外泌体(Exosome)及其五种常用纯化方式介绍

外泌体(Exosome)及其五种常用纯化方式介绍

外泌体(Exosome)是发现于1986年,一种直径约30~150nm的双层膜囊泡状结构小体,可由机体内多种细胞如免疫细胞、干细胞、心血管细胞、网织红细胞、血小板、神经细胞和肿瘤细胞等主动分泌产生,广泛分布于外周血、尿液、唾液、乳汁、腹水、羊水等体液中。

外泌体携带大量特异性的蛋白质(如细胞因子、生长因子)以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物质,在体内参与细胞通讯、细胞迁移、促血管新生和抗肿瘤免疫等生理过程,与多种疾病的发生和进程密切相关。由于外泌体的特殊结构和功能,使得它具有潜在的应用价值,一方面可以作为诊断多种疾病的生物指标,另一方面也可以作为治疗手段,未来有可能作为药物的天然载体用于临床治疗。

外泌体的研究日益活跃并令人瞩目。但是,由于外泌体的纳米尺寸,同其它类型的胞外囊泡在理化和生化特征上部分重叠,以及自身在大小、组成和功能方面存在异质性,其分离纯化也面临挑战。下面小欣给大家从文献中总结出了目前几大主流外泌体纯化方法,供大家参考。

1、差速离心法(UC)

通过差速超速离心分离外来体通常包括一系列不同离心力和持续时间的离心循环,以根据外来体与样品中其他成分的密度和大小差异来分离外来体,是目前最常用的分析方法。

优势:降低了使用分离试剂造成的污染和成本;样本处理量大,产量高。

缺点:仪器成本投入高,笨重,运行时间长,耗人力,不便携;超速离心可能破坏外泌体而影响下游分析;经常存在杂蛋白和脂蛋白污染。

2、基于大小的分离技术

超滤离心法也是目前很常用的纯化方法之一,其采用不同膜大小和截留分子量(MWCO)的膜过滤器,使大于MWCO的颗粒留下,而小于MWCO的颗粒被丢弃,超滤法作为一种有效的浓缩方法经常与其他外泌体分离方法联合应用。

分子排阻层析(SEC)也常被报道用于外泌体制备,使用具有化学惰性和稳定性的多孔填料,采用非吸附的层析方法,按照不同大小分子流经的路径长短不同来进行样品分离。外泌体在填料的排阻极限之外,无法进入填料的孔隙中,而紧跟着外水体积最先排出;蛋白等其它杂质由于分子量小,可以进入填料孔隙中,经过较长的路径而晚出峰,由此分离。

优势:超滤:快速,不需要特殊仪器,便携。将RNA提取液流经膜可直接用于RNA抽提。SEC:较高纯度外泌体;通常在重力流下操作从而保留了外泌体的完整性和生物活性;可重复性好;中度样本处理量。

缺点:超滤:仪器成本低,中等纯度;剪切力可引起外泌体损伤;有可能造成聚集和囊泡陷入膜孔中,或外泌体吸附在膜上而损失。SEC:仪器成本中等,需要专用的设备;不易放大,运行时间长。

3、外泌体沉淀(PEG-base)

聚乙二醇(PEG),它在水中具有超溶性,可以“束缚”水分子,迫使较难溶的成分,如EV、外泌体、蛋白质和其它较难溶的成分从溶液中分离出来。通常是4℃用PEG孵育样品过夜,随后通过低速离心或过滤即可沉淀回收外泌体。

优势:容易操作,不需要特殊仪器;样本处理量大,具有可放大性。

缺点:缺乏选择性的分离机制,容易和非外泌体污染共沉淀,如其它胞外囊泡、蛋白聚集体、 高丰度蛋白等;运行时间长,需要在分离前先去除脂蛋白等亚细胞颗粒,在分离后去除聚合物材料。

4、免疫亲和捕获技术

免疫捕获过程需要使用微珠,通常约1μm,其带有铁核,通常被称为磁珠,这些磁珠表面包被有可识别外泌体表面标记物(如CD9、CD63和CD81)的捕获分子。捕获分子通常是抗体,但也可能是配体或纳米小体。磁珠可生产用于捕获一个表面标记,如CD63,或使用泛捕获方法捕获所有这三个表面标记。

