Mabtech ELISpot和FluoroSpot试剂盒—特异性检测疫苗诱导的免疫反应

Mabtech ELISpot和FluoroSpot试剂盒—特异性检测疫苗诱导的免疫反应

ELISpot由于其定量检测、高敏感性和操作简单,因而可以作为临床试验中评估和定义候选疫苗的一种分析方法, FluoroSpot将这种分析方法向前推进了一步,允许同时检测同一样品中的几种分析物。ELISpot和FluoroSpot可用于监测T细胞反应,并提供细胞反应的频率和细胞因子谱。使用这些免疫测定法也可以研究B细胞反应。通过这两种方法可以对疫苗引起的抗体反应的质量和持续时间进行监测。

FluoroSpot可用于检测和分析多功能T细胞的疫苗特异性免疫反应,如T细胞分泌IFN-γ和IL-2。该方法已在临床应用中得到验证,表明FluoroSpot具有ELISpot方法的所有优点,如灵敏度、稳定性和简便性。

Mabtech ELISpot和FluoroSpot试剂盒—特异性检测疫苗诱导的免疫反应

通过肿瘤活检,RNA测 序 ,从而找到新表位。将新表位RNA注入患者体内,患者的树突状细胞吞噬这种“癌症疫苗”,翻译RNA编码的抗原并将其呈现给T细胞。图为接种疫苗前后免疫原性的改变。

FluoroSpot可同时检测同一样品中的三种分析物

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ELISpot

ELISpot

酶联免疫斑点检测法(Enzyme-Linked ImmunoSpot, EILSpot)是在单细胞水平检测细胞分泌物的一种高灵敏度的检测方法。
ELISpot

图一
1.固定特异性单克隆抗体在96孔ELISpot板上。
2.分别加入有特异性刺激因子和无刺激因子的细胞。
3.孵育过程中,细胞被刺激因子激活开始分泌细胞因子,细胞因子和单克隆抗体结合。
4.移除细胞,加入交联生物素或酶的检测单克隆抗体。
5.如果使用交联生物素的单克隆抗体检测,加入链霉亲和素酶联物。
6.最后,加入底物,细胞分泌位点会形成有色斑点。
7.计算实验组和对照组斑点数量。

ELISpot是迄今为止细胞分析最敏感的方法之一,它以细胞因子为分析对象,比传统的ELISA方法敏感20-200倍。ELISpot和RT-PCR敏感性相当,不同的是ELISpot检测的是分泌蛋白而不是mRNA。 ELISpot分析细胞因子有很大优势,细胞因子分泌后可立即被连接到捕获抗体上,因此很少会被结合蛋白和活性蛋白酶破坏。ELISpot具有较高的灵敏性,特别适用于细胞因子含量较低时的检测,例如特异性免疫反应的定期检测等。

应用
ELISpot分析方法被广泛应用于感染引起的特异性免疫反应、癌症、过敏、自身免疫疾病。它是研发和检测新疫苗和候选疫苗的标准方法。ELISpot通过细胞因子分析也能用来鉴别T细胞的亚型,例如,Th1细胞产生IFN-γ、IL-2 和TNF-α,而Th2细胞产生IL-4、IL-5 和 IL-13。ELISpot既可以进行单个实验也能进行大规模试验。和四聚体法(检测细胞毒性T淋巴细胞反应)相比,进行大规模试验时ELISpot不许需要提前表位鉴定和MHC-Ⅰ型限制。对实验设备要求比较低,适合于实地研究。随后,以ELISpot为平台的诊断测试也相继出现,它通过检测结核杆菌抗原刺激T细胞后的分泌物IFN-γ判断病人是否感染结核或携带者。ELISpot比皮肤测试有更高的灵敏性和特异性,不会混淆之前接种的BGC疫苗。ELISpot可以应用于许多物种,除了人、猴子、小鼠、大鼠细胞之外,还可应用于兽医学,评价牛、羊、马、猪来源的T细胞反应。

疫苗开发
IFN-γ ELISpot被应用于许多大规模试验用于监测HIV候选疫苗,评价HIV疫苗和其它病原体及肿瘤疫苗(见图2)。ELISpot还可检测疫苗的功效,从而评估疫苗的设计方法是否合适。除了可以检测IFN-γ,ELISpot还可检测其它细胞毒性关键因子,例如:穿孔蛋白、颗粒酶B。


