Enhanced Cell Counting Kit-8 (增强型CCK-8试剂盒)

Enhanced Cell Counting Kit-8 (增强型CCK-8试剂盒)

¥750.00

货号:BL1055C

规格:1000T

品牌:Jinpan

商品详情:

产品简介:

CCK-8细胞增殖毒性检测试剂盒(增强型),是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒比普通的CCK-8试剂盒具有更好的检测灵敏度和更宽的线性范围。WST-8是一种类似于MTT的化合物,在电子耦合试剂1-Methoxy PMS存在的情况下,可以被还原生成橙黄色水溶性的甲臜(Formazan)。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。

 

使用方法:

1、96孔板中接种细胞悬液(100 ul /),通常细胞增殖实验每孔约2000个细胞,细胞毒性实验每孔约5000个细胞,具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等因素决定。

2、按照实验需要,进行培养并给予0-10ul特定的药物刺激,处理一段适当的时间(例如: 6122448小时)

3、每孔加入10ul CCK-8溶液。如果起始的培养体积为200ul,则需加入20ul CCK-8溶液,以此类推。可以用加相应量细胞培养基和CCK-8但不加细胞的孔作为空白对照,若担心所使用的药物会干扰检测,需设置加相应量细胞培养液、药物和CCK-8溶液但不加细胞的孔作为空白对照。

4、在细胞培养箱内继续孵育1-4小时,具体时间可以通过预实验确定。预实验时可以在0.5124小时后分别用酶标仪检测,然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验

5、用酶标仪测定在450 nm处的吸光值,若无450nm滤光片,可以使用420-480nm的滤光片。如果样品为高浑浊度的细胞悬液,可以使用大于600nm的波长,例如650nm,作为参考波长进行双波长测定

 

实验结果分析:

细胞活力 = [OD(加药) – OD(空白)] / [OD(0加药) – OD(空白)]×100%

抑制率 = [OD(0加药) – OD(加药)] / [OD(0加药) – OD(空白)]×100%

OD(加药):具有细胞、培养基、CCK-8溶液和药物溶液的孔的吸光值

OD(空白):具有培养基、CCK-8溶液,没有细胞的孔的吸光值

OD(0加药):具有细胞、培养基、CCK-8溶液,没有药物溶液的孔的吸光值

 

注意事项:

1、使用96 孔板进行检测时,如果细胞培养时间较长,请注意蒸发问题。可将96 孔板外围一圈加培养基、水或PBS 保湿。同时,可以把96 孔板置于培养箱内靠近水盘的位置

以缓解蒸发。

2、培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而不同。在正式实验前,建议先做预实验摸索铺板的细胞数量以及加入CCK-8 试剂后的培养时间。

3、铺板时请注意保证每个孔细胞数量均匀,建议铺板过程中注意时常混匀,防止因细胞沉淀造成不均匀。加入CCK-8 后请前后左右轻轻晃动培养板数次,使培养基和CCK-8 溶液充分混匀。

4、本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应,如果待测物质有氧化性或还原性,可在加CCK-8 之前更换新鲜培养基,去掉药物的影响。若药物影响比较小的情况可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。

5、加入CCK-8 时,如果细胞培养时间较长,培养基颜色或pH 值已变化,建议换用新鲜的培养基。

6、用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡,否则会干扰测定。

7、本试剂盒系无菌环境生产。在使用过程中,请在生物安全柜内无菌操作,避免污染。

8、为了您的健康和安全,请穿着实验服并戴一次性手套或乳胶手套操作。

 

保存方法:

    4避光保存,有效期一年。长期保存建议-20℃保存,但不能反复冻融。

货号 BL1055C
规格 1000T
品牌 Jinpan
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细胞增殖检测试剂Premix WST-1 Cell Proliferation Assay System酶试剂盒Takara Clontech

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细胞增殖检测试剂Premix WST-1 Cell Proliferation Assay System
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara MK400 Premix WST-1 Cell Proliferation Assay System 2,500 次 ¥3,507 细胞增殖检测试剂Premix WST-1 Cell Proliferation Assay System 细胞增殖检测试剂Premix WST-1 Cell Proliferation Assay System 细胞增殖检测试剂Premix WST-1 Cell Proliferation Assay System
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■ 制品内容
Premix WST-1 25 ml
 
■ 制品说明
本制品是通过吸光度比色分析法对细胞增殖和细胞活力进行检测的试剂。其检测原理是利用活细胞线粒体中的琥珀酸四唑盐还原酶 (succinate-tetrazolium reductase) 将四唑盐WST-1还原为水溶性formazan dye,进而通过吸光度比色分析法进行检测。此方法取代了[3H]-thymide掺入法,实现了非放射性检测。琥珀酸四唑盐还原酶存在于线粒体中,只有在活细胞中才具有活性,培养基中添加的四唑盐在琥珀酸四唑盐还原酶的作用下,还原生成formazan dye,活细胞数越多,样品中的琥珀酸四唑盐还原酶活性就越强,生成的formazan dye就越多,生成的formazan dye数量与活细胞数成线性正比关系。使用本制品检测时,无需洗涤细胞和使用放射性同位素,从微量培养开始,即可使用酶标仪在同一个微孔板上测定其光吸收值。本制品通过检测细胞活力,可以用于药物敏感性分析和药物筛选。
 
■ 保存
-20℃避光保存。
 
■ 特点
◇ 无需使用放射性同位素。
◇ 无需使用有机溶剂来溶解反应生成的formazan dye。
◇ 吸光度值与活细胞数成线性正比关系。
◇ 与MTT法相比,灵敏度更高。
◇ 可在同一个微孔板上进行不同反应时间的结果测定。
 
■ 用途
◇ 检测生长因子、cytokines、mitogens、nutrients等细胞增殖能力的影响。
◇ 分析抗癌药等具有细胞毒性和抑制细胞生长的化合物。
◇ 评估具有抑制细胞生长作用的抗体与生理介质。
 
 

页面更新:2023-11-01 16:30:36

细胞增殖检测试剂Premix WST-1 Cell Proliferation Assay System酶试剂盒Takara Clontech

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细胞增殖检测试剂Premix WST-1 Cell Proliferation Assay System
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Takara MK400 Premix WST-1 Cell Proliferation Assay System 2500 Tests ¥3,507 细胞增殖检测试剂Premix WST-1 Cell Proliferation Assay System 细胞增殖检测试剂Premix WST-1 Cell Proliferation Assay System 细胞增殖检测试剂Premix WST-1 Cell Proliferation Assay System
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Premix WST-1 25 ml
 
■ 制品说明
本制品是通过吸光度比色分析法对细胞增殖和细胞活力进行检测的试剂。其检测原理是利用活细胞线粒体中的琥珀酸四唑盐还原酶 (succinate-tetrazolium reductase) 将四唑盐WST-1还原为水溶性formazan dye,进而通过吸光度比色分析法进行检测。此方法取代了[3H]-thymide掺入法,实现了非放射性检测。琥珀酸四唑盐还原酶存在于线粒体中,只有在活细胞中才具有活性,培养基中添加的四唑盐在琥珀酸四唑盐还原酶的作用下,还原生成formazan dye,活细胞数越多,样品中的琥珀酸四唑盐还原酶活性就越强,生成的formazan dye就越多,生成的formazan dye数量与活细胞数成线性正比关系。使用本制品检测时,无需洗涤细胞和使用放射性同位素,从微量培养开始,即可使用酶标仪在同一个微孔板上测定其光吸收值。本制品通过检测细胞活力,可以用于药物敏感性分析和药物筛选。
 