优势:针对特定来源或亚群的外泌体分离是很好的选择;相比于其它分离方法,纯度要高出很多;利于外泌体的分型。

缺点:试剂成本高,需要预先确认好的外泌体标签(抗原);样本处理量低,只有带标签的外泌体被识别而产量低;仅适用于Cell-free样品;肿瘤的异质性妨碍了免疫识别,可能会造成假阴性;抗原表位可能被封闭或掩藏。

5、微流控技术

微尺度下,利用外泌体的生理和生化特性进行分离,如免疫亲和特性、大小和密度,结合新兴的声波纳滤、电磁和电泳等技术。微流控技术包括捕获微流控技术、过滤微流控技术、磁分离微流控技术、声学分离微流控技术和介电泳微流控技术等。

优势:快速、低成本、高度便携、容易实现自动化,可将外泌体分离和后续检测进行集成。

缺点:缺乏标准化和大规模的临床样本测试,缺少方法验证,低/中等程度的样本处理量。

更多关于外泌体产品或技术问题请咨询上海金畔生物

W3A-M-100-StemRD WNT-3a, mouse, 小鼠WNT-3a蛋白-重组蛋白

英文名称: StemRD W3A-M-100 WNT-3a,Mouse,100ug
中文名称: 小鼠 WNT-3a 蛋白因子
注册品牌: StemRD
生产厂家: 美国StemRD公司
订购货号: W3A-M-100
规格型号: 100ug
保存温度: -80℃
到货时间: 2~5天

产品英文名称:StemRD W3A-M-100 WNT-3a,Mouse,100ug
产品中文名称:StemRD W3A-M-100 小鼠WNT-3a 蛋白因子,100ug

产品信息

Wnt糖蛋白是存在于多种生物体内的一种细胞外配体,Wnt作为形态发生素通过激发细胞内远离信号发送区域的浓度依赖反应控制胚胎形态发育。Wnt通路调节动物发育过程中的多个重要环节,例如细胞增殖、细胞迁徙及细胞分化。Wnt蛋白通过自分泌或旁分泌作用与位于细胞膜上的受体相结合,激活细胞内信号通路调节靶基因的表达,对细胞的增殖、分化、迁移、极性化和凋亡起到重要作用。

StemRD W3A-M-100 WNT-3a,Mouse,100ug 产品简介
wnt通路是细胞增殖分化的关键调控环节, 在胚胎发育和肿瘤发生中起着重要作用。wnt途径参与了基因表达调节、 细胞迁移粘附、细胞极化等过程,同时还与其它信号通路存在交叉协同。Wnt/β-catenin通路在进化过程中高度保守,此通路的主要分子构成及相关调 控机制已得到基本阐明。对神经系统而言已有足够证据显示此通路参与了对神经前体细胞增殖, 分化以及决定细胞命运的调控。
Wnt-3a 干细胞生长分化因子是Wnt基因家族中重要成员,zui近的一些研究发现, Wnt-3a 干细胞生长分化因子信号蛋白对神经干细胞的定向分化的调控作用表现的十分明显。小鼠WNT-3a 干细胞生长分化因子蛋白包含328个氨基酸。

StemRD W3A-M-100 小鼠WNT-3a 蛋白因子,100ug 产品特性
» StemRD W3A-M-100 小鼠WNT-3a 蛋白因子,100ug 干细胞生长分化因子活性经过NIH 3T3 细胞鉴定,纯度高
» StemRD W3A-M-100 小鼠WNT-3a 蛋白因子,100ug干细胞生长分化因子生物活性在NIH 3T3 细胞经过TCF报告基因实验鉴定The EC50为 50–150 ng/ml
» StemRD W3A-M-100 小鼠WNT-3a 蛋白因子,100ug 干细胞生长分化因子产品经过SDS-PAGE 和HPLC双层鉴定纯度大于90%

StemRD W3A-M-100 WNT-3a,Mouse,100ug 保存方法
The lyophilized protein is stable for at least 6 months if stored at -80 degreeC. Reconstituted protein is stable for at least two weeks at 4 degree C, but should be stored in aliquots at -80 degree C for longer term. Avoid repeated freeze and thaw.

