressed endothelial cells in vitro. Nitric Oxide: Biology and Chemistry 41, 120-130 (2014).

分子结构图

Ap219

AP1002500Millipore密理博25mm吸收垫ABSORBANT PADS AP1002500

发表于由

【简单介绍】

Millipore密理博25mm吸收垫ABSORBANT PADS AP1002500，Cellulose support pads are used to reinforce filters in Millipore’s monitors for contamination analysis.

【详细说明】

Millipore密理博25mm吸收垫ABSORBANT PADS AP1002500

描述
产品目录编号 AP1002500
描述 吸收垫，25 mm
产品信息
过滤器代码 AP10
过滤器颜色 白色
过滤器类型 深层滤膜
应用
应用 Cellulose support pads are used to reinforce filters in Millipore's monitors for contamination analysis. When saturated with growth medium, they can also be used for culturing microorganisms on membranes. Comes in a pack of 100.
生物信息
可湿润性 亲水
理化信息
孔径 Not Applicable
水流量
  • 5.8 mL/min x cm²
尺寸
过滤器表面 光面
过滤器直径 (⌀) 25 mm
材料信息
化学
  • Cellulose Fiber
包装信息
数量 100

AP1003700Millipore密理博37mm吸收垫AP1003700

发表于由

【简单介绍】

Millipore密理博37mm吸收垫AP1003700，100PK，白色，深层滤膜，亲水，光面。Cellulose support pads are used to reinforce filters in Millipore’s monitors for contamination analysis. When saturated with growth medium.

【详细说明】

Millipore密理博37mm吸收垫AP1003700

描述
产品目录编号 AP1003700
描述 吸收垫，37 mm
产品信息
过滤器代码 AP10
过滤器颜色 白色
过滤器类型 深层滤膜
应用
应用 Cellulose support pads are used to reinforce filters in Millipore's monitors for contamination analysis. When saturated with growth medium, they can also be used for culturing microorganisms on membranes. Comes in a pack of 100.
生物信息
可湿润性 亲水
理化信息
孔径 Not Applicable
水流量
  • 5.8 mL/min x cm²
尺寸
过滤器表面 光面
过滤器直径 (?) 37 mm
材料信息
化学
  • Cellulose Fiber
包装信息
数量 100

AP1504700Millipore密理博AP1504700含有黏合剂的玻璃纤维膜47mm

发表于由

【简单介绍】

Millipore密理博AP1504700含有黏合剂的玻璃纤维膜47mm，含黏合剂树脂的 Millipore 滤膜具有出众的湿强度，是定性分析和预过滤*的选择，特别适用于严重污染的液体。 它们还被广泛用于水溶液的澄清过滤。

【详细说明】

Millipore密理博AP1504700含有黏合剂的玻璃纤维膜47mm

含黏合剂树脂的 Millipore 滤膜具有出众的湿强度，是定性分析和预过滤*的选择，特别适用于严重污染的液体。 它们还被广泛用于水溶液的澄清过滤。

Millipore密理博AP1504700含有黏合剂的玻璃纤维膜47mm描述
产品目录编号 AP1504700
描述 含有黏合剂的玻璃纤维膜，AP15，47 mm
产品信息
过滤器代码 AP15
过滤器颜色 白色
zui高工作温度 100 °C
过滤器类型 深层滤膜
应用
应用 This is a 47 mm hydrophilic Glass Fiber with Binder Resin filter with a 1.0 um ( 1 micron filter ) pore size. This hydrophilic glass fiber filter is a recommended prefilter for 0.9 to 8um filters, especially for proteinaceious & heavily contaminated liquids.
生物信息
可湿润性 亲水
理化信息
孔径 1.0 µm
孔隙率% 90%
水流量
  • 1.6 mL/min x cm²
尺寸
过滤器表面 光面
厚度 790 µm
过滤器直径 (?) 47 mm
材料信息
化学
  • Glass Fiber with Binder Resin
包装信息
数量 100

AP24534；Ponatinib

发表于由

AP24534；PonatinibCAS号： 943319-70-8分子式： C29H27F3N6O分子量： 532.56描述纯度储存/保存方法可溶性/溶解性靶点In vitro(体外研究)In vivo(体内研究)参考文献