ELISpot

图2.肽刺激T细胞后用ELISpot分析人IFN-γ。CD8+ T用来源于病毒的MHC-Ⅰ型限制肽刺激16小时,同时设置阴性对照(不刺激)。

过敏反应
ELISpot可应用于过敏研究,过敏研究中的Th2反应至关重要,但是反应频率比较低,因此就需要高灵敏的方法来检测Th2反应。ELISpot还可在特异性免疫治疗中监测T细胞反应,开发体外诊断测试方法等。ELISpot常用于检测IL-4,IL-4是Th2型反应的主要细胞因子,用流式和ELISA检测时常常由于灵敏性低导致实验失败(见图3)。

ELISpot

图3.外周血单核细胞对镍体外过敏反应。斑点测试反应显示+++ (n=10), ++ (n=11), + (n=10) , 0 (controls; n=10)。单核细胞中加入50 μM NiCl2孵育40小时,31个过敏个体用ELISpot可检测到23个,而ELISA只检测到4个阳性反应。

其它类型细胞分析
最初,ELISpot用于计算细胞分泌的特异性抗体。近几年,B细胞ELISpot的发展,使ELISpot技术得以复苏,主要用于检测B细胞感染反应和疫苗引起的感染。
从理论上讲,ELISpot可以应用于任何单细胞水平的检测。例如脂多糖刺激外周血单核细胞分泌的IL-1β和 IL-6定量研究(见图4.)。还可用于少数细胞的研究,例如浆细胞样树突状细胞,它在血液中的出现频率很低,但用ELISpot可以很容易检测到它的产物IFN-α。

ELISpot

图4. ELISpot分析脂多糖刺激人外周血单核细胞后分泌的IL-1β 和 IL-6。加入脂多糖(100ng/ml)后孵育细胞(5,000 cells/well)20小时,设实验组和对照组。

技术

试验方法优化
ELISpot方法有几个关键步骤,高特异性抗体选择是最重要的一步,其它关键参数包括ELISpot板的选择、包被程序等。包被前PVDF板用乙醇处理,可以增加联接捕获抗体的能力。事实上,不同的板子对乙醇的反应也不一样,因此选择合适的方法很关键。如果乙醇处理恰当,斑点的质量和数量比未经乙醇处理的要好很多。值得注意的是,过度乙醇处理(乙醇体积过大或时间过长)会降低实验效率(见图5)。
捕获抗体一般推荐15μg/ml(100μl/well),如果捕获抗体浓度小于15μg/ml,斑点会呈弥散状,影响后续计算。在许多细胞因子ELISpot实验中,捕获抗体数量越少,斑点的损失就越大。因此,设计试验时要考虑到捕获抗体的数量,尤其是生成细胞频率较低或细胞因子数量较少时。
最后一步加入沉淀底物,不同的酶(ALP或HRP)使用不同的底物,不同的底物产生不同的颜色,而且灵敏度也不一样(见图6)。一般情况下,我们推荐ALP 使用BCIP/NBT;HRP 使用TMB。这两种酶的灵敏性非常好,都可以产生清晰的斑点。


ELISpot

图 5. 包被前乙醇处理MSIP对结果的影响,Mabtech预包被板的比较。用CEF肽刺激人的外周单核细胞(250,000 cells/well),然后检测IFN-γ产量。

图6. ELISpot通用底物。不同的酶(ALP 或 HRP)交联不同的底物。以IFN-γ ELISpot为例,ALP使用BCIP/NBT,HRP 使用TMB 和AEC。
 

B细胞ELISpot

B细胞ELISpot

  早在1983年,ELISpot就被用于从单细胞水平鉴定抗体的分泌,作为一种高灵敏的检测方法,ELISpot可成功用于检测抗体分泌B 细胞的频率。B细胞分泌多种类型的免疫球蛋白,同时也分泌抗原特异性免疫球蛋白,可用ELISpot来计数抗体分泌B细胞。通常将抗原特异性B细胞的数量与总抗体分泌B细胞进行对比。在接触抗原(如疫苗接种)的6-9天后B细胞就能分泌抗原特异性抗体。往往经多克隆刺激后,才有可能检测到记忆B细胞的抗体分泌。
        有2种方式来检测抗原特异性B细胞:用抗原(A)或特异的抗免疫球蛋白抗体(B)包被PVDF板。利用生物素化的anti-IgG (A)或生物素化的抗原(B)来识别捕获的抗原特异性抗体。第二种方法仅需要少量的抗原就能产生更多清晰的斑点。使用FluoroSpot试剂盒可以检测B细胞分泌的多个免疫球蛋白亚型(请参考
FluoroSpot荧光免疫斑点实验)。