■ 保存
-20℃避光保存。
 
■ 特点
◇ 无需使用放射性同位素。
◇ 无需使用有机溶剂来溶解反应生成的formazan dye。
◇ 吸光度值与活细胞数成线性正比关系。
◇ 与MTT法相比,灵敏度更高。
◇ 可在同一个微孔板上进行不同反应时间的结果测定。
 
■ 用途
◇ 检测生长因子、cytokines、mitogens、nutrients等细胞增殖能力的影响。
◇ 分析抗癌药等具有细胞毒性和抑制细胞生长的化合物。
◇ 评估具有抑制细胞生长作用的抗体与生理介质。
 
 

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Luna® Cell Ready 一步法 RT-qPCR 试剂盒 #E3030S 100 rxns-NEB酶试剂 New England Biolabs

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs(NEB)酶试剂全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – qPCR & RT-qPCR

Luna® Cell Ready 一步法 RT-qPCR 试剂盒                              收藏

货 号
规 格
价 格(元)
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#E3030S
100 rxns
12,869.00

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特性

无需纯化,直接从细胞到 RNA 定量

•  试剂盒包含 100 次裂解反应和 500 次染料一步法 RT-qPCR 反应

   有效裂解多种细胞系的 10 10 万个细胞

   仅需 15 分钟即可完成细胞裂解、RNA 释放和基因组 DNA 去除

  联合使用 LunaWarmStart® RT Hot Start Taq,提高了热稳定性,且可在室温下建立反应体系

   可单独购买裂解模块:Luna Cell Ready 裂解模块(NEBE3032

概述

 Luna Cell Ready 染料一步法 RT-qPCR 试剂盒为直接染料法 RNA 检测和定量提供了所有必要的组分,且无需进行 RNA 提取和纯化。Luna Cell Ready 染料一步法 RT-qPCR 试剂盒包括:1Luna Cell Ready 裂解模块(NEBE3032S)和 2Luna 通用一步法 RT-qPCR KitNEBE3005L)。

细胞培养常用于替代活体生物来分析基因表达或对治疗的反应。传统上使用柱提法或化学试剂法从处理过的细胞中提取和纯化 RNA

 

Luna Cell Ready 裂解模块整合了 DNase I Luna Cell Ready 蛋白酶的功能,仅需 15 分钟即可完成细胞裂解、RNA 释放和基因组 DNA 去除。裂解模块包含独特的 Luna Cell Ready RNA 保护试剂,可在细胞裂解过程中保持 RNA 完整性。50 µl 裂解体系下可对 10-10 万个细胞进行裂解反应。2 µl 裂解产物 (相当于 0.2–4000 个细胞的 RNA 即可实现 20 µl 体系的 RT-qPCR 反应。与其它 Luna 产品一样,裂解缓冲液包含惰性蓝色示踪染料,使整个加样流程可视化。 

Luna 通用一步法 RT-qPCR 试剂盒可兼容大多数实时荧光定量仪器的 SYBR/FAM 荧光通道,进行目标 RNA 的实时定量分析。在该试剂盒中,联合使用热启动 Taq DNA 聚合酶与新型 Luna WarmStart 反转录酶,通过适配体可逆抑制来双重控制酶活性。Luna 通用一步法 RT-qPCR 试剂盒可以直接将 Luna Cell Ready 裂解模块制备的细胞裂解物中的 RNA 转录本进行检测和定量。 

下表列出的细胞系可使用 Luna Cell Ready 裂解模块裂解。这些细胞进行 5 log 梯度稀释(100000-10 细胞/50 µl 裂解反应),并取 1 ul 裂解产物进行 20 µl 体系的一步法 RT-qPCR 反应。每个细胞系的线性结果区域显示在最后一列。此外,经测试一些昆虫细胞系也能用上述裂解液裂解。

 

表一:经验证过的细胞系

 

细胞系

 

特性

菌种

50 ml 裂解体系中的细胞数量

A549

Adherent

H. sapiens, Lung, carcinoma

10 – 100,000

HEK293

Adherent

H. sapiens, Kidney

10 – 100,000

HeLa

Adherent

H. sapiens, Cervix, adenocarcinoma

10 – 100,000

HepG2

Adherent

H. sapiens, Liver, carcinoma

10 – 100,000

NCI-H460

Adherent

H. sapiens, Lung, carcinoma

10 – 100,000

SK-N-SH

Adherent

H. sapiens, Brain, Neuroblastoma

10 – 100,000

U2Os

Adherent

H. sapiens, Bone, osteosarcoma

10 – 10,000

Jurkat

Suspension

H. sapiens, T lymphocyte, leukemia

10 – 100,000

K-562

Suspension

H. sapiens, Lymphoblast, leukemia

10 – 1,000

 

图一:Luna Cell Ready 一步法 RT-qPCR 实验流程

Luna® Cell Ready 一步法 RT-qPCR 试剂盒                               #E3030S 100 rxns

Luna Cell Ready 一步法 RT-qPCR 试剂盒提供了直接从细胞(50 µl 体系可裂解高达 10 个细胞)到 RNA 检测和定量的所有组分。Luna Cell Ready 裂解模块整合了 DNase I Luna Cell Ready 蛋白酶的功能,仅需 15 分钟即可完成细胞裂解、RNA 释放和基因组 DNA 去除。2 µl 裂解产物(相当于 0.2–4000 个细胞中的 RNA)即可实现 20 µl 体系的 RT-qPCR 反应。

图二:Luna Cell Ready 染料一步法 RT-qPCR 试剂盒可直接对 5-log 梯度稀释细胞的裂解物进行灵敏精准的 RNA 定量

Luna® Cell Ready 一步法 RT-qPCR 试剂盒                               #E3030S 100 rxns

梯度稀释的 A549 细胞(100,000-10)使用标准反应条件(37°C 裂解 10 分钟,25°C 灭活 5 分钟),在 50 µl Luna Cell Ready 裂解体系(NEBE3032)中裂解。使用 Luna 通用一步法 RT-qPCR 试剂盒(NEBE3005)加入 1 μl 细胞裂解物(相当于 20 μl RT-qPCR 反应体系中 0.2-2,000 个细胞)对目的基因(GOI)进行定量,每个浓度的样品都做了重复。结果展示了两个高频靶标(A):β-actin 和一个低频靶标(B):SMG1。右图展示了扩增效率(E)和线性关系(R2)。

 

图三:Luna Cell Ready 染料一步法 RT-qPCR 试剂盒与提纯 RNA 均可对 5-logs 细胞梯度样品进行精准可信的 RNA 定量

Luna® Cell Ready 一步法 RT-qPCR 试剂盒                               #E3030S 100 rxns

 

