一、简介

Q-琼脂糖凝胶FF是将三甲胺基烷基季铵基团键合在高流速琼脂糖微球上形成的一种强阴离子交换介质。广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的离子交换制备。

本品为白色球状凝胶，无嗅、无味、无肉眼可见杂质。

二、亲和填料特性

*检测条件： 层析柱10mm×300mm  *柱床高15cm，25℃，流动相为0.1mol/LNaCl。.

三、 适用范围

本产品具有高化学稳定性、高流速、高载量、好的机械性能、可在位清洗、多次重复使用等特点，非特异性吸附低，回收率高，适用于工业规模生产，适用于在pH工作范围内可形成负离子的生物大分子的分离纯化，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的离子交换制备。

四、操作说明

1 装柱

（1）让所有的材料和试剂达到室温。配制初始缓冲液（平衡液）和洗脱缓冲液。

（2）根据柱子大小取所需量的凝胶，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始缓冲液（按凝胶：缓冲液=3：1的比例）配成匀浆。

（3）将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位（液面略高于滤膜），务必使底端无气泡。

（4）用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。

（5）打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定。用2~3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。

2 平衡

让平衡缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。平衡液是低浓度的缓冲溶液，如Tris、PBS等。

3 上样

（1）样品用平衡液配制，浑浊的样品要离心和过滤后上样。盐浓度太大的样品处理后再配。

（2）一般情况是让目标产品结合在柱子上，用平衡液洗去杂质，再选择一种洗脱液洗下目标产品。

（3）介质对样品组分吸附的程度取决于样品的带电性质、流动相的离子强度和pH值。盐浓度小，介质对样品组分吸附较牢。用DEAE介质时，推荐的pH值是小于目标产品等电点1个单位。

4 洗脱

Q琼脂糖凝胶FF介质可用增大盐浓度或减小pH值进行洗脱，常用增大盐浓度的办法洗脱。

5再生

一般用高盐浓度的缓冲液（含1~2mol/L NaCl）洗或减小pH洗10倍以上柱体积，接着用结合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。

若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。

6 在位清洗

（1）对于以离子键结合上去的蛋白，可以用2M NaCl去除。

（2）对沉淀蛋白、对以疏水性结合的蛋白或脂类，可用1M NaOH 去除。

（3）对强疏水性结合的蛋白、脂类等，用4~10倍柱体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗，但要注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加，否则容易产生气泡。

清洗完毕后，用至少3倍缓冲液平衡柱子。

7 注意

在装柱、使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干，气泡进入。

在使用过程中，不能使用强酸，如使用酸洗，应使用浓度低于0.1 M的冰醋酸。

8 去热源

用0.5M的氢氧化钠清洗柱子5~6小时或用0.1M的氢氧化钠24小时。或用以下方法步骤去除：

（1）2倍柱体积的70%乙醇；

（2）2倍柱体积50mM Tris-HCl pH7.5；

（3）1倍柱体积4M尿素；

（4）3倍柱体积的Tris缓冲液+0.1M NaCl；

以上缓冲液都在无热源的双蒸水中配制。

9 消毒

用0.5~1M NaOH室温下洗8~10倍柱体积，初始缓冲液平衡柱子。

10 灭菌

置介质于高压灭菌锅中120℃下30分钟。

五、注意事项

产品应密封贮存在4℃~25℃（保存溶液为20% 乙醇），通风、干燥、清洁的地方。不能冷冻。用过的柱子贮存在4℃（20% 乙醇）。避免与氧化剂接触；避免在pH< 4的环境中长时间暴露(一周,20℃)。

  备注：产品信息可能会有优化升级。请以实际标签信息为准。

产品简介：

琼脂糖凝胶4FF是在琼脂糖凝胶4B的基础上经过两次交联形成的高交联基质，微球的化学稳定性及物理性能显著增强，刚性增加，流速更快，使产品处理时间大大缩短。可用于生物大分子的凝胶层析。

1. 外观

本品为白色球状凝胶,无嗅、无味、无肉眼可见杂质。

2. 理化指标

*检测条件： 层析柱10mm×300mm  *柱床高15cm,25℃, 流动相为0.1mol/LNaCl

3. 贮存

产品应密封贮存在4℃~25℃（保存溶液为20% 乙醇），通风、干燥、清洁的地方。不能冷冻。用过的柱子贮存在4℃（20% 乙醇）。

4. 注意事项

本品应避免与氧化剂接触，避免长时间暴露在空气中。运输中应避免日晒、雨淋、重压，严禁与有毒、有害物品混运。

5. 应用

本产品具有很高的化学稳定性、高流速、较好的机械性能、可多次重复使用等特点，非特异性吸附低，回收率高，可用有机溶剂及1~2mol/L 的NaOH在位清洗，适用于工业规模生产，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的凝胶色谱纯化。