StemRD W3A-M-100 WNT-3a,Mouse,100ug 产品英文描述
WNT-3a is a member of the WNT family of signaling proteins that play a key role in embryonic development and the integrity of adult tissues. StemRD W3A-M-100 WNT-3a,Mouse,100ug is a prototypic canonical WNT that signals through the β-catenin pathway. The predicted size of mouse StemRD W3A-M-100 WNT-3a,Mouse,100ug is a monomeric protein containing 333 amino acid residues. Due to glycosylation, it migrates at an apparent molecular weight of 40 kDa by SDS-PAGE analysis under nonreducing conditions. StemRD’s product W3A-M-100 WNT-3a,Mouse,100ug is expressed from a mouse cell line overexpressing mouse WNT-3a. Purification is performed with a proprietary process that is distinct from the published method.
? StemRD W3A-M-100 WNT-3a,Mouse,100ug Purity: Greater than 90% as determined by SDS-PAGE analysis
? StemRD W3A-M-100 WNT-3a,Mouse,100ug Biological Activity: The activity was determined by using a TCF reporter gene assay in NIH3T3 cells. The EC50 ranges from 50 – 150 ng/ml. Country of Origin USA

IsoAmp® II 通用 tHDA 试剂盒 #H0110S 50 次反应-NEB酶试剂 New England Biolabs

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs(NEB)酶试剂全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – 等温扩增和链置换

IsoAmp® II 通用 tHDA 试剂盒                              收藏

IsoAmp® II 通用 tHDA 试剂盒                                #H0110S 50 次反应

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#H0110S
50 次反应
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特性

 操作简单
 采用解旋酶将 DNA 双链分开,无需热循环
 反应可在恒温下进行
 可用于扩增和检测 DNA 短序列(70-120 bp)
 可用于各种模板,包括微生物基因组 DNA、病毒 DNA、质粒 DNA 与 cDNA
 采用优化的引物和缓冲液后,单拷贝的靶 DNA 可通过 tHDA 扩增,凝胶电泳检测 

概述

热解旋酶扩增法(tHDA)是一种在恒温条件下扩增核酸的新方法。和 PCR 一样,tHDA 反应选择性地扩增由两个引物所确定的靶序列。然而,与 PCR 不同的是,tHDA 使用的是解旋酶将 DNA 双链分开,而不是高温变性。因此,可以在恒温条件下扩增 DNA 而不需要热循环。tHDA 反应还能与反转录联用而进行 RNA 分析。

IsoAmp II 通用 tHDA 试剂盒基于第二代的热解旋酶扩增平台。此试剂盒提供 tHDA,反转录 HAD(RTHAD),实时定量 HAD(qHDA)和实时定量 RTHAD(qRT-HAD),所有反应都采用同一种反应缓冲液。 

IsoAmp II 通用 tHDA 试剂盒组成

– IsoAmp dNTP 溶液与 IsoAmp 酶混合液
– 10X 退火缓冲液 II、100 mM MgSO4、500 mM NaCl

– 对照模板和扩增引物 

IsoAmp® II 通用 tHDA 试剂盒                                #H0110S 50 次反应

HDA 技术,依赖解旋酶扩增:步骤 1:解旋酶解旋以及引物结合。步骤 2:DNA 聚合。步骤 3:DNA扩增。

手动台式压片机(红外粉末压片机) FY–15

手动台式压片机(红外粉末压片机) FY--15

手动台式压片机(红外粉末压片机) FY–15

  • 商品品牌: 思创精实
    商品编号:FY–15
  • 商品价格: 请与我们联系
  • 手动台式压片机(红外粉末压片机) FY–15-思创精实-FY–15

    • 应用类型:手动压片机
    • 最大压力:15T
    • 品牌属性:国产
    实验室常用设备|||混合分离|||压片机|||手动台式压片机(红外粉末压片机)FY–15
    手动台式压片机
    手动台式压片机(红外粉末压片机) FY–15