梯度稀释的 A549 细胞(100,000-10)使用标准反应条件(37°C 裂解 10 分钟,25°C 灭活 5 分钟),在 50 µl Luna Cell Ready 裂解体系(NEBE3032)中裂解,也可使用柱提法提纯 RNAA.使用 Luna 通用一步法 RT-qPCR 试剂盒(NEBE3005)对目的基因(GOI)进行定量,加入 1 μl 细胞裂解物(实心圆)或纯化的 RNA(空心圆)(相当于 20 µl RT-qPCR 反应中有 0.2-2,000 个细胞),每个浓度的样品都做了重复。左图:在 5-logs 细胞梯度中检测高频靶标 β-actin和两个低频靶标 ARF3 Tubulin。每个靶标的扩增效率在图中左下方显示。B. A 图中 5-log 细胞梯度稀释样品的目标基因相对于 β-actin Cq 值(ΔCqGOI)),平均 Cqs 通过横线指示。

 

图四:Luna Cell Ready 染料一步法 RT-qPCR 试剂盒的扩增效率及灵敏度均优于其它市售的细胞裂解一步法 RT-qPCR 试剂盒。

 

Luna® Cell Ready 一步法 RT-qPCR 试剂盒                               #E3030S 100 rxns

梯度稀释的 A549 细胞(100,000-10)使用标准反应条件,在 50 µl Luna Cell Ready 裂解体系(NEBE3032)中裂解。相同的样品使用 Bio-RadSingleShot SYBR Green One-Step Kit, #172-5095)、QiagenSingleShot SYBR Green One-Step Kit, #172-5095)和 Thermo FisherCells-to-CT 1-Step PowerSYBR Green Kit, A25600)并分别按照厂家说明书进行裂解。然后使用每个试剂盒中的一步法 RT-qPCR 模块,加入 1 μl 细胞裂解物(相当于 20 μl RT-qPCR 反应体系中 0.2-2,000 个细胞),对目的基因进行定量,每个浓度的样品都做了重复。对于所有试剂盒,5-log 梯度稀释细胞均显示了 β-actin,(高频靶标)和 RPL32Tubulin (低频靶标)的扩增。为了使结果标准化,将总荧光的 12 设置为阈值。图中显示了扩增效率(E)及最高与最低的 Cq 值。

 

图五:对 24 个靶标测试显示,Luna Cell Ready 染料一步法 RT-qPCR 试剂盒与其它市售的细胞裂解一步法 RT-qPCR 试剂盒相比,灵敏度最高。

Luna® Cell Ready 一步法 RT-qPCR 试剂盒                               #E3030S 100 rxns

2500 A549 细胞,使用标准反应条件,在 50 µl Luna Cell Ready 裂解体系(NEBE3032)中裂解。或使用市售的 Bio-RadSingleShot SYBR Green One-Step Kit, #172-5095)、QiagenSingleShot SYBR Green One-Step Kit, #172-5095)和 Thermo FisherCells-to-CT 1-Step PowerSYBR Green Kit, A25600)并分别按照厂家说明书进行裂解。每个试剂盒做两个生物重复。然后使用来自每个试剂盒的一步法 RT-qPCR 模块,加入 1 μl 细胞裂解物(相当于 20 µl RT-qPCR 反应中 50 个细胞),对 24 个目标基因进行定量,每个生物样品均做重复。结果显示了 NEB (实心橙色圆圈),BioRad(空心正方形),Qiagen(空心三角形)和 Thermo Fisher(十字形)的平均 Cqs。为了使结果标准化,将总荧光的 12 设置为阈值。Luna Cell Ready 染料一步法 RT-qPCR 试剂盒显示了不同表达水平下 23/24 的基因 Cq 值最早,平均比 Bio-Rad 2.3 Cq,比 Qiagen 3.8 Cq,比 Thermo Fisher 3.6 Cq

 

试剂盒组分

随该产品提供的试剂

 

 

储存(°C

 

浓度

Luna Cell Ready Lysis Buffer

-20

2 X

Luna Cell Ready RNA Protection Reagent

-20

25 X

Luna Cell Ready Protease

-20

25 X

Luna Cell Ready Stop Solution

-20

10 X

DNase I RNase-free

-20

10 X

Luna® WarmStart® RT Enzyme Mix

-20

20 X

Luna® Universal One-Step Reaction Mix

-20

2 X

Nuclease-free Water

-20

 

 

实验需要但不提供的试剂耗材

   磷酸盐缓冲液(PBS

   目标特异性引物

   细胞

   Eppendorf 管,PCR 联管

   PCR

   qPCR 仪器

  移液器和枪头(为减少交叉污染,应使用带滤芯的枪头)

   储存温度

  -20

Luna® Cell Ready 探针一步法 RT-qPCR 试剂盒 #E3031S 100 rxns-NEB酶试剂 New England Biolabs

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs(NEB)酶试剂全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – qPCR & RT-qPCR

Luna® Cell Ready 探针一步法 RT-qPCR 试剂盒                              收藏

货 号
规 格
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#E3031S
100 rxns
12,199.00

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特性

 无需纯化,直接从细胞到 RNA 定量

   试剂盒包含 100 次裂解反应和 500 次探针一步法 RT-qPCR 反应

   有效裂解多种细胞系的 10 10 万个细胞

  仅需 15 分钟即可完成细胞裂解、RNA 释放和基因组 DNA 去除

   配合使用 LunaWarmStart® RT Hot Start Taq,提高了热稳定性且可在室温下建立反应体系

   可单独购买裂解模块:Luna Cell Ready 裂解模块(NEBE3032

 

概述

 Luna Cell Ready 探针一步法 RT-qPCR 试剂盒为直接探针法 RNA 检测和定量提供了所有必要的组分,且无需进行 RNA 提取和纯化。Luna Cell Ready 探针一步法 RT-qPCR 试剂盒包含两个模块:1Luna Cell Ready 裂解模块(NEBE3032S)和 2Luna 通用探针一步法 RT-qPCR KitNEBE3006L)。

细胞培养常用于替代活体生物来分析基因表达或对治疗的反应。传统上使用柱提法或化学试剂法从处理过的细胞中提取和纯化 RNA

 

Luna Cell Ready 裂解模块整合了 DNase I Luna Cell Ready 蛋白酶的功能,仅需 15 分钟即可完成细胞裂解、RNA 释放和基因组 DNA 去除。裂解模块包含独特的 Luna Cell Ready RNA 保护试剂,可在细胞裂解过程中保持 RNA 完整性。50 µl 裂解体系下可对 10-10 万个细胞进行裂解反应。2 µl 裂解产物 (相当于 0.2–4000 个细胞的 RNA 即可实现 20 µl 体系的 RT-qPCR 反应。与其它 Luna 产品一样,裂解缓冲液包含惰性蓝色示踪染料,使整个加样流程可视化。 