产品描述
描述

Ponatinib (AP24534) is a novel, potent multi-target inhibitor of Abl, PDGFRα, VEGFR2, FGFR1 and Src with IC50 of 0.37 nM, 1.1 nM, 1.5 nM, 2.2 nM and 5.4 nM, respectively.
纯度
98%
储存/保存方法
Store at -20℃ for one year（Powder）；Store at 2-4℃ for two weeks；Store at -20℃ for six months after dissolution.
基本信息
可溶性/溶解性
Soluble in DMSO
生物活性
靶点
Abl ,PDGFRα ,VEGFR2 ,FGFR1 ,c-Src
In vitro(体外研究)
AP24534 potently inhibits native Abl, AblT315I, and other clinically important Abl kinase domain mutants with IC50 of 0.30 nM–2 nM. AP24534 doesn’t inhibit Aurora kinase family members, nor does it inhibit insulin receptor or CDK2/cyclin E. AP24534 inhibits proliferation of Ba/F3 cells expressing Bcr-Abl with IC50 of 0.5 nM, as well as Ba/F3 cells expressing a range of Bcr-Abl mutants with IC50 of 0.5 nM–36 nM. The inhibition of proliferation by AP24534 is correlated with induction of apoptosis. In leukemic cell lines containing activated forms of FLT3, KIT, FGFR1, and PDGFRα receptors, AP24534 potently inhibits receptor phosphorylation and cellular proliferation with IC50 of 0.3 nM to 20 nM. In MV4-11 (FLT3-ITD(+/+)) but not RS4;11 (FLT3-ITD(–/–)) AML cells, AP24534 inhibits FLT3 signaling and induced apoptosis at less than 10 nM. AP24534 inhibits viability of primary leukemic blasts from a FLT3-ITD positive AML patient with IC50 of 4 nM but not those from patients with AML expressing native FLT3. In Ba/F3 cells engineered to express activated FGFR1-4, AP24534 potently inhibits FGFR-mediated signaling and viability with IC50 lower than 40 nM. In cell lines representing multiple tumor types (endometrial, bladder, gastric, breast, lung, and colon), and containing FGFRs dysregulated by a variety of mechanisms, AP24534 inhibits FGFR-mediated signaling with IC50 less than 40 nM and inhibits cell growth with IC50 of 7 nM–181 nM.
In vivo(体内研究)
In a mouse xenograft model of Ba/F3 cells expressing native Bcr-Abl, AP24534 (2.5 mg/kg and 5 mg/kg) prolongs mice median survival. In the xenograft model of Ba/F3 Bcr-AblT315I, AP24534 (10 mg/kg–50 mg/kg) significantly suppresses tumor growth. AP24534 (30 mg/kg) decreases the phosphorylated Bcr-Abl and phosphorylated CrkL levels in the tumors.
参考文献
参考文献
  • 1. O’Hare T, et al. Cancer Cell, 2009, 16(5), 401-412.
  • 2. Huang WS, et al. J Med Chem, 2010, 53(12), 4701-4719.
    		•

    分子结构图

    AP24534；Ponatinib

    AP26113-analog

    发表于由

    AP26113-analogCAS号： 1197958-12-5分子式： C26H34ClN6O2P分子量： 529.01描述纯度储存/保存方法别名外观可溶性/溶解性靶点In vitro(体外研究)

    产品描述
    描述

    AP26113-analog (ALK-IN-1) is an analog of AP26113 which is a potent and selective ALK inhibitor. It is also an inhibitor of EGFR.
    纯度
    >98%
    储存/保存方法
    Store at -20℃ for one year（Powder）；Store at 2-4℃ for two weeks；Store at -20℃ for six months after dissolution.
    基本信息
    别名
    布格替尼类似物;ALK-IN-1；AP26113
    外观
    Light yellow powder
    可溶性/溶解性
    Ethanol ：98 mg/mL (185.3 mM)
    DMSO ：42 mg/mL (79.4 mM)
    生物活性
    靶点
    ALK
    In vitro(体外研究)
    Brigatinib and AP26113-analog have similar potency against the triple-mutant EGFR with IC50 values of <100 nM. AP26113-analog suppresses phosphorylation of EGFR and its downstream signalling pathway in cells expressing all types of EGFR mutations.

    分子结构图

    AP26113-analog

    AP标记山羊抗小鼠IgG

    发表于由

    AP标记山羊抗小鼠IgG

    货号：BL021A

    规格：0.1ml

    品牌：Biosharp

    山羊抗小鼠IgG-AP

    Goat Anti-Mouse IgG, Alkaline Phosphatase Conjugated, H+L 

    纯化方式：亲和纯化

    浓度：0.6mg/ml

    规格：原装进口为1.0ml          进口分装为0.1ml （另加0.1ml甘油）

    稀释范围：1:5,000 – 1:50,000 for ELISA and Western blotting

    缓冲液：0.01M Tris-HCl、0.25M NaCl,、pH 8.0 

    防腐剂：0.05% Sodium Azide

    分装及储存：

    1、在进口原装抗体分装时,加入50%灭菌的甘油,能延长试剂的保存期。但应注意的是,此时抗体的浓度及稀释比例应降低一倍。

    2、初次使用参考推荐的稀释比例,实际实验操作过程中需根据抗原和抗体的具体情况适当调节二抗的稀释比例。但应注意,需现用现配,因为稀释后抗体的有效活性会很快降低。

    3、-20℃保存,避免反复冻融。

    保存条件：-20℃保存一年

    货号 BL021A
    规格 0.1ml
    品牌 Biosharp
    说明书下载 点击下载