细胞凋亡实验检测原理及常用检测产品介绍

细胞凋亡是以细胞内明显的形态和生化变化为特征的程序性细胞死亡过程。是多细胞生物确保严重受损或突变细胞被清除的一个基本过程。这对调节免疫反应、发育和癌症中可能受损至关重要。我们有易于使用的凋亡试剂盒、膜联蛋白V试剂和针对常见凋亡标记物的抗体来确定细胞凋亡水平。

Annexin V

原理：在细胞凋亡的早期阶段，质膜被重新排列，导致细胞膜磷脂不对称性的改变。这些重排的作用之一是在外质膜上显示磷脂酰丝氨酸（PS）。在健康、静止的细胞中，PS仅位于内膜上，因此PS暴露是早期凋亡的迹象。膜联蛋白V在Ca2+存在下对PS具有高结合亲和力，因此是检测凋亡细胞的常用工具。

丝氨酸蛋白酶激活在细胞凋亡、肿瘤恶性程度以及乳腺癌、头颈癌的诊断指标中起着重要作用。

我们的荧光标记丝氨酸蛋白酶抑制剂（FLISP）试剂盒允许检测活细胞中丝氨酸蛋白酶的细胞内糜蛋白酶样活性。细胞内的活性糜蛋白酶样酶与荧光团（FAM）标记的FLISP抑制剂探针共价结合，在细胞内保留绿色荧光信号。细胞内活性糜蛋白酶样酶的浓度越高，观察到的荧光水平越高。FLISP试剂盒还包含碘化丙啶，用于流式细胞术鉴定死亡细胞，以及Hoechst 33342用于荧光显微镜下的核标记。

Active chymotrypsin-like serine protease activity staining by flow cytometry. Jurkat cells were treated as shown with 1mM staurosporine to induce apoptosis. The cells were then stained using the FLISP FAM-Phe-DAP Serine Protease Assay Kit including propidium iodide (APO009). Apoptotic cells positive for serine protease activity can be seen in the bottom right quadrant and dead cells positive for both serine protease and PI in the top right quadrant. Healthy cells are negative for both stains. Data acquired on the ZE5™ Cell Analyzer.

Cathepsin Kits

该试剂盒能够检测溶酶体中包含的活性组织蛋白酶，它们参与自噬途径和吞噬作用。当释放到细胞质中时，它们可以调节细胞凋亡的内源性和外源性途径。组织蛋白酶家族由几种储存在称为溶酶体的细胞器中的蛋白水解酶组成。

这也是涉及溶酶体的细胞自噬的关键途径，这是细胞自我消化的过程。

Fig. 5. Cathepsin B staining in HeLa cells. HeLa cells were stained with Magic Red Cathepsin B Kit (ICT937) using Hoechst as a counterstain. A, Hoechst. B, Magic Red Cathepsin B. C, overlay.

细胞凋亡相关检测产品

经典的信号通路研究

不同时期的凋亡检测

如需购买相关产品，或了解更多详情，请咨询上海金畔生物

干细胞研究中常用的蛋白和细胞因子

本文主要介绍干细胞研究中常用的几种蛋白和细胞因子，如您需要查看相关的产品，或咨询技术问题，可以联系Peprotech代理商上海金畔生物。

Activin A (活化素A)

别名：Inhibin beta-1, FRP, FSH (Follicle-stimulating hormone)-releasing protein

描述：Activin A是TGF-β超家族的成员之一，具有调节细胞增殖和分化、促进神经元存活等多种生物学活性。在人结直肠肿瘤和罹患乳腺癌的绝经后妇女中均检测到Activin A水平的增加。Activin A的生物学活性可被inhibins(抑制素)和可扩散的TGF-β拮抗剂–Follistatin(卵泡抑素)所中和。Activin A可与两种Activin I型受体(Act RI-A和Act RI-B)及两种Activin II型受体(Act RII-A和Act RII-B)结合。重组的Activin A 的分子量为26.0kDa,是由2条βA链经二硫键连接而成的同源二聚体，每条链含116个氨基酸残基。人、小鼠和大鼠Activin A的氨基酸序列100%一致。

FGF-basic (成纤维细胞生长因子)

别名：Fibroblast Growth Factor-basic, FGF-2, HBGF-2,Prostatropin

描述：FGF-basic是23个已知的FGF家族成员之一，该家族的蛋白通过促进细胞增殖和分化而在多种组织的出生前和出生后发育、以及再生中发挥重要作用。FGF-basic为非糖基化的肝素结合生长因子，表达于脑、垂体、肾、视网膜、骨，睾丸、肾上腺、肝、单核细胞、上皮细胞和内皮细胞。

FGF-basic通过FGFR 1b，1c，2c，3c和4进行信号传递。

LIF (白血病抑制因子)

别名：Leukemia Inhibitory Factor, Differentiation-stimulating factor, D factor, Melanoma-derived LPL inhibitor (MLPLI)

描述：LIF是一种多效性细胞因子，由多种细胞，包括T细胞、髓单核细胞系、成纤维细胞、肝、心脏和骨髓瘤等产生。LIF通过抑制自发分化而促进胚胎干细胞的长期维持，其还有刺激肝脏合成急性期蛋白、促进胆碱能神经的分化、通过抑制脂肪细胞中的脂蛋白脂酶而阻止脂肪的形成等作用。人LIF对于小鼠细胞具有完全的生物活性，因而也广泛用于小鼠胚胎干细胞的维持培养，而小鼠LIF对人细胞无活性，其仅作用于小鼠细胞。

TGF-β1(转化生长因子-β1)

别名：Transforming Growth Factor-β1,Differentiation inhibiting factor, Cartilage-inducing factor

描述：哺乳动物的TGF-β存在三个亚型，即TGF-β1, β2和β3。它们均通过相同的受体传递信号，产生相似的生物学反应。这些细胞因子具有调节细胞增殖、生长、分化、运动、以及细胞外基质的合成和沉积等多种功能，并且也参与胚胎发生、组织重塑和伤口愈合等生理过程。 TGF-β主要以无活性复合物的形式被细胞分泌，储存在细胞表面和细胞外基质中。从无活性复合物中释放出具生物活性的TGF-β亚型需要蛋白水解和/或Thrombospondin- 1 ( 凝血酶敏感蛋白-1)等蛋白诱导引起的构象改变等步骤。 TGF-β1是几乎所有类型细胞中分泌最多的亚型，最初因其具有诱导成纤维细胞表型转化的能力而被鉴定出来。近来发现，TGF-β1 也参与皮肤肿瘤的形成。

Vitronectin (玻璃粘连蛋白)

别名：VTN, Serum-spreading factor, V75

描述：Vitronectin为分泌型糖蛋白，在肝脏中合成。其在循环中主要以单体形式存在，但也可通过构象改变生成以二硫键相连的多聚体。多聚体Virro-nectin能有效地结合并掺入细胞外基质。在基质中，Vitronectin可通过结合多种整合素和其它白多糖而对细胞粘附起到支持作用。重组的Vit-ronectin 在人胚胎干细胞维持培养基中常用作一种化学成分明确的基质成分。

以PeproTech的重组人Vitronectin(产品编号：140-09替代Matrigel作为基质铺板，培养人胚胎干细胞 。重组人Vitronectin为纯化的单一蛋白，因此是化学成分明确的基质。

购买产品，咨询技术问题，请联系PeproTech代理商–上海金畔生物