Luna 通用探针一步法 RT-qPCR 试剂盒可兼容大多数实时荧光定量仪器的各个通道,进行目标 RNA 的实时定量分析。在该试剂盒中,联合使用热启动 Taq DNA 聚合酶与新型 Luna WarmStart 反转录酶,通过适配体可逆抑制来双重控制酶活性。Luna 通用探针一步法 RT-qPCR 试剂盒可以直接将 Luna Cell Ready 裂解模块制备的细胞裂解物中的 RNA 转录本进行检测和定量(单重或多重)。

下表列出的细胞系可使用 Luna Cell Ready 裂解模块裂解。这些细胞进行 5 log 梯度稀释(100000-10 细胞/50 µl 裂解反应),并取 1 ul 裂解产物进行 20 µl 体系的一步法 RT-qPCR 反应。每个细胞系的线性结果区域显示在最后一列。此外,经测试一些昆虫细胞系也能用上述裂解液裂解。

 

 

表一:经验证过的细胞系

 

细胞系

 

特性

菌种

50 ml 裂解体系中的细胞数量

A549

Adherent

H. sapiens, Lung, carcinoma

10 – 100,000

HEK293

Adherent

H. sapiens, Kidney

10 – 100,000

HeLa

Adherent

H. sapiens, Cervix, adenocarcinoma

10 – 100,000

HepG2

Adherent

H. sapiens, Liver, carcinoma

10 – 100,000

NCI-H460

Adherent

H. sapiens, Lung, carcinoma

10 – 100,000

SK-N-SH

Adherent

H. sapiens, Brain, Neuroblastoma

10 – 100,000

U2Os

Adherent

H. sapiens, Bone, osteosarcoma

10 – 10,000

Jurkat

Suspension

H. sapiens, T lymphocyte, leukemia

10 – 100,000

K-562

Suspension

H. sapiens, Lymphoblast, leukemia

10 – 1,000

 图一:Luna Cell Ready 一步法 RT-qPCR 实验流程

 Luna® Cell Ready 探针一步法 RT-qPCR 试剂盒                               #E3031S 100 rxns

Luna Cell Ready 一步法 RT-qPCR 试剂盒提供了直接从细胞(50 µl 体系可裂解高达 10 万个细胞)到 RNA 检测和定量的所有组分。Luna Cell Ready 裂解模块整合了 DNase I Luna Cell Ready 蛋白酶的功能,仅需 15 分钟即可完成细胞裂解、RNA 释放和基因组 DNA 去除。2 µl 裂解产物(相当于 0.2–4000 个细胞中的 RNA)即可实现 20 µl 体系的 RT-qPCR 反应。 

 

图二:Luna Cell Ready 探针一步法 RT-qPCR 试剂盒可直接对 5-log 梯度稀释细胞的裂解物进行灵敏精准的 RNA 定量

 

Luna® Cell Ready 探针一步法 RT-qPCR 试剂盒                               #E3031S 100 rxns

梯度稀释的 A549 细胞(100,000-10)使用标准反应条件(37°C 裂解 10 分钟,25°C 灭活 5 分钟),在 50 µl Luna Cell Ready 裂解体系(NEBE3032)中裂解。使用 Luna 通用探针一步法 RT-qPCR 试剂盒(NEBE3006),加入 1 μl 细胞裂解物(相当于 20 μl RT-qPCR 反应体系中 0.2-2,000 个细胞)对目的基因进行定量,每个浓度的样品都做了重复。结果展示了两个高频靶标:β-actinTexas Red)和 GAPDHFAM),一个低频靶标:RPL32HEX),的多重结果(A)和单重结果(B),以及相应的扩增效率(E)和线性关系(R2)。(C)所有三个目标的多重和单重的 Cq 叠加证明了这些结果的一致性。

三:Luna Cell Ready 探针一步法 RT-qPCR 试剂盒与提纯 RNA 均可对 5-logs 细胞梯度样品进行精准可信的 RNA 定量

 Luna® Cell Ready 探针一步法 RT-qPCR 试剂盒                               #E3031S 100 rxns

梯度稀释的 A549 细胞(100,000-10)使用标准反应条件(37°C 裂解 10 分钟,25°C 灭活 5 分钟),在 50 µl Luna Cell Ready 裂解体系(NEBE3032)中裂解,也可使用柱提法提纯 RNAA.使用 Luna 通用探针一步法 RT-qPCR 试剂盒(NEBE3006)对目的基因进行定量,加入 1 μl 细胞裂解物(实心圆,左)或纯化的 RNA(空心圆,右)(上样量相当于 20 µl RT-qPCR 反应中有 0.2-2,000 个细胞),每个浓度的样品都做了重复。在 5-logs 细胞梯度中检测高频靶标 β-actin 和两个低频靶标 ARF3 Tubulin。每个靶标的扩增效率在图中左下方显示。

图四:Luna Cell Ready 染料一步法 RT-qPCR 试剂盒的扩增效率及灵敏度均优于其它市售的细胞裂解一步法 RT-qPCR 试剂盒。

Luna® Cell Ready 探针一步法 RT-qPCR 试剂盒                               #E3031S 100 rxns

梯度稀释的 A549 细胞(100,000-10)使用标准反应条件,在 50 µl Luna Cell Ready 裂解体系(NEBE3032)中裂解。相同的样品使用 Bio-RadSingleShot™ Probes One-Step Kit for Cell Lysis and RT-qPCR, #172-5070)、QiagenFastLane Cell Probe Kit, #216413)和 Thermo FisherCells-to-CT 1-Step TaqMan Kit, A25603并分别按照厂家说明书进行裂解。然后使用每个试剂盒中的一步法 RT-qPCR 模块,加入 1 μl 细胞裂解物(相当于 20 μl RT-qPCR 反应体系中 0.2-2,000 个细胞),对目的基因进行定量,每个浓度的样品都做了重复。5-log 梯度稀释的细胞通过多重实验测试了 β-actin Tye)、GAPDH FAM)和 RPL32 Cy5的扩增。为了使结果标准化,将每个试剂盒总荧光值的 10%(Tye)、5%(FAM)、15%(Cy5)设置为阈值。图中显示了扩增效率(E)及最高与最低的 Cq 值。

试剂盒组分

随该产品提供的试剂

 

储存(°C

浓度

Luna Cell Ready Lysis Buffer

-20

2 X

Luna Cell Ready RNA Protection Reagent

-20

25 X

Luna Cell Ready Protease

-20

25 X

Luna Cell Ready Stop Solution

-20

10 X

DNase I RNase-free

-20

10 X

Luna® WarmStart® RT Enzyme Mix

-20

20 X

Luna® Universal Probe One-Step Reaction Mix

-20

2 X

Nuclease-free Water

-20

 

 实验需要但不提供的试剂耗材

  磷酸盐缓冲液(PBS

   目标特异性引物

   细胞

   Eppendorf

   PCR联管

   PCR

   qPCR 仪器

   移液器和枪头(为减少交叉污染,应使用带滤芯的枪头)

 储存温度

-20

Luna® Cell Ready 裂解模块 #E3032S 100 rxns-NEB酶试剂 New England Biolabs

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs(NEB)酶试剂全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – qPCR & RT-qPCR