 

1. B细胞ELISpot实验原理:A(抗原包被)和B(生物素化抗原检测)显示2不同的ELISpot方法检测抗原特异性B细胞;CB细胞总IgGELISpot检测                                     
                                                                                                                                                                                      
图2. 使用R848和重组IL-2刺激培养PBMC细胞72h后,洗涤细胞,转移ELISpot板培养并分析总IgG分泌B细胞 (50,000  cells/well, 过夜孵育)                                                                                                                                               

 B细胞ELISpot试剂盒信息

 产品名称
 编号
 供应商
 人B细胞ELISpot试剂盒
 Human IgA ELISpotPlus kit (ALP) ,with 4 plates
 3860-2AW-Plus
 Mabtech
 Human IgA ELISpotPlus kit (HRP) ,with 4 plates
 3860-2HW-Plus
 Mabtech
 Human IgE ELISpotPlus kit (ALP) ,with 4 plates
 3810-2AW-Plus
 Mabtech
 Human IgE ELISpotPlus kit (HRP) ,with 4 plates
 3810-2HW-Plus
 Mabtech
 Human IgG ELISpotPlus kit (ALP) ,with 4 plates
 3850-2AW-Plus
 Mabtech
 Human IgG ELISpotPlus kit (HRP) ,with 4 plates
 3850-2HW-Plus
 Mabtech
 Human IgM ELISpotPlus kit (ALP) ,with 4 plates
 3840-2AW-Plus
 Mabtech
 Human IgM ELISpotPlus kit (HRP) ,with 4 plates
 3840-2HW-Plus
 Mabtech
 猴B细胞ELISpot试剂盒
 Monkey IgA ELISpotPlus kit (ALP) ,with 4 plates
 3860M-2AW-Plus
 Mabtech
 Monkey IgA ELISpotPlus kit (HRP) ,with 4 plates
 3860M-2HW-Plus
 Mabtech
 小鼠B细胞ELISpot试剂盒
 Mouse IgA ELISpotPlus kit (ALP) ,with 4 plates
 3835-2AW-Plus
 Mabtech
 Mouse IgA ELISpotPlus kit (HRP) ,with 4 plates
 3835-2HW-Plus
 Mabtech
 Mouse IgG ELISpotPlus kit (ALP) ,with 4 plates
 3825-2AW-Plus
 Mabtech
 Mouse IgG ELISpotPlus kit (HRP) ,with 4 plates
 3825-2HW-Plus
 Mabtech
 Mouse IgM ELISpotPlus kit (ALP) ,with 4 plates
 3845-2AW-Plus
 Mabtech
 Mouse IgM ELISpotPlus kit (HRP) ,with 4 plates
 3845-2HW-Plus


 Mabtech

人IFN-γ抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒(1)

人IFN-γ抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒(1)

IFN-γ ELISA与免疫斑点检测试剂盒

IFN-γ是一种前炎症因子,由激活的T细胞和NK细胞产生,具有调节免疫应答、抗增殖,抗病毒等作用。因此IFN-γ经常是一些传染病、癌症和疫苗研究领域常用检测指标之一。通常,免疫酶联吸附试剂盒ELISA可以定量检测液体状样本中IFN-γ含量;免疫酶联斑点ELISpot和免疫荧光斑点FluoroSpot是分析T细胞经抗原刺激后IFN-γ细胞因子增值释放的出色工具。

 

Mabtech可提供的IFN-γ产品有抗体 、免疫酶试剂盒、免疫斑点、免疫荧光斑点和流式产品。

人IFN-γ抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒(1)   人IFN-γ抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒(1)   人IFN-γ抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒(1)   人IFN-γ抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒(1)   人IFN-γ抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒(1)

          抗体                     免疫酶试剂盒                免疫斑点                  免疫荧光斑点                流式产品

 

 

Matech提供人已包被和未包被的IFN-γ ELISA Kit,典型标准曲线如下图 

人IFN-γ抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒(1)