    FY手动压片机和FYD电动压片机广泛用于新材料,超导,粉末陶瓷,新型电源,建材等领

    域,可以和钙铁分析,红外光谱(IR),X荧光(XRF)分析仪器配套使用,用特定的模具可以压

    制成各种各样的片,柱及异型体,组合体等进行科学研究,应用非常广泛,使用简单、方

    便、可靠。

    特点:

    加压速度快,退模速度快,比同类产品效率高5倍以上,

    不掉压,高稳定性,不漏油,同类产品中仅有的不漏油产品。

    商品属性

    • 应用类型:手动压片机
    • 最大压力:15T
    • 品牌属性:国产
    商品属性
    商品名称 手动台式压片机(红外粉末压片机) FY–15-FY–15-思创精实
    型号 FY–15
    类别 实验室常用设备|||混合分离|||压片机|||手动台式压片机(红外粉末压片机)FY–15
    品牌 思创精实
    品牌简介 思创精实
    关键字 手动台式压片机,粉末,漏油,组合,超导,光谱,荧光

    手动台式压片机(红外粉末压片机) FY--15

    132116-spectrum透析袋MD40(截留分子量8000)-透析袋美国spectrum

    【简单介绍】

    spectrum透析袋MD40(截留分子量8000),产品名称:透析袋MD40(截留分子量8000),产品货号:132116,产品规格:5米/卷,压平宽度40mm,直径25.5mm,单位长度容量5.1 ml/cm,品牌:spectrum(美国光谱医学),RC膜,即用型。

    【详细说明】

    spectrum透析袋MD40(截留分子量8000),产品名称:透析袋MD40(截留分子量8000),产品货号:132116,产品规格:5米/卷,压平宽度40mm,直径25.5mm,单位长度容量5.1 ml/cm,品牌:spectrum(美国光谱医学),RC膜,即用型。

        标准级再生纤维素(RC)膜采用经再生处理的天然棉绒纤维制成,膜透明,柔韧,性能稳定,孔径精确,是实验室常规脱盐,换液以及大分子纯化等透析处理的理想选择,标准级RC膜具有良好的化学耐受性,可耐受低浓度的强酸碱溶液,高浓度的弱酸碱溶液,醇及温和有机溶剂,包括DMSO。长时间接触强有机溶剂可能造成膜损坏。标准级RC膜适用HP范围为2-12,适用温度范围为4-121 °C。Spectra/Por6仅含有极低水平的重金属杂质,一般不会影响实验结果,如实验样品较为敏感,可使用重金属漂洗液于使用前进行预处理。Spectra/Por7进一步增加预处理工艺以zui大限度降低重金属和硫化物的含量。

    Spectra/Por® 6产品10米/卷 

    Spectra/Por® 7产品5米/卷                                     

    订购信息:标准RC膜管,预处理型(Spectra/Por 6 & 7)

      截留分子量
    (道尔顿)
    扁平宽度
    (mm)
    直径
    (mm)
    容量/长度
    (ml/cm)
    Spectra/Por 6 Spectra/Por 7
      1,000 18 11.5 1.1 132636 132103
    38 24 4.6 132638 132104
    45 29 6.4 132640 132105
    2,000 18 11.5 1.1 132620 132107
    38 24 4.6 132625 132108
    45 29 6.4 132633 132109
    3,500 18 11.5 1.1 132590 132110
    45 29 6.4 132592 132111
    54 34 9.3 132594 132112
    8,000 8 5.1 0.20 128056 128356
    12 7.5 0.45 132579 132113
    18 11.5 1.1 128058 128358
    24 15 1.8 132580 132114
    32 20.4 3.3 132582 132115
    40 25.5 5.1 132584 132116
    50 32 7.9 132586 132131
    10,000 8 5.1 0.20 128106 128406
    12 7.5 0.45 132570 132117
    18 11.5 1.1 128118 128418
    24 15 1.8 132572 132118
    32 20.4 3.3 132574 132119
    45 29 6.4 132576 132120
    15,000 8 5.1 0.20 128156 128456
    12 7.5 0.45 132560 132121
    18 11.5 1.1 128158 128458
    24 15 1.8 132562 132122
    32 20.4 3.3 132564 132123
    45 29 6.4 132566 132124
    25,000 8 5.1 0.20 128206 128506
    12 7.5 0.45 132550 132125
    18 11.5 1.1 128218 128518
    24 15 1.8 128224 128524
    28 18 2.5 132552 132126
    34 22 3.7 132554 132127
    50,000 10 6.4 0.32 132539
    12 7.5 0.45 132540 132128
    28 18 2.5 132542 132129
    34 22 3.7 132544 132130