Luna® Cell Ready 裂解模块                              收藏

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#E3032S
100 rxns
6,569.00

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  • isoschizomers     |
  • compatible ends     | 
  • single letter code

特性

 ·仅需 15 分钟即可完成细胞裂解、RNA 释放和基因组 DNA 去除
 ·一次反应高效可裂解 10 至 10 万个细胞,适用于众多细胞系
 ·与其它 RNA 提取方法相比减少了样品损失,尤其对于低细胞起始量。
 ·兼容高通量应用,可在室温下进行细胞裂解
 ·与 Luna 通用一步法 RT-qPCR 试剂盒搭配使用时性能最佳:NEB#E3005(染料法)或 NEB#E3006(探针法) 
 ·提供完整的细胞裂解和一步法 RT-qPCR 试剂盒方案:NEB #E3030(染料法)或 NEB #E3031(探针法)

概述

   细胞培养常用于替代活体生物来分析基因表达或对治疗的反应。传统上使用柱提法或化学试剂法从处理过的细胞中提取和纯化 RNA.Luna Cell Ready 裂解模块无需进行传统的 RNA 提取步骤即可评估RNA表达水平,是一种快速、方便且灵敏的替代方案。该模块可同时进行细胞裂解、RNA 释放、基因组 DNA 去除,获得的细胞裂解物可直接使用Luna通用一步法 RT-qPCR 试剂盒进行 RT-qPCR 分析。与其它 Luna 产品一样,裂解缓冲液包含惰性蓝色示踪染料,使整个加样流程可视化。

下表列出的细胞系可使用 Luna Cell Ready 裂解模块裂解。这些细胞进行 5 log 梯度稀释(100000-10 细胞/50 µl 裂解反应),并取 1 ul 裂解产物进行 20 µl 体系的一步法 RT-qPCR 反应。每个细胞系的线性结果区域显示在最后一列。此外,经测试一些昆虫细胞系也能用上述裂解液裂解。

 

表一:经验证过的细胞系

细胞系

特性

菌种

50 ml 裂解体系中的细胞数量

A549

Adherent

H. sapiens, Lung, carcinoma

10 – 100,000

HEK293

Adherent

H. sapiens, Kidney

10 – 100,000

HeLa

Adherent

H. sapiens, Cervix, adenocarcinoma

10 – 100,000

HepG2

Adherent

H. sapiens, Liver, carcinoma

10 – 100,000

NCI-H460

Adherent

H. sapiens, Lung, carcinoma

10 – 100,000

SK-N-SH

Adherent

H. sapiens, Brain, Neuroblastoma

10 – 100,000

U2Os

Adherent

H. sapiens, Bone, osteosarcoma

10 – 10,000

Jurkat

Suspension

H. sapiens, T lymphocyte, leukemia

10 – 100,000

K-562

Suspension

H. sapiens, Lymphoblast, leukemia

10 – 1,000

 

图一:Luna Cell Ready 一步法 RT-qPCR 实验流程

 

Luna® Cell Ready 裂解模块                               #E3032S 100 rxns

 

Luna Cell Ready 裂解模块整合了 DNase I 和 Luna Cell Ready 蛋白酶的功能,可简单高效的进行细胞裂解,仅需 15 分钟即可完成细胞裂解、RNA 释放和基因组 DNA 去除。2 µl 裂解产物(相当于 0.2–4000 个细胞中的 RNA)即可实现 20 µl 体系的 RT-qPCR 反应。

 

试剂盒组分

 

随该产品提供的试剂

 

储存(°C

浓度

Luna Cell Ready Lysis Buffer

-20

2 X

Luna Cell Ready RNA Protection Reagent

-20

25 X

Luna Cell Ready Protease

-20

25 X

Luna Cell Ready Stop Solution

-20

10 X

DNase I RNase-free

-20

10 X

 实验需要但不提供的试剂耗材

  •    磷酸盐缓冲液(PBS
  •    目标特异性引物
  •    细胞
  •    Eppendorf
  •    PCR 联管
  •    PCR
  •    移液器和枪头(为减少交叉污染,应使用带滤芯的枪头)

    储存温度

 -20℃

监控人类细胞移植用途的抗体Engrafted Cell Markers酶试剂盒Takara Clontech

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监控人类细胞移植用途的抗体Engrafted Cell Markers
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Cellartis Y40400 STEM101 50 μg ¥2,251 监控人类细胞移植用途的抗体Engrafted Cell Markers 监控人类细胞移植用途的抗体Engrafted Cell Markers 监控人类细胞移植用途的抗体Engrafted Cell Markers
Cellartis Y40410 STEM121 50 μg ¥2,281 监控人类细胞移植用途的抗体Engrafted Cell Markers 监控人类细胞移植用途的抗体Engrafted Cell Markers 监控人类细胞移植用途的抗体Engrafted Cell Markers
Cellartis Y40420 STEM123 50 μg ¥2,246 监控人类细胞移植用途的抗体Engrafted Cell Markers 监控人类细胞移植用途的抗体Engrafted Cell Markers 监控人类细胞移植用途的抗体Engrafted Cell Markers
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监控人类细胞移植用途的抗体
(Antibodies for Detecting Human Cells Transplanted into Mice and Rats)
STEM101、STEM121、STEM123是三种小鼠来源的单克隆抗体,用于人类细胞向小鼠和大鼠移植实验中,监控细胞移植、转移、分化。
 
■ 产品特点
· STEM101 reacts specifically with the nuclear human Ku80 protein; the antibody does not cross-react with mouse or rat Ku80 in brain tissue or cell extracts
Note: STEM101 (Y40400) is not suitable for immunohistochemically staining on paraffin embedded tissue sections. We recommend using fresh frozen tissue with this antibody.
· STEM121 reacts with a human cytoplasmic protein expressed in brain, liver, pancreas, and CNS cells the antibody does not cross-react with brain tissue or cell extracts from mouse, rat, or cynomologous monkey
· STEM123 reacts specifically with human GFAP, a marker of astroglial cells; the antibody does not cross-react with brain tissue or cell extracts from mouse or rat
 
■ 产品应用
· Localization, quantification, and/or characterization of engrafted cells of human origin by immunohistochemistry and immunofluorescence
 
 
 
■ 产品详情请点击:监控人类细胞移植用途的抗体Engrafted Cell Markers
 
监控人类细胞移植用途的抗体Engrafted Cell Markers
STEM101 detects nuclei of transplanted human neural stem cells in the olfactory bulb of a mouse brain.
 
监控人类细胞移植用途的抗体Engrafted Cell Markers
STEM121 detects migration and differentiation of transplanted human neural stem cells in the hippocampus of a mouse brain.
 
监控人类细胞移植用途的抗体Engrafted Cell Markers
STEM123 detects human GFAP+ astrocytes differentiated from human neural stem cells after transplantation into a mouse brain.
 