 

 

人IFN-γ抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒(1)

PBMC细胞分别与anti-CD3和未加anti-CD3抗体过夜孵育后免疫酶联斑点结果

 

人IFN-γ抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒(1)

 

PBMC细胞分别与CEF和未加CEF刺激的细胞过夜孵育后免疫荧光酶联斑点结果

 

 

人IFN-γ抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒(1)

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上海金畔生物科技有限公司

Mabtech Elispot试剂盒- 诺贝尔得主的选择

Mabtech Elispot试剂盒- 诺贝尔得主的选择

Mabtech Elispot试剂盒- 诺贝尔得主的选择

2018年的诺贝尔生理/医学奖,由德克萨斯大学MD安德森癌症中心免疫学系主任、肿瘤免疫治疗平台主任James P. Allison教授以及日本免疫学家、京都大学本庶佑教授(Tasuku Honjo)荣获,两位教授在人类肿瘤免疫治疗方面做出了突出的贡献。

James P. Allison博士在他的研究中使用Mabtech公司的IFN-gamma ELISpot试剂盒检测antigen-specific T cells在使用CTLA-4抗体(anti-CTLA-4)治疗前后的功能的变化。不论在人类或是小鼠的研究中,至少有三次,詹姆斯·艾利森James P. Allison博士的研究小组都选择Mabtech ELISpot 试剂盒

 

相关参考文献:

Gregor et al (2004) Vaccine: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15068853

Kitano et al (2013) Cancer Immunol Res: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24396833

Gubin et al (2014) Nature: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/25428507

 

品牌故事

 Mabtech AB公司是瑞典的生物科技公司,由瑞典斯德哥尔摩大学免疫学系的三位科学家于1986年创建。

Mabtech 专注于高品质单克隆抗体的研发、生产和销售,相关产品包括酶联免疫斑点试剂盒(ELISpot)、荧光免疫斑点试剂盒(FluoroSpot)以及酶联免疫吸附试剂盒(ELISA),以及一系列实验相关试剂(如Peptide Pool、酶底物等试剂),另外还提供适用于其它的免疫检测应用的抗体(如Cell StimulationNeutralization等应用)。
Mabtech 公司是一家非常注重质量的生物技术公司。产品的质量管理体系一直进行持续的评估和改进。自2006年以来,产品质量都符合ISO 9001ISO 13485的要求

公司网站https://www.mabtech.com/

 

更多产品

Mabtech ELISA Kit

Mabtech ELISpot Kit

Mabtech FluoroSpot Kit

Mabtech Monoclonal Antibody

Mabtech Human IFN-γ ELISpot

Mabtech Mouse IFN-γ ELISpot

详情请咨询Mabtech全国代理-上海金畔生物科技 

Mabtech —ELISpot全球引领者

Mabtech —ELISpot全球引领者

Mabtech于1986年成立于瑞典, 起源于斯德哥尔摩大学免疫学系, 是ELISpot和T细胞检测技术的全球领先者。Mabtech公司以前沿科学研究和临床大规模筛选需求为向导, 不断开发和生产出高质量的单克隆抗体和 ELISA、ELISpot、FluoroSpot试剂盒。并提供可拆分的ELISpot板和单独包装抗体等, 满足学术和工业不同需求。

Mabtech ---ELISpot全球引领者

(图:ELISpot操作步骤)

FluoroSpot形式

Mabtech可提供人、小鼠、猴子等种属的FluoroSpot试剂盒。

FluoroSpot 可提供的检测指标
T细胞 IFN-γ/Granzyme B
IFN-γ/IL-2 (also available for monkey and mouse)
IFN-γ/IL-5 (also available for mouse)
IFN-γ/IL-10
IFN-γ/IL-13
IFN-γ/IL-17A (also available for mouse)
IFN-γ/IL-22
IL-17A/IL-22
IFN-γ/IL-10/IL-17A(Triple color)
IFN-γ/IL-22/IL-17A(Triple color)
B细胞 IgA/IgG(also available for monkey)
IgG/IgM
IgA/IgG/IgM
Monocytes IL-1β/GM-CSF
Macrophages IL-1β/IL-6
Dendrictic cells IL-1β/ IL-12/-23(p40)
IL-1β/TNFα
IL-6/GM-CSF
IL-6/ IL-12/-23(p40)
IL-6/TNFα
TNFα/GM-CSF
TNFα/ IL-12/-23(p40)

