NEBNext® 多样本接头引物试剂盒 1（Unique 双端 Index 引物，UMI 接头，适用于 DNA）
#E7395S 96 次反应
#E7395L 384 次反应
NEBNext® 多样本接头引物试剂盒 3（Unique 双端 Index 引物，UMI 接头，适用于 DNA）
#E7876S 96 次反应
#E7876L 384 次反应
NEBNext® 多样本接头引物试剂盒 4（Unique 双端 Index 引物，UMI 接头，适用于 DNA）
#E7878S 96 次反应
#E7878L 384 次反应
用于 Illumina® 平台的 NEBNext® 多样本接头引物试剂盒 2（Unique 双端 UMI 接头，适用于 DNA）为更精简、标记更多样本的 NGS 文库制备所设计，可以在单分子水平追踪测序反应，并在生物信息学水平去除错配 Reads，以获得最佳准确性。这些接头引物包含一对唯一的双端索引（i5 和 i7）和一段 UMI 序列，使制备的文库可以在有或没有 PCR 的情况下实现多重标记。该产品包含 96 个独特的、预混的含有 UMIs 的接头引物，包装在一个一次性的密封着可穿刺的铝箔封板膜 96 孔板中。通用引物在单独试管中提供。
NEBNext® 多样本接头引物系列产品可用于 NEBNext® 文库制备产品或其它标准的 Illumina® 平台兼容的文库制备流程。除该产品外，还有另外三款适用于 DNA 的含 Unique 双端 UMI 接头的 NEBNext® 多样本接头引物试剂盒（NEB #E7395、#E7876 和 #E7878），可用于标记 384 个样本；也可提供适用于 RNA 测序的 NEBNext® Unique 双端 UMI 接头（NEB #E7416）。对于不需要 UMI 标记的样本，NEBNext® 提供了多款产品便于灵活选择：96 种 Unique 双端 Index 引物（NEB #E6440、#E6442、#E6444、#E6446 和 #E6448）、8 x 12 种双端 Index 引物（NEB #E7600 和 #E7780）、单端 Index 引物（12 种和 96 种单端 Index 引物，NEB #E7335、#E7500、#E7710、#E7730 和 #E6609）和可适用于 EM-seq™ 和重亚硫酸盐测序的接头引物试剂盒（NEB #E7140）。
大宗订购，可通过我们的客户定制解决方案团队进行产品定制或批量采购。请通过 custom@neb-china.com 与我们联系。
用于 Illumina® 平台的 NEBNext® 多样本接头引物试剂盒 2（Unique 双端 UMI 接头，适用于 DNA）能够同时适用于 PCR-free 和基于扩增的 DNA 文库制备流程。请参阅下图以了解更多区别。
NEBNext® 多样本接头引物试剂盒 2（Unique 双端 UMI 接头，适用于 DNA）实验流程
NEBNext® 多样本接头引物试剂盒 2（Unique 双端 UMI 接头，适用于 DNA）可实现更高的连接效率。
A）以 100 ng、250 ng 和 500 ng 的人 NA19240 基因组 DNA（Coriell Institute for Biomedical Research）为起始样本，使用 NEBNext® Ultra™ II FS DNA 文库制备试剂盒（NEB #E7805）和图中相应供应商提供的接头引物制备文库，不进行 PCR 扩增。所使用的接头引物分别为：NEBNext® 多样本接头引物试剂盒（Unique 双端 UMI 接头，适用于 DNA）、xGen® Dual Index UMI Adapters (IDT®) 和 Nextflex® Unique Dual index Barcodes 1-96 (Bioo Scientific®)。连接后，使用 SPRIselect 磁珠进行两轮纯化，使用 NEBNext® 文库定量试剂盒（Illumina®）（NEB #E7630）对文库进行定量。
B)以 100 ng NA19240 基因组 DNA 为起始样本，使用 Ultra II FS DNA 文库制备试剂盒在 96 孔板中制备 90 个文库，不进行 PCR 扩增。所使用的 NEB、IDT 和 Bioo 的 30 个接头引物如图所示。磁珠纯化后，进行 qPCR 定量。
NEBNext® 多样本接头引物试剂盒 2（Unique 双端 UMI 接头，适用于 DNA）可更灵敏地检测低频变异。
AcroMetrix® 肿瘤 Hotspot Control DNA（Thermo Scientific®）作为突变 DNA 源（> 500 个突变，等位基因频率为 5-35%），以不同比例与 NA19240 基因组 DNA 混合，产生一系列不同的等位基因频率（5%-35%、2.5%-17.5% 和 1%-7%）。使用 NEBNext® Ultra II DNA 文库制备试剂盒（NEB #E7645）和 NEBNext® 多样本接头引物试剂盒（Unique 双端 UMI 接头，适用于 DNA）制备文库，并使用 Twist Bioscience® 的 152 个基因的定制 panel 对所有样本进行多重杂交捕获。文库使用 Illumina NovaSeq® 6000（PE140）进行测序，Reads 被降采样至 1.1 亿，并使用 BWA MEM（0.7.17）比对至 hg38。在不使用 UMI 序列或构建 UMI 共有序列（Fgbio 0.8.1）的情况下，使用 MarkDuplicates（Picard 2.20.6）分析比对上的 reads。使用 Strelka2（2.9.10）从最终的 BAM 文件中分析体细胞突变。
（A）当使用 UMIs 删除重复序列，所得的 SNV 总数和正确的数量都增加。
（B）用 UMI 进行共有序列比较，能提高检测灵敏度。等位基因频率越低，UMIs 在 SNV 检测中的优势就越大。
NEBNext® 多样本接头引物试剂盒 2（Unique 双端 UMI 接头，适用于 DNA）可实现一致的文库产量。
以 50 ng 的人 NA19240 基因组 DNA（Coriell Institute for Biomedical Research）为起始样本，使用 NEBNext® Ultra II FS PCR-free DNA 文库制备试剂盒（NEB #E6177）和 NEBNext® 多样本接头引物试剂盒 2（Unique 双端 UMI 接头，适用于 DNA）在 96 孔板中制备每个文库。文库经纯化后，进行 qPCR 定量。96 个样本之间的文库浓度从 3.4 nM 到 7.3 nM，差异为 2.1 倍。
NEBNext® 多样本接头引物试剂盒 2（Unique 双端 UMI 接头，适用于 DNA）可在 MiSeq® 和 NovaSeq 6000 上实现一致的聚类效率。
图注：使用 NEBNext® Ultra II FS PCR-free DNA 文库制备试剂盒（NEB #E6177）和 NEBNext® 多样本接头引物试剂盒 2（Unique 双端 UMI 接头，适用于 DNA）制备 96 个文库，以等摩尔浓度合并后在 Illumina MiSeq 和 NovaSeq 6000 上测序。对所有文库的总 Reads 数进行合计，并测定每个文库贡献的总 Reads 数的比例（每个文库的预期比例 = 1.04%）。所有 96 个文库都能实现一致的聚类效率，并在两个测序平台上实现预期频率。
使用 NEBNext® 多样本接头引物试剂盒（Unique 双端 UMI 接头，适用于 DNA）制备 384 个文库，可在 Illumina NovaSeq 6000 测序平台上实现一致的聚类效率。
使用 NEBNext® Ultra II FS PCR-free DNA 文库制备试剂盒（NEB #E6177）和 NEBNext® 多样本接头引物试剂盒 1-4（Unique 双端 UMI 接头，适用于 DNA）制备 384 个文库，以等摩尔浓度合并后在 Illumina NovaSeq 6000 上