参考文献:
1. Cummings BJ, et al. (2005) Human neural stem cells differentiate and promote locomotor recovery in spinal cord-injured mice. PNAS 102: 14069-14074.
2. Guzman R, et al. (2007) Long-term monitoring of transplanted human neural stem cells in developmental and pathological contexts with MRI. PNAS 104: 10211-10216.
3. Tamaki SJ, et al. (2009) Neuroprotection of Host Cells by Human Central Nervous System Stem Cells in a Mouse Model of Infantile Neuronal Ceroid Lipofuscinosis. Cell Stem Cell 5:310-319.
4. Salazar DL, et al. (2010) Human Neural Stem Cells Differentiate and Promote Locomotor Recovery in an Early Chronic Spinal Cord Injury NOD-scid Mouse Model. PLoS ONE 5: e12272.
5. Kelly S, et al. Transplanted human fetal neural stem cells survive, migrate, and differentiate in ischemic rat cerebral cortex. PNAS (2004) 101:11839 11844.
6. Cummings BJ, et al. Human neural stem cells differentiate and promote locomotor recovery in spinal cord-injured mice. PNAS (2005) 102: 14069-14074.
7. Tamaki SJ, et al. Neuroprotection of Host Cells by Human Central Nervous System Stem Cells in a Mouse Model of Infantile Neuronal Ceroid Lipofuscinosis. Cell Stem Cell (2009) 5:310-319.
8. Kallur T, et al. Human Fetal Cortical and Striatal Neural Stem Cells Generate Region-Specific Neurons In Vitro and Differentiate Extensively to Neurons After Intrastriatal Transplantation in Neonatal Rats. J Neurosci Res. (2006) 84:1630-1644.
9. Salazar DL, et al. Human Neural Stem Cells Differentiate and Promote Locomotor Recovery in an Early Chronic Spinal Cord Injury NOD-scid Mouse Model. PLoS ONE (2010) 5: e12272.
10. Tamaki SJ, et al. (2009) Neuroprotection of Host Cells by Human Central Nervous System Stem Cells in a Mouse Model of Infantile Neuronal Ceroid Lipofuscinosis. Cell Stem Cell 5:310-319.
11. Salazar DL, et al. (2010) Human Neural Stem Cells Differentiate and Promote Locomotor Recovery in an Early Chronic Spinal Cord Injury NOD-scid Mouse Model. PLoS ONE 5:e12272.
12. Cummings BJ, et al. (2005) Human neural stem cells differentiate and promote locomotor recovery in spinal cord-injured mice. PNAS 102: 14069-14074.
 

页面更新:2024-02-29 10:57:18

人源干细胞增殖用培养基Human Stem Cell Culture System (DEF-CS, all-in-one format)酶试剂盒Takara Clontech

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人源干细胞增殖用培养基Human Stem Cell Culture System (DEF-CS, all-in-one format)
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Cellartis Y30010 Cellartis® DEF-CS 500 Culture System 1 Kit ¥6,546 人源干细胞增殖用培养基Human Stem Cell Culture System (DEF-CS, all-in-one format) 人源干细胞增殖用培养基Human Stem Cell Culture System (DEF-CS, all-in-one format) 人源干细胞增殖用培养基Human Stem Cell Culture System (DEF-CS, all-in-one format)
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Human iPS和Human ES增殖用培养基
(DEF-CS Culture System, all-in-one format)
作为一款高端创新型的产品,Cellartis DEF-CS培养系统使得单细胞干细胞操作成为常规的操作。该产品是专门针对人类诱导干细胞(hiPS)和人类胚胎干细胞(hES)研发的高效率增殖用培养基产品体系。该产品系统为all-in-one型,包括了所有组分,客户不需要另外求购组分。该产品是成分确定的培养基产品,而且不需要饲养层。DEF-CS既可以实现单细胞培养,也可以用于传统的iPS培养模式以及大规模干细胞增殖。在使用DEF-CS培养基增殖干细胞时,几乎没有背景分化的问题,这使得细胞筛选不再必需。作为一款创新产品,利用DEF-CS培养干细胞时,可以使用酶消化法(enzymatic passaging)实现需要单细胞操作,这一特点十分有利于高通量细胞鉴别筛选(high-throughput screening)、转染(transfection)、框架接种(scaffold seeding)等。
 
■ 产品特点
· Feeder-free and chemically defined culture system for efficient expansion of human iPS cells
· Ideal system for culturing iPS cells; cells maintain pluripotency and long-term potential for self-renewal and differentiation
· Complete kit includes 500 ml basal medium, additives, and coating compound
· Robust system provides high reproducibility and stable growth
· Maintains cells in an undifferentiated state with virtually no background differentiation
 
■ 产品应用
· Scale-up and mass production of human iPS cells
· Single-cell culture of human iPS cells
· Transfection and reprogramming
· High-throughput screening
· Tissue engineering (seeding cells on a scaffold)
 
■ 产品详情请点击:人源干细胞增殖用培养基Human Stem Cell Culture System (DEF-CS, all-in-one format)
 
人源干细胞增殖用培养基Human Stem Cell Culture System (DEF-CS, all-in-one format)
Robust growth of human induced pluripotent stem (iPS) cells in the Cellartis DEF-CS Culture System. The number of iPS cells was quantified after being cultured for three weeks using either the Cellartis DEF-CS Culture System, a reference feeder system, or four other stem cell culture systems.
 
参考文献:
1. Sivertsson, Louise, et al. "Hepatic differentiation and maturation of human embryonic stem cells cultured in a perfused three-dimensional bioreactor." Stem cells and development 22.4 (2012): 581-594.
2. Hanson, Charles, et al. "Transplantation of human embryonic stem cells onto a partially wounded human cornea in vitro." Acta ophthalmologica 91.2 (2013): 127-130.
3. Norrman, Karin, et al. "Distinct gene expression signatures in human embryonic stem cells differentiated towards definitive endoderm at single-cell level." Methods 59.1 (2013): 59-70.
4. Ulvestad, Maria, et al. "Drug metabolizing enzyme and transporter protein profiles of hepatocytes derived from human embryonic and induced pluripotent stem cells." Biochemical pharmacology 86.5 (2013): 691-702.
5. Ramirez JM, et al. Side scatter intensity is highly heterogeneous in undifferentiated pluripotent stem cells and predicts clonogenic self-renewal. Stem Cells Dev.2013 Jun 15;22(12):1851-1860.
6. Borestrom, Cecilia, et al. “Footprint-free human induced pluripotent stem cells from articular cartilage with redifferentiation capacity: A first step toward a clinical-grade cell source.” Stem Cells Trans. Med. (2014) 3, 433-447.
7. Kia, Richard, et al. "MicroRNA-122: a novel hepatocyte-enriched in vitro marker of drug-induced cellular toxicity." Toxicological Sciences (2014): kfu269.
8. Valton, Julien, et al. "Efficient strategies for TALEN-mediated genome editing in mammalian cell lines."  Methods 69.2 (2014): 151-170.
9. Zandén, Carl, et al. "Stem cell responses to plasma surface modified electrospun polyurethane scaffolds." Nanomedicine: Nanotechnology, Biology and Medicine 10.5 (2014): 949-958.
10. Asplund, Annika, et al. “One Standardized Differentiation Procedure Robustly Generates Homogenous Hepatocyte Cultures Displaying? Metabolic Diversity from a Large Panel of Human Pluripotent Stem Cells” Stem Cell Rev and Rep (2015)
 