Mabtech可提供三种形式ELISpot

Mabtech ---ELISpot全球引领者

Mabtech ---ELISpot全球引领者
适合于想要自己包被板子、优化实验的

客户, 提供可包被4块板的试剂。

提供预包被PVDF板和所有基础试剂,

可提供2块板或10块板包装形式。

组分

● 捕获抗体

● 生物素结合抗体

● 链霉亲和素结合物(ALP或HRP)

组分

● 预包被PVDF板

● 生物素化检测抗体

● 链霉亲和素结合物(ALP/HRP)

● 底物(BCIP/NBT-plus 或TMB)

● Cd3抗体(有些细胞因子中含有)

*有些指标可提供预包被的可拆板

操作简便, 性能优越。提供预包被板和ALP或HRP结合检测抗体, 可提供2块板和10块板包装形式。

组分

● 预包被PVDF板

● 一步检测抗体(结合ALP或HRP)

● 底物(BCIP/NBT-plus 或TMB)

● Cd3抗体

*有些指标可提供预包被的可拆板

Mabtech可提供的ELISpot检测指标
Inflammatory: IL-1β, IL-6, IL-8, IL-23, IFN-γ, GM-CSF, MIP-1β, TNFα 
Anti-inflammatory: IL-10, TGF-β (latent), IL-4, IL-13
Th1: IFN-γ, IL-12
Th2: IL-4, IL-5, IL-10, IL-13, IL-31
Th17: IL-17A, IL-21
T cell activation: IL-2, IL-21
CTL related: IFN-γ, Granzyme B, Perforin
Apolipoproteins: ApoA1, ApoB, ApoD, ApoE, ApoH, Apo J(Clusterin)
B细胞ELISpot试剂盒
Immunoglobulins: IgA, IgE, IgG, IgM
Mabtech可提供人、小鼠、大鼠、牛、马、羊、猪、狗、雪貂等种属的ELISpot试剂盒

FluoroSpot kit

FluoroSpot是一种基于荧光检测系统的酶联免疫斑点实验方法,同一实验孔内能够检测出细胞分泌的两种不同细胞因子;FluoroSpot尤其适用于检测分泌多种细胞因子的多功能T细胞,这些多功能T细胞在防御传染性疾病如HIV中发挥着重要的作用。B细胞FluoroSpot可用于在同一实验孔内分析不同的抗原特异性B细胞或者总的B细胞。

组分

FluoroSpot

预包被试剂盒

FluoroSpot

未包被试剂盒

低荧光PVDF膜板 预包被
捕获抗体
检测抗体(检测B细胞试剂盒结合有荧光素)
荧光素结合物*
CD3抗体(阳性对照)*
CD28抗体 (协同刺激)*
R848和重组人白介素2 (活化B细胞)*
荧光增强剂
* 有些检测因子中含有

ELISpot板和底物

可补充 BASIC ELISpot 产品,ELISpot板和底物可分别购买

Product Product code
BCIP/NBT-plus substrate, 120 ml 3650-10
TMB substrate, 120 ml 3651-10
ELISpot PVDF plate, without underdrain, 10 plates 3654-EP-10
ELISpot PVDF plate, clear, 10 plates 3654-TP-10
ELISpot PVDF plate, white, 10 plates 3654-WP-10

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Mabtech 人IL-2抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒

Mabtech 人IL-2抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒

Mabtech 人IL-2抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒

ELISA法、酶联免疫斑点法和荧光免疫斑点法分析检测人白细胞介素-2(IL-2)

白细胞介素-2IL-2)由活化的T细胞产生,可促进抗原活化的T细胞和NK细胞的增殖、分化和存活。ELISA法可用于定量分析样本IL-2的含量,酶联免疫斑点法和荧光免疫斑点法是分析抗原反应性T细胞细胞因子分布和丰度新型有效的检测方法

 

Mabtech 人IL-2抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒   Mabtech 人IL-2抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒   Mabtech 人IL-2抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒   Mabtech 人IL-2抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒   Mabtech 人IL-2抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒   Mabtech 人IL-2抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒   Mabtech 人IL-2抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒

        抗体                免疫酶试剂盒          免疫斑点          免疫荧光斑点          流式产品            蛋白质免疫印迹         中和反应