5.1 装柱

凝胶过滤介质的使用对装柱的要求较高，为了保证分离效果，一般通过柱子上加一个装柱器来使分离柱装满凝胶，或采用带有轴向加压装置的柱子。凝胶柱床一般高于60cm。装柱效果可用染料或丙酮-水溶液进行检验。以下过程为通用介质装填过程。若为带有轴向加压装置的柱子，可在柱床稳定后将柱床压紧，接好管路。

（1）让所有的材料和试剂达到室温。配制缓冲液。凝胶层析上样、平衡和洗脱只用一种低盐浓度的缓冲液。

（2）选择一根一定直径的柱子，长约30~60cm,根据柱子大小取所需量的凝胶（约为柱床体积的1.15倍），清洗掉20%乙醇，抽干，用缓冲液（按凝胶：缓冲液=3：1的比例）配成匀浆。

（3）将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位（液面略高于滤膜），务必使底端无气泡。

（4）用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。

（5）打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定。用缓冲液平衡柱子，到柱床稳定。

（6）最好用一个装柱器辅助装柱。装完后柱床上端轻轻刮平，上好柱头。

5.2 平衡

让缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。

5.3 上样

（1）样品用缓冲液配制，浑浊的样品要离心和过滤后上样。含盐量过大、浓度过小的样品要先做处理，再上样。

（2）介质对样品组分的分离是按组分分子量大小进行的，分子量大的先流出来。

（3）上样体积约为柱体积的1~2%，越小分离越好。

5.4 洗脱

用缓冲液洗脱，洗脱中保持流速、缓冲液组成不变。

5.5 再生

一般用缓冲液洗到平衡，可再次使用。

5.6 注意

在装柱、使用和保存柱子的时候，始终要避免柱子流干气泡进入。若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。

5.7 在位清洗

（1）对于以离子键结合上去的蛋白，可以用2M NaCl去除。

（2）对沉淀蛋白、对以疏水性结合的蛋白或脂类，可用1M NaOH 去除。

（3）对强疏水性结合的蛋白、脂类等，用4~10倍柱体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗，但要注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加，否则容易产生气泡。

清洗完毕后，用至少3倍缓冲液平衡柱子。

5.8 注意

在装柱、使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干气泡进入。

5.9 去热源

用0.5M的氢氧化钠清洗柱子5~6小时或用0.1M的氢氧化钠24小时。或用以下方法步骤去除：

（1）2倍柱体积的70%乙醇；

（2）2倍柱体积50mM Tris-HCl pH7.5；

（3）1倍柱体积4M尿素；

（4）3倍柱体积的Tris缓冲液+0.1M Nacl；

以上缓冲液都在无热源的双蒸水中配制。

5.10 消毒

用0.5~1M NaOH室温下洗8~10倍柱体积，初始缓冲液平衡柱子。

注意：上样之前，样品必须去除色素，否则色素会被吸附到填料上，影响填料的正常使用。

备注：产品信息可能会有优化升级。请以实际标签信息为准。

丁基-琼脂糖凝胶 4FF是将丁基键合在琼脂糖凝胶4FF上形成的一种可利用疏水相互作用来实现目标产品纯化分离的疏水类介质。用于生物大分子和乙肝疫苗的纯化分离。

1 外观

本品为白色球状凝胶，无嗅、无味、无肉眼可见杂质。

2 理化指标

*柱子：内径16mm、柱长10cm，柱床高5cm，25℃，流动相为0.1mol/LNaCl。

3 包装

产品以无菌试剂瓶密封包装，外贴标签，注明“品名、体积、颗粒大小、应用、生产单位”等内容。所选用的包装应有利于保证产品质量、方便运输和贮存。

4 运输

运输中应避免日晒、雨淋、重压，严禁与有毒、有害物品混运。

5 贮存

产品应密封贮存在4℃~30℃（保存溶液为20% 乙醇+0.1M醋酸钠），通风、干燥、清洁的地方。不能冷冻。

用过的柱子贮存在4℃（20% 乙醇）。

6 保质期：

5年。

7 应用

丁基-琼脂糖凝胶 4FF是一种疏水层析介质，利用样品中组分疏水性的不同进行分离。用于生物大分子的纯化分离。

下面简要介绍介质的使用过程。

7.1 装柱

（1）让所有的材料和试剂达到室温。配制初始缓冲液（平衡液）和洗脱缓冲液。

（2）根据柱子大小取所需量的凝胶，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始缓冲液（按凝胶：缓冲液=3：1的比例）配成匀浆。

（3）将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位（液面略高于滤膜），务必使底端无气泡。

（4）用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。

（5）打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定。用2~3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。

7.2 平衡

让平衡缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。平衡缓冲液一般是高盐浓度的缓冲液，如0.02~0.05mol/L的PBS加1~2.5mol/L(NH₄)₂SO₄等。