 
 
 

页面更新:2024-01-25 16:05:42

iPS向肝脏细胞定向分化操作系统iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System酶试剂盒Takara Clontech

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iPS向肝脏细胞定向分化操作系统iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Cellartis Y30055 Cellartis® iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System 1 Kit ¥15,704 iPS向肝脏细胞定向分化操作系统iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System iPS向肝脏细胞定向分化操作系统iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System iPS向肝脏细胞定向分化操作系统iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System
Cellartis Y30051 Cellartis® Hepatocyte Maintenance Medium 100 ml ¥2,521 iPS向肝脏细胞定向分化操作系统iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System iPS向肝脏细胞定向分化操作系统iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System iPS向肝脏细胞定向分化操作系统iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System
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iPS向肝脏细胞定向分化操作系统
(Cellartis iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System)
以肝脏细胞为模型的实验越来越受到重视,在肝脏病变机理研究、药物代谢研究、药物毒理评估等方面有广阔的应用前景。然而,以个体原代肝细胞为材料来源会产生如取材困难、材料批间差大、无法长期稳定供应等一系列难以克服的问题。因此,通过iPS批量转化生产肝细胞的方法就显示出特别的优势。Cellartis iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System可以稳定地、规模化地实现iPS向hepatocyte的诱导转化生产,而且诱导转化出的肝细胞能够稳定表达药物代谢相关酶系统和药物转运系统。
Cellartis iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System是一套Do-It-Yourself系统,客户既可以对某个特殊病人来源的iPS实现转化,也可以利用cellartis供应的iPS进行标准化操作。使用本产品的过程起始于诱导人iPS转化成为确定性内胚层(Definitive Endoderm (DE))细胞,然后诱导转化DE至肝细胞。本产品是All-In-One型产品,实验所需的培养基、基质(coating)等包括在内。应用本产品转化约3 × 106 hiPS cells,可以获得约5 × 106 肝细胞(大约50 cm2面积的单层贴壁细胞)。
利用Cellartis iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System转化得到的肝细胞除了清晰表现出肝细胞的必备特征外(如肝细胞特异性标志物、CYP系列酶等),还保留了原始细胞供体者的遗传基因背景。另外,相比较从组织切除获得的原代肝脏细胞(通常需要低温保存),通过本产品系统转化获得的肝细胞在更长的时间跨度上保持着生理功能的稳定性。这一点对于毒理学评估和病毒感染评估具有显著的意义。为长时间维持培养hiPS转化而来的肝细胞,我们推荐Cellartis Hepatocyte Maintenance Medium (Cat. No. Y30051)。
 
关于Cellartis 卓越的iPS Cell to Hepatocyte Differentiation技术的专项说明,请点击:
详情
 
■ 产品特点
· Highly reproducible, robust system—the exact same protocol has been shown to work across 25 different iPS cell lines, so no need to optimize for your lines.
· Ideal for drug metabolism and safety studies—consistently generate panels of >90% pure, functional, hiPS cell-derived hepatocytes with diverse genetic backgrounds.
· Customized starting materials—start with any disease-relevant iPS cell lines and create accurate liver disease models.
· Ready for personalized medicine—make patient-specific, disease-specific cells for therapeutic applications.
· Extended experimental window—hepatocytes can be used for a minimum of 11 days for functional tests.
 
■ 产品成分
· Cellartis DEF-CS 100 Culture System (Y30020, not sold separately)
· Cellartis Definitive Endoderm Differentiation Kit (Y30030, not sold separately)
· Cellartis Hepatocyte Differentiation Kit (Y30050)
 
■ 产品详情请点击:iPS向肝脏细胞定向分化操作系统iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System
 
iPS向肝脏细胞定向分化操作系统iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System
Immunocytochemistry analysis of hepatocyte differentiation. hiPS cells were differentiated into functional hepatocytes using the Cellartis iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System. Hepatocytes were immunostained to detect early hepatic markers HNF4α (red, nuclear) and CK18 (green) on days 14 and 21. As the hepatocytes matured, expression of liver-specific markers CYP3A (red, cytoplasmic) and Albumin (green) increased as seen on day 28, as expected. Cell nuclei were stained with DAPI (blue).
 
参考文献:
Asplund, Annika, et al.One Standardized Differentiation Procedure Robustly Generates Homogenous Hepatocyte Cultures Displaying? Metabolic Diversity from a Large Panel of Human Pluripotent Stem Cells. Stem Cell Rev and Rep (2015).
 
用户分享:
◆ 东海大学医学部-纸谷聪英教授
   利用人iPS细胞体外构建多囊性肝病(Polycystic liver disease)模型
 
iPS向肝脏细胞定向分化操作系统iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System
纸谷聪英教授使用Cellartis iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System(Y30055)构建肝脏疾病模型的研究成果已刊登在Stem Cell Research。
【论文】
Akihide, K., Hiromi, C., Kinuyo, I., Emi, A., Kota, T., & Tatehiro, K., et al. (2018). An in vitro model of polycystic liver disease using genome-edited human inducible pluripotent stem cells. Stem Cell Research, 32, 17-24.
 
实验数据
 
iPS向肝脏细胞定向分化操作系统iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System
 
图:使用 Cellartis iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System(Y30055)获得的人iPSC来源肝前体细胞(iPS-HPCs)诱导分化为胆管状Cyst结构。
(引用自文献Akihide Kamiya et al., Stem Cell Research, 2018)
 
访谈时间:
1. 开始使用Cellartis iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System(Y30055)的契机是什么?
很多研究组已经报道了多种从人iPS细胞诱导分化形成肝脏细胞的方法,我们研究组也在做相关工作。由于细胞分化不稳定,我担心使用饲养层细胞培养人iPS细胞会对肝脏分化产生影响,因此决定尝试使用Cellartis iPS细胞无饲养层培养系统Cellartis DEF-CS™ 500 Culture System(Y30010)和肝脏分化系统Cellartis iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System(Y30055)。
 
2.实际使用后感觉如何?
与之前使用的饲养层培养方法相比,Y30010能更简便高效的进行培养;使用Y30055进行的肝脏分化非常稳定,进一步提升了实验效率。
 
3. 对暂未使用该制品的用户有什么寄语?
人iPS细胞向肝脏细胞分化过程中,细胞密度对分化效率有很大影响,进而影响实验结果。我认为Cellartis系统的优点主要在于各个实验阶段偏差小,结果稳定,适合追求实验效率的人。
 
 
◆ 东京医科齿科大学-柿沼晴教授
   先天性肝纤维化模型的开发和病理阐明的研究
 
iPS向肝脏细胞定向分化操作系统iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System
柿沼晴教授使用Cellartis iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System(Y30055)构建肝脏疾病模型的研究成果已刊登在Journal of Hepatology。
 
【论文】
Tsunoda, T., Kakinuma, S., Miyoshi, M., Kamiya, A., Kaneko, S., & Sato, A., et al. (2019). Loss of fibrocystin promotes interleukin-8-dependent proliferation and ctgf production of biliary epithelium. Journal of Hepatology.
 