 

Mabtech 人IL-2抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒

我们提供检测人IL-2ELISA试剂盒套装ELISAPRO试剂盒。上图为典型的人IL-2标准曲线。

 

Mabtech 人IL-2抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒

对于酶联免疫斑点法检测IL-2,我们提供基础的酶联免疫斑点试剂盒,也提供含有预包被子的试剂盒。上图为使用含有刺激物CD-3或不含有刺激物CD-3过夜孵育后的结果。

Mabtech 人IL-2抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒

使用单荧光免疫斑点法检测IL-2双荧光免疫斑点法检测(IFN-γ和TNF-α三荧光免疫斑点检测IL-2IFN-γ和TNF-α。上图为使用含有刺激物病毒多肽(CEF)或不含有刺激物CEF)过夜孵育后的结果

 

Mabtech 人IL-2抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒

 

 

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Mabtech载脂蛋白相关抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒

Mabtech载脂蛋白相关抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒

Mabtech载脂蛋白相关抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒

 

酶联免疫法、酶联免疫斑点法和免疫印记法分析载脂蛋白

载脂蛋白具有生理学重要性,并与各种疾病的发生相关,如血脂异常症心血管疾病和神经变性疾病。 Mabtech提供检测多种载脂蛋白的单克隆抗体。酶联免疫斑点法适用于血清、血浆、细胞上清液样品,并且,我们的酶联免疫斑点试剂盒的可以在单细胞水平上检测载脂蛋白E的分泌。

 

  Mabtech载脂蛋白相关抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒   Mabtech载脂蛋白相关抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒    Mabtech载脂蛋白相关抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒      Mabtech载脂蛋白相关抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒

          抗                                          ELISA试剂盒                     酶联免疫斑点检测试剂盒                          免疫印迹

 Mabtech载脂蛋白相关抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒

 

许多我们的载脂蛋白特异性单克隆抗体都能够用于免疫印迹分析。上图表示,分别利用单克隆抗体HDL44LDL11做免疫印迹实验,检测人的载脂蛋白A1B.

 

Mabtech载脂蛋白相关抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒

 

我们提供ELISA试剂盒套装和预包被的ELISA试剂盒用于灵敏的检测载脂蛋白。该图为载脂蛋白A1标准曲线。

 

 

对于酶联免疫斑点分析载脂蛋白E,我们提供基础的ELISpot盒子,也提供含有预包被板子的盒子。

上图表示,LPS刺激下将PBMCs过夜孵育显示,LPS对载脂蛋白E有负影响。

 

 

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Elispot的优质供应商——Mabtech

Elispot的优质供应商——Mabtech

酶联免疫斑点检测(Enzyme-Linked Immunospot Assay, Elispot)结合了Elisa技术和细胞培养技术,在单细胞水平监测细胞因子的分泌情况。其原理是用Elispot板上捕获抗体特异性结合细胞所分泌的因子,然后用斑点的形式呈现出来的一种方法。MabtechElispot在全球的质量和性价比屈指可数。

 

1.酶联免疫斑点检测方法有如下优点:

1.1 灵敏度高,可以达到1/1000000,是非常灵敏的检测手段。比传统elisa要高23个数量级。

1.2 适合用于高通量筛选。分离的细胞不需要进行体外扩增,实验人员能够在同一次实验进行多块板的操作。

1.3 单细胞水平的检测,Elispot的技术能够检测到单个细胞分泌细胞因子的情况。

 

实验步骤: 

2.1 MabtechElispot是在底物有pvdf膜的96孔板上实验。

分为两种板,一种需要客户自己包板的basic系列,另一种是已经包被好捕获抗体的proplus系列。

2. 2 mabtechelispot的板上加入细胞和各种刺激物共培养。在抗原特异性或者非特异性有丝分裂的影响下,数小时内,细胞就可以分泌各种细胞因子。

2.3 分泌的细胞因子能够被板上的包被抗体捕获,洗去板上的细胞。

2.4 加入生物素化的检测抗体能够和特异性的分泌因子结合。

2.5 Mabtech能够提供两种显色系统,HRPALP。针对hrp显色体系,加入辣根过氧化物标记的链霉亲和素。针对ALP显色体系,加入碱性磷酸酶标记的链霉亲和素。

两者的区别在于,ALP显色时间较长,但是斑点持久,实验完成后,斑点可以一直保存在膜上,随时可以观察。HRP系统显色时间较短,但是斑点在膜上很快会褪色,不利于长期保存。Mabtech建议客户可以选择ALP显色系统。

