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产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – qPCR & RT-qPCR
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#E3032S
100 rxns
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无
无
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无
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特性
·仅需 15 分钟即可完成细胞裂解、RNA 释放和基因组 DNA 去除
·一次反应高效可裂解 10 至 10 万个细胞,适用于众多细胞系
·与其它 RNA 提取方法相比减少了样品损失,尤其对于低细胞起始量。
·兼容高通量应用,可在室温下进行细胞裂解
·与 Luna 通用一步法 RT-qPCR 试剂盒搭配使用时性能最佳:NEB#E3005(染料法)或 NEB#E3006(探针法)
·提供完整的细胞裂解和一步法 RT-qPCR 试剂盒方案:NEB #E3030(染料法)或 NEB #E3031(探针法)
概述
细胞培养常用于替代活体生物来分析基因表达或对治疗的反应。传统上使用柱提法或化学试剂法从处理过的细胞中提取和纯化 RNA.Luna Cell Ready 裂解模块无需进行传统的 RNA 提取步骤即可评估RNA表达水平,是一种快速、方便且灵敏的替代方案。该模块可同时进行细胞裂解、RNA 释放、基因组 DNA 去除,获得的细胞裂解物可直接使用Luna通用一步法 RT-qPCR 试剂盒进行 RT-qPCR 分析。与其它 Luna 产品一样,裂解缓冲液包含惰性蓝色示踪染料,使整个加样流程可视化。
下表列出的细胞系可使用 Luna Cell Ready 裂解模块裂解。这些细胞进行 5 log 梯度稀释(100000-10 细胞/50 µl 裂解反应),并取 1 ul 裂解产物进行 20 µl 体系的一步法 RT-qPCR 反应。每个细胞系的线性结果区域显示在最后一列。此外,经测试一些昆虫细胞系也能用上述裂解液裂解。
表一:经验证过的细胞系
细胞系
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特性
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菌种
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50 ml 裂解体系中的细胞数量
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A549
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Adherent
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H. sapiens, Lung, carcinoma
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10 – 100,000
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HEK293
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Adherent
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H. sapiens, Kidney
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10 – 100,000
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HeLa
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Adherent
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H. sapiens, Cervix, adenocarcinoma
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10 – 100,000
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HepG2
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Adherent
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H. sapiens, Liver, carcinoma
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10 – 100,000
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NCI-H460
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Adherent
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H. sapiens, Lung, carcinoma
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10 – 100,000
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SK-N-SH
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Adherent
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H. sapiens, Brain, Neuroblastoma
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10 – 100,000
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U2Os
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Adherent
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H. sapiens, Bone, osteosarcoma
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10 – 10,000
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Jurkat
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Suspension
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H. sapiens, T lymphocyte, leukemia
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10 – 100,000
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K-562
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Suspension
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H. sapiens, Lymphoblast, leukemia
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10 – 1,000
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图一:Luna Cell Ready 一步法 RT-qPCR 实验流程

Luna Cell Ready 裂解模块整合了 DNase I 和 Luna Cell Ready 蛋白酶的功能,可简单高效的进行细胞裂解,仅需 15 分钟即可完成细胞裂解、RNA 释放和基因组 DNA 去除。2 µl 裂解产物(相当于 0.2–4000 个细胞中的 RNA)即可实现 20 µl 体系的 RT-qPCR 反应。
试剂盒组分
随该产品提供的试剂
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储存(°C)
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浓度
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Luna Cell Ready Lysis Buffer
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-20
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2 X
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Luna Cell Ready RNA Protection Reagent
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-20
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25 X
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Luna Cell Ready Protease
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-20
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25 X
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Luna Cell Ready Stop Solution
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-20
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10 X
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DNase I (RNase-free)
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-20
|
10 X
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实验需要但不提供的试剂耗材
- 磷酸盐缓冲液(PBS)
- 目标特异性引物
- 细胞
- Eppendorf 管
- PCR 联管
- PCR 板
- 移液器和枪头(为减少交叉污染,应使用带滤芯的枪头)
储存温度
-20℃