7.3 上样

（1）样品用平衡液配制，浑浊的样品要离心和过滤后上样。

（2）一般情况是让目标产品结合在柱子上，用平衡液洗去杂质，再选择一种洗脱液洗下目标产品。

（3）介质对样品组分吸附的程度取决于样品的疏水性质、流动相的离子强度和温度。盐浓度大、温度高或样品组分疏水性强，介质对组分吸附牢。

7.4 洗脱

疏水介质可用减小盐浓度进行洗脱。加表面活性剂或有机溶剂可加强洗脱。最常用的洗脱液是低盐浓度缓冲液，如0.02~0.05mol/L的PBS。

7.5 再生

一般用低盐浓度的缓冲液洗，洗10倍以上柱体积，接着用结合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。

若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。

7.6 在位清洗

（1）对于以离子键结合上去的蛋白，可以用2M Nacl去除。

（2）对沉淀蛋白、对以疏水性结合的蛋白或脂类，可用1M NaOH 去除。

（3）对强疏水性结合的蛋白、脂类等，用4~10倍柱体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗，但要注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加，否则容易产生气泡。

清洗完毕后，用至少3倍缓冲液平衡柱子。

7.7 注意

在装柱、使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干，气泡进入。

7.8 去热源

用0.5M的氢氧化钠清洗柱子5~6小时或用0.1M的氢氧化钠24小时。或用以下方法步骤去除：

（1）2倍柱体积的70%乙醇；

（2）2倍柱体积50mM Tris-Hcl pH7.5；

（3）1倍柱体积4M尿素；

（4）3倍柱体积的Tris缓冲液+0.1M Nacl；

上缓冲液都在无热源的双蒸水中配制。

7.9 消毒 用0.5~1M NaOH室温下洗8~10倍柱体积，初始缓冲液平衡柱子。

特别注意：

上样之前，样品必须去除色素，否则色素会被吸附到填料上，影响填料的正常使用。

  备注：产品信息可能会有优化升级。请以实际标签信息为准。

产品简介：

pGEX载体表达的外源蛋白与谷胱甘肽S-转移酶融合，因此可以通过谷胱甘肽-琼脂糖亲和层析进行纯化。GSTs是一类以谷胱甘肽（γ-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸）作为底物，通过形成硫醇尿酸失活毒性小分子的酶。由于GST对底物的亲和力是亚毫摩尔级的，因此谷胱甘肽固化于琼脂糖形成的亲和层析树脂对GST及其融合蛋白的纯化效率很高。可以用含游离谷胱甘肽的缓冲液洗脱结合GST融合蛋白。树脂用3mol/L NaCl的缓冲液再生。谷胱甘肽琼脂糖对GST融合蛋白的结合能力很强（每毫升柱床体积的树脂能结合8毫克融合蛋白）。

特性: 粒度：45-165µm 流速：75cm/h           工作PH：4-10 耐压：0.3Mpa载量：＞10mg 谷胱甘肽 S-转移酶

使用说明：

谷胱甘肽树脂的处理:

1. 轻轻颠倒盛有谷胱甘肽-琼脂糖树脂的容器，将树脂混成匀浆。

2. 取部分匀浆放入15mL聚丙烯管（每100mL 细菌培养物大约需要2mL 匀浆）。

3. 4℃ 500 g离心5分钟，小心去掉上清。

4. 在树脂中加入10倍柱床体积预冷的PBS，颠倒数次混匀，4℃ 500 g离心5分钟，小心去掉上清。

5. 每毫升树脂加入1毫升冷的PBS，制成50%匀浆，颠倒数次，混合均匀，悬液冰上放置待用。制备细胞抽提物：

6. 每100毫升培养物的细胞沉淀重悬于4mL PBS缓冲液中。

7. 加入溶菌酶至终浓度为1mg/mL,冰上放置30分钟。

8. 用针筒将10mL 浓度为0.2%的TritonX-100 强行注入黏稠的细胞裂解物中，剧烈振动数次混匀。加入DNase和RNase至终浓度5ug/mL, 4℃振动温育10分钟，4℃ 3000 g离心30分钟，去除不溶性细胞碎片，上清转移到一只新管中，加入DTT至终浓度1mmol/L。纯化融合蛋白：

9. 细胞裂解物与适量50%谷胱甘肽-琼脂糖树脂匀浆混和，每100毫升细菌培养物加2mL树脂，于室温轻摇30min。

10. 混合物于4℃以500 g离心5分钟，小心去掉上清并留样少许进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。

1. 沉淀中加入10倍柱床体积的冷的PBS，颠倒离心管数次混匀，洗去未与树脂结合的蛋白。

2. 4℃以500 g离心5分钟，小心去掉上清并留样少许进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。