其原理见图1

 

1 ELISPOT流程示意图

2.6 每一个斑点都对应一个分泌该因子的细胞,通过Elispot读板仪计算每孔中的斑点数。Mabtech最新推出的的IRIS,与其他品牌的酶联斑点仪器相比,

 

IRIS具有如下优点:

2.6.1 操作简便,客户经过1-2个小时培训,能够熟练操作系统。

2.6.2 通过构建数学模型对每个点进行计算,使计数更加客观。

2.6.4 IRIS还能够用于荧光酶联斑点实验(fluorospot)结果的检测,且目前最多能够进行4种荧光的分析。基于对每个点3d立体分析,能够准确定位每个斑点的中心,有效计入每个实际的斑点,去掉非特异性斑点。


3. Elispot的应用和热销产品

3.1. 疫苗研发 很多疫苗研发的客户会选择酶联免疫斑点实验(Elispot)进行细胞情况的分析,比较热销的产品时人的IFN gammail-2igG等指标。

供应商

产品编号

产品名称

Mabtech

3420-2APT-10

Human IFN-gamma ELISpotPRO (ALP)

Mabtech

3445-4APW-10

Human IL-2 ELISpotPLUS (ALP)

Mabtech

3850-2H

Human IgG ELISpotBASIC (HRP)


3.2. 细胞治疗领域 通过Elispot试剂盒能够灵敏地监测免疫反应。主要的热销指标有:human IFN-gamma, Granzyme B,或者是TNF-alphaIL-12/23等指标。


供应商

产品编号

产品名称

Mabtech

3485-4APW-2

Human Granzyme B ELISpotPLUS (ALP)

Mabtech

3512-4APW-10

Human TNF-alpha ELISpotPLUS (ALP)

Mabtech

3450-4APW-2

Human IL-12/-23 (p40) ELISpotPLUS (ALP)


4. 当然如果有Flurospot可以一起检测以上几个指标,实验变得更加的简单和快速。Fluorospot还有其他的应用。

4.1 抗体亚型鉴定 Mabtech新推出的小鼠抗体亚型鉴定试剂盒,基于Elispot,快速鉴定IgG亚型。


供应商

产品编号

产品名称

Mabtech

FS-53515756-2

Mouse IgG subclass FluoroSpot

详情请咨询Mabtech全国代理-上海金畔生物科技 

小鼠IFN-γ抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒(1)

小鼠IFN-γ抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒(1)

小鼠IFN-γ抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒(1)

IFN-γ ELISA与免疫斑点检测试剂盒

IFN-γ是一种前炎症因子,由激活的T细胞和NK细胞产生,具有调节免疫应答、抗增殖,抗病毒等作用。因此IFN-γ经常是一些传染病、癌症和疫苗研究领域常用检测指标之一。通常,免疫酶联吸附试剂盒ELISA可以定量检测液体状样本中IFN-γ含量;免疫酶联斑点ELISpot和免疫荧光斑点FluoroSpot是分析T细胞经抗原刺激后IFN-γ细胞因子增值释放的出色工具。

 

Mabtech可提供的IFN-γ产品有抗体 、免疫酶试剂盒、免疫斑点、免疫荧光斑点和流式产品。

小鼠IFN-γ抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒(1)   小鼠IFN-γ抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒(1)   小鼠IFN-γ抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒(1)   小鼠IFN-γ抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒(1)   小鼠IFN-γ抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒(1)

          抗体                     免疫酶试剂盒                免疫斑点                 免疫荧光斑点                流式产品

 

Matech提供小鼠已包被和未包被的IFN-γ ELISA Kit,典型标准曲线如下图 

小鼠IFN-γ抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒(1)

 小鼠IFN-γ抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒(1)

 

小鼠脾细胞分别与ConA和未加ConA刺激过夜孵育后免疫酶联斑点结果

 小鼠IFN-γ抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒(1)

小鼠脾细胞分别与ConA和未加ConA刺激过夜孵育荧光免疫斑点结果。

 

小鼠IFN-γ抗体对/ELISA试剂盒/ELISpot试剂盒(1)

 

 

 

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