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WarmStart® 变色 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液（含 UDG） #M1804L 500 rxns-NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – 等温扩增和链置换

WarmStart® 变色 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液（含 UDG）                              收藏

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#M1804L
500 rxns
13,939.00
无
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#M1804S
100 rxns
3,489.00
无
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特性

     一步法环介导的等温扩增（LAMP）的便捷解决方案，可用于 DNA 或 RNA 样品检测。

·   扩增反应快速，反应体系由粉红色变为黄色，使检测结果清晰可视化

·   预混液包含 UDG 和 dUTP，杜绝残留污染风险

·   WarmStart ®的温启动性能在室温下抑制酶活性，可轻松在室温条件下建立反应体系

·   如需了解 LAMP 及等温扩增的更多信息，请点击Learn more

·   如需了解 LAMP 变色反应在 COVID-19 中的应用，请点击Learn how

WarmStart® 变色 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液（含 UDG） #M1804L 500 rxns

       阴性结果显示粉红色，阳性结果显示变为黄色

概述

 含 UDG 的 WarmStart® LAMP 变色预混液是由 Bst 2.0 WarmStart DNA 聚合酶和 WarmStart® RTx 反转录酶在特殊的低缓冲力反应溶液中优化形成，该溶液包含可视化的 pH 指示剂，使检测 LAMP 和 RT-LAMP 的结果判定更加简单、快捷。预混液中包含的 dUTP 和 UDG 可有效减少反应间的残留污染。


该系统提供了一种快速、清晰可视化的扩增检测方案，其原理为 DNA 聚合酶在 LAMP 扩增反应中产生大量质子，引发 pH 值的下降，从而使反应液颜色从粉红色变为黄色（如需了解 LAMP 概述和引物设计，请观看 NEB 网站相关视频）。该预混液即可用于 LAMP 也可用于 RT-LAMP 反应，仅需加热装置及样品，即可在 15-40 分钟内肉眼判定阳性结果。

简单可视化的扩增检测

WarmStart® Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶 (UDG) #M1282S 200 units-NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 修复蛋白

WarmStart® Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶 (UDG)                              收藏

WarmStart® Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶 (UDG) #M1282S 200 units WarmStart® Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶 (UDG) #M1282S 200 units WarmStart® Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶 (UDG) #M1282S 200 units WarmStart® Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶 (UDG) #M1282S 200 units WarmStart® Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶 (UDG) #M1282S 200 units WarmStart® Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶 (UDG) #M1282S 200 units

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#M1282S
200 units
1,139.00
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产品特点

 WarmStart® Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶 (UDG) #M1282S 200 units

·   闪烁古生球菌（Archaeoglobus fulgidus）尿嘧啶-DNA 糖基酶

·   该酶为耐热单功能 DNA 糖基酶，从含尿嘧啶的 DNA 上催化释放尿嘧啶，能有效地水解双链和单 DNA 上的尿嘧啶

·   WarmStart 技术抑制酶在42°C以下的活性，可用于在等温扩增反应后消除产物污染

·   从双链或单链 DNA 上切下尿嘧啶

概述

WarmStart Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）来源于闪烁古生球菌（Archaeoglobus fulgidus），配方中加入了能够可逆结合的适配体，在低于 42℃ 条件下抑制酶活性。在 42℃ 以上具有活性，能有效地水解双链和单链 DNA 上的尿嘧啶。

产品描述

 图1.  WarmStart Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）在低于 42℃ 的温度下未检测到活性。

 WarmStart® Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶 (UDG) #M1282S 200 units

（A）Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）（NEB #M0279）和WarmStart Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）（NEB #M1282）的 UDG 酶活性温度曲线比较，结果显示 WarmStart在42ºC以下抑制 UDG 酶活性。在25-65ºC 的温度梯度下，分别用0.002 U Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）或WarmStart Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG），与1.8 pmol 含有单个尿嘧啶且带有荧光标记的 47-mer 单链DNA孵育30分钟。尿嘧啶被水解后，生成的碱基缺失片段经碱裂解（1M NaOH, 85°C 10分钟）处理，再通过Applied Biosystems 3730xl Genetic Analyzer ( 96 capillary array ) 进行电泳分析。结果显示，在 65°C 时 WarmStart Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）与Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）活性相当，但在 25°C  时未检测到酶活性。 

(B) 在 30-45ºC 温度范围通过链置换反应技术（SDA），对 500bp 长度 λDNA
进行含有 dUTP 的扩增反应，分别在有 WarmStart Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）（上图）、 Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）（中图）和无 UDG（下图）的情况下进行。在没有 UDG的情况下（下图），SDA 在整个温度范围内均产生了 500 bp 的扩增条带。在含有 Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）的反应中（中图），高于 31℃ 的温度时，SDA 反应被Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）完全抑制。抑制的产生是由于Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）在低温下的固有活性，将扩增子中的尿嘧啶水解产生碱基缺失位点，从而阻止其进一步扩增。然而，在 WarmStart Afu Uracil-DNA 糖基酶（UDG）存在时（上图），除了在 45℃ 左右的产物产量略有下降外，对其他温度条件下扩增几乎没有影响，这表明 WarmStart Afu Uracil-DNA 糖基酶（UDG）在 42℃ 以上才具有活性。
 
图2.  WarmStart Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）在 65℃ 有效地消化含尿嘧啶的扩增产物。
 
WarmStart® Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶 (UDG) #M1282S 200 units
 
（A）使用 WarmStart Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）在 SDA 反应扩增后消除产物污染示意图。在不含 UDG 或者含有 WarmStart Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）情况下，对 500bp 片段进行SDA 等温扩增，反应中含有 dUTP 底物，反应温度 34℃，在此温度下 WarmStart Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）不发挥活性。SDA 反应后，将产物在 65℃ 孵育 20 分钟以消化产物中的尿嘧啶。含有碱基缺失的 DNA 链在碱性条件下 85ºC 孵育 10 分钟会被降解。

（B）在 65ºC 下处理 20 分钟后，不含UDG和含有 WarmStart Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）样品的凝胶电泳结果显示，其 500 bp 扩增产物的产量相似。然后 85℃ 碱性条件下孵育 10 分钟，降解含有碱基缺失的 DNA 产物。经过处理，500 bp 的产物在不含 UDG 的反应中保持完整，而在含有 WarmStart Afu Uracil-DNA 糖基酶（UDG）的反应中变成较弱的条带或者弥散状产物。