3. 重复步骤11和12两次。

4. 结合的GST融合蛋白可用谷胱甘肽洗脱液洗脱，也可用凝血酶、肠激酶或Xa 因子切割，释放靶蛋白。

用谷胱甘肽洗脱融合蛋白：

5. 沉淀中加入1倍柱床体积的谷胱甘肽洗脱缓冲液，室温轻轻搅动10min，洗脱树脂上结合的蛋白。

6. 4℃以500 g离心5分钟，上清（含洗脱的融合蛋白）移至新管中。

7. 重复步骤a和b两次，合并3次上清。蛋白酶解从结合的GST融合蛋白上回收靶蛋白：

8. 在结合了融合蛋白的树脂中加入凝血酶、肠激酶或Xa 因子（根据融合蛋白中的位点选择），每mL树脂加入50单位溶于1mLPBS的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀，室温下振荡2—16小时。用小规模实验确定精确时间。

9. 4℃以500 g离心5分钟，上清小心移至新管中。（GST仍结合在树脂上，而靶蛋白在上清中，蛋白酶也在上清中，仍需要分离）

10. 10% SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析每一步样品的蛋白质组成。试剂配制：谷胱甘肽洗脱缓冲液：10mmol/L还原型谷胱甘肽，50mmol/L Tris-Cl (pH8.0)

 备注：产品信息可能会有优化升级。请以实际标签信息为准。

明胶-琼脂糖凝胶 4FF 是采用溴化氰法将明胶耦合到琼脂糖凝胶 4FF 基质上的一种亲和层析填 料。明胶是一种高分子糖蛋白，在多种细胞的表面和许多细胞外液（包括血浆）中都发现了明胶的 存在，它可以特异性的结合纤维连接蛋白。明胶琼脂糖凝胶 4FF 是专为纯化或除去纤维连接蛋白的 一种亲和层析填料。

1 技术指标

2 使用方法

2.1 准备凝胶

（1）让凝胶和所有的试剂达到工作时的温度。

（2）配制初始缓冲液（平衡液）和洗脱缓冲液。

（3）明胶琼脂糖凝胶 4FF 是保存在 20%的乙醇溶液中，取适量凝胶，清洗掉 20%的乙醇，抽 干。用缓冲液（按凝胶：缓冲液=3：1 的比例）配成匀浆。

2.2 装柱

（1）将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位（液面略高于滤膜），务必使底端 无气泡。

（2）用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口， 使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。

（3）打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的 1.33 倍的流速流过，使柱床稳定。用 2~3 倍柱体 积的缓冲液平衡柱子。

2.3 平衡 让平衡缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和 pH 不变。

2.4 上样 （1）样品用平衡液配制，常用磷酸盐缓冲液或 Tris-HCl 缓冲液，浑浊的样品要离心和过滤后 上样。

（2）一般情况是让目标产品结合在柱子上，用平衡液洗去杂质，再选择一种洗脱液洗下目标 产品。

2.4 洗脱 明胶-琼脂糖凝胶 4FF 可以采用不同的方式洗脱纤维连接蛋白：

（1）使用含有溴盐的缓冲液，例如溴化钠或溴化钾，并在低于平衡缓冲液 pH 值的条件下洗脱。 一种推荐的洗脱缓冲液是：0.05 M 的醋酸钠，pH 值 5.0，含 1.0 M 的溴化钠或溴化钾。

（2）可以在平衡缓冲液中加入 8 M 的脲，来洗脱吸附在凝胶上的纤维连接蛋白。

（3）纤维连接蛋白还可以通过在平衡缓冲液中添加精氨酸来进行洗脱。

2.6 再生 根据样品的性质，明胶琼脂糖凝胶 4FF 可以再生，以达到重复使用的目的。可以采用 2-3 柱体 积的高 pH 值（0.1 M 的 Tris – HCl，0.5 M NaCl，pH 值 8.5）的缓冲液和低 pH 值（0.1 M NaAC，0.5 M NaCl，pH 值 4.5）的缓冲液交替清洗凝胶。一个周期重复 3 次，然后用 3-5 倍柱体积的平衡缓冲 液平衡，即可进行下次试验。如果在纯化过程中使用了洗涤剂或变性剂（如 8 M 尿素），那么这些 洗涤剂也可以用于洗脱缓冲液中。 2.7 清洗 在一些应用中，像变性的蛋白质或脂类这样的样品，在再生过程没有被洗脱下来，可以通过加 入一些洗涤剂，例如：0.1％的 Triton X-100 ，在 37°C 的条件下洗一会。立即用至少 5 倍柱体积的 结合缓冲重新平衡。 2.8 储存 明胶-琼脂糖凝胶 4FF 应储存在 4-8℃，20%的乙醇溶液中。 特别注意： 上样之前，样品必须去除色素，否则色素会被吸附到填料上，影响填料的正常使用。

  备注：产品信息可能会有优化升级。请以实际标签信息为准。