RIPA裂解液（弱）

货号：BL652A

规格： 100ml

品牌：biosharp

商品详情：

RIPA Lysis Buffer（Mild）

RIPA裂解液（弱）

产品简介：

RIPA裂解液是一种经典的细胞组织快速裂解液，对动物细胞膜、胞浆、胞核成分均有较强的裂解作用，裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多种，根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。

RIPA裂解液（弱）的主要成分为50 mM Tris-Hcl（pH7.4），150mM NaCl，1% NP-40，0.25% sodium deoxycholate，以及Sodium Orthovanadate，Sodium Fluoride，EDTA等。本产品需要和常规的蛋白酶抑制剂一起使用，以达到更好的提取效果；本产品含有磷酸酶抑制剂，可用于提取磷酸化蛋白。

用RIPA裂解液（弱）裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

使用说明：

1、使裂解液充分融解，混匀，取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM，根据具体实验需求可选择加入蛋白酶抑制剂。

2、根据样品的类型进行如下操作：

对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍（若血清中的蛋白没有干扰，可不洗）。按照6孔板每孔加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。用移液器吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。

对于悬浮细胞：离心收集细胞，去除培养基，用手指把细胞用力弹散，按照6孔板每孔细胞加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应无明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管后再裂解。大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。

对于组织样品：把组织剪切成细小的碎片。按照每20mg组织加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。）使用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

3、样品充分裂解后，4℃ 10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western blot、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加150ul裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200或250ul。

注意：RIPA裂解液（弱）的裂解产物中经常会出现透明胶状物，其主要成分为基因组DNA，当检测的目标蛋白不与基因组DNA紧密结合，可以直接离心裂解产物，取上清液用于后续实验；如果目的蛋白与基因组DNA结合非常紧密，可通过超声处理打碎打散透明胶纸物，随后离心取上清用于后续实验。

注意事项：

1、为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。

2、需自备PMSF。

3、裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

4、可能需要通过一些预实验来摸索最佳的适合您实验条件的裂解液。

5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

保存条件：

-20℃保存，一年有效。加入蛋白酶抑制剂后建议适量分装 -20℃冻存，避免反复冻融。