    备注:本公司销售的所有产品仅生化科研试验 

    spectrum透析袋MD40(截留分子量8000)

    Research Diets动物饲料D06062303 Formula 模型饲料配方表

    上海金畔生物科技有限公司代理Research Diets品牌动物饲料全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息。
    Research Diets动物饲料D06062303 Formula 模型饲料配方表

    D06062303

    Rodent Diet With 60 kcal% Fat (Mostly Lard and Safflower Oil)

    适用实验动物模型: 啮齿类 (大鼠/小鼠)
    饲料颜色: 紫色
    是否辐照处理/辐照产品号码 :

    Research Diets生产饲料大部分都可以送伽马辐照。我们会在这类的产品号结尾标注 “i” 字母以说明其为通过辐照处理的饲料,而饲料经过多轮辐照处理则会标示双字母 “ii” 以区别单轮辐照 “i”。如果您有任何关于辐照的问题,请联系我们的科研技术支持。

    纯化饲料配方表

    营养成分类别 成分 公克
    蛋白质 酪蛋白(乳酸; 30筛孔) 200.00 克
    蛋白质 胱氨酸, L 3.00 克
    碳水化合物 麦芽糊精 125.00 克
    碳水化合物 蔗糖(微粒) 72.80 克
    纤维素 纤维素(Solka Floc/FCC200) 50.00 克
    脂肪 猪油 130.00 克
    脂肪 红花油, USP 130.00 克
    脂肪 大豆油(USP) 10.00 克
    矿物质 S10026B 50.00 克
    维他命 酒石酸胆碱 2.00 克
    维他命 V10001C 1.00 克
    染色剂 染料,蓝色FD&C #1,Alum. Lake 35-42% 0.03 克
    染色剂 染料,红色FD&C #40,Alum. Lake 35-42% 0.03 克
    饲料配方总重(公克): 773.85 克

    饲料营养素热量组成 Physiological Fuel Values

    蛋白质: 20 % 千卡
    脂肪: 60 % 千卡
    碳水化合物: 20 % 千卡
    饲料能量密度: 5.21 千卡/每克

    碘克沙醇

    碘克沙醇

    货号:
    II0800

    品牌:
    Jinpan

    碘克沙醇

    暂无详情
    产品简介
    MDL MFCD04038831
    EC EINECS 618-837-0
    别名 Visipaque;Indixanol
    英文名称 Iodixanol
    CAS 92339-11-2
    分子式 C35H44I6N6O15
    分子量 1550.18
    纯度 ≥98%
    单位
    生物活性 Iodixanol (Visipaque, Iodixanolum, OptiPrep) is an iodine-containing non-ionic compound commonly used as a contrast agent during coronary angiography. It is the only iso-osmolar contrast agent, with an osmolality of 290 mOsm/kg H2O—the same as blood.[1]
    货期 1-2天
    SMILES OC(CN(C1=C(I)C(C(NCC(O)CO)=O)=C(I)C(C(NCC(O)CO)=O)=C1I)C(C)=O)CN(C2=C(I)C(C(NCC(O)CO)=O)=C(I)C(C(NCC(O)CO)=O)=C2I)C(C)=O
    靶点 Others
    数据来源文献 [1]. Zhang BC, Wu Q, Wang C, Li DY, Wang ZR. A meta-analysis of the risk of total cardiovascular events of isosmolar iodixanol compared with low-osmolar contrast media. J Cardiol. 2014 Apr;63(4):260-8.
    规格 5mg 25mg 50mg

    Iodixanol 是一种含碘的非离子放射性造影剂。