访谈时间:
1.开始使用Cellartis iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System(Y30055)的契机是什么?
一起进行研究的老师使用后能够进行稳定的培养,我们研究室也正好想利用无饲养层培养系统,所以开始使用了Cellartis DEF-CS™ 500 Culture System(Y30010)和肝脏分化系统Cellartis iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System(Y30055)。
 
2.实际使用后感觉如何?
Y30010无饲养层培养系统使用比较简便,同时能够稳定的培养人iPS细胞。这次实验中,利用Y30055分化至肝前体细胞(iPS-HPCs),进一步诱导分化成了胆管细胞,我认为诱导分化的再现性好。不仅分化至成熟肝细胞谱系,同时相比于以往报道的方法,再现性更稳定。
 
3. 对暂未使用该制品的用户有什么寄语?
在人iPS细胞的培养和分化至肝细胞谱系的诱导中,即使是对人iPS细胞使用经验尚浅的实验者,也能够进行培养并得到稳定的再现。
 
 

页面更新:2024-02-29 10:59:23

肝细胞Human Stem Cell Derived Hepatocytes酶试剂盒Takara Clontech

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肝细胞Human Stem Cell Derived Hepatocytes
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Cellartis Y10133 Cellartis® Enhanced hiPS-HEP v2 (from ChiPSC12) Kit 1 kit 询价 肝细胞Human Stem Cell Derived Hepatocytes 肝细胞Human Stem Cell Derived Hepatocytes 肝细胞Human Stem Cell Derived Hepatocytes
Cellartis Y10134 Cellartis® Enhanced hiPS-HEP v2 (from ChiPSC18) Kit 1 kit 询价 肝细胞Human Stem Cell Derived Hepatocytes 肝细胞Human Stem Cell Derived Hepatocytes 肝细胞Human Stem Cell Derived Hepatocytes
Cellartis Y10135 Cellartis® Enhanced hiPS-HEP v2 (from ChiPSC22) Kit 1 kit 询价 肝细胞Human Stem Cell Derived Hepatocytes 肝细胞Human Stem Cell Derived Hepatocytes 肝细胞Human Stem Cell Derived Hepatocytes
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人iPS干细胞分化来的肝细胞
Cellartis enhanced hiPS-HEP v2 kits 提供了可持续供应的、成熟的人诱导多能干细胞(hiPS)来源的肝脏细胞。在超过14天的检测窗口期,hiPS-HEP细胞拥有功能性的药物代谢机制,使其成为体外药物研发、药物代谢、和相关毒性研究的理想选择;具备成熟、稳健的代谢特征,支持其作为代谢疾病模型。方便使用的试剂盒包括完全的培养基和组份,用于长期检测。与其他肝脏细胞模型相比,培养的Cellartis hiPS-HEP细胞存活时间更长,进而拥有更长的检测窗口用于慢性-毒性实验和作为代谢疾病模型研究。
 
■ 产品特点
· Complete kit for thawing, plating, and culturing the provided cells
· Highly homogeneous population with consistent performance between batches and over time
· Cells are functional and stable for a 14-day assay window
· Cells show long-term, stable CYP450 activities
· Cells express key hepatocyte proteins, including α1AT, Alb, CK18, HNF4α, and E-cadherin
· Cells secrete physiologically relevant levels of albumin and urea
· Cells demonstrate functional insulin and glucose regulation
· Cells show phase I and II enzyme activities
· Cells demonstrate LDL uptake
 
■ 产品组成
· 1 vial of ~1.2 × 107 cells
· Hepatocyte thawing medium
· Hepatocyte coating
· Hepatocyte plating medium
· Hepatocyte washing medium
· Hepatocyte long-term maintenance medium
 
■ 产品应用
· Toxicity testing, including chronic toxicity assays
· Drug discovery and development
· Metabolic studies
· Metabolic disease modeling
 
■ 产品详情请点击:肝细胞Human Stem Cell Derived Hepatocytes
 
肝细胞Human Stem Cell Derived Hepatocytes
 
Cellartis 人iPS细胞来源的肝脏细胞可以作为长期的、可靠的肝脏疾病模型。
Cellartis human induced pluripotent stem (iPS) cell-derived hepatocytes are a long-lasting, reliable liver disease model. Ideal for long-term studies, these mature, functional, pure hepatocytes allow you to generate consistent results with low batch-to-batch variability. Cellartis iPSC-derived hepatocytes can be used for extended culture significantly longer than human primary hepatocytes—allowing you to get more data from your chronic toxicity studies.
 
肝细胞Human Stem Cell Derived Hepatocytes
 
Cellartis enhanced hiPS-HEP cells可以稳定表达CYP450 活性超过21天。
CYP450 activity is stable in enhanced hiPS-HEP cells over 21 days. LC/MS was used to analyze CYP450 activity in cultured enhanced hiPS-HEP cells previously derived from the hiPS cell lines ChiPSC12, ChiPSC18, and ChiPSC22 (abbreviated as C12, C18, and C22). CYP3A (Panel A), CYP2C9 (Panel B), CYP1A (Panel C), and CYP2C19 (Panel D) activities in enhanced hiPS-HEP cells are stable over an extended culture time. Cryopreserved human primary hepatocytes (hphep), which are functional in culture for a significantly shorter time than enhanced hiPS-HEP cells, were thawed and cultured for 20 hours, and their data are shown as the black bar in each panel.
 
肝细胞Human Stem Cell Derived Hepatocytes
 
Cellartis enhanced hiPS-HEP细胞在20天的培养中表达白蛋白(Albumin)。
Albumin is present in enhanced hiPS-HEP cells through 20 days in culture. Panel A. Representative images of enhanced hiPS-HEP cells from human iPS cell line ChiPSC18 (C18) taken 12 days after thawing (right), compared to cryopreserved human primary hepatocytes (hphep) taken 24 hr after thawing (left). Cells were stained for albumin and DAPI. Panel B. Albumin secretion as measured by ELISA; n=2 for enhanced hiPS-HEP cells, with the exception of C18 at 20 days (n=1), and n=3 donors for hphep.
 
(以上图片均来源于Takara Bio USA, Inc.)
 
参考文献:
1. Heins et al. Stem Cells 2004; 22: 367-376.United States National Stem Cell Bank; http://www.nationalstemcellbank.org.
2. Mantel N et al. Potential markers of attenuation of YF virus after infection of stem cell-derived human hepatocytes with wild-type Asibi or live-attenuated YF17D virus.Supplement to The American Journal of tropical Medicine and Hygiene, Volume 83, November 2010, Number 5, abstract 12.
3. Yildirimman R et al. Human embryonic stem cell derived hepatocyte-like cells as a tool for in vitro hazard assessment of chemical carcinogenicity. Toxicol. Sci. 2011 Dec; 124(2): 278-90.
4. Ulvestad M et al. Drug metabolizing enzyme and transporter protein profi les of hepatocytes derived from human embryonic and induced pluripotent stem cells. Biochem Pharmacol. 2013 Sep 1; 86(5):691-702.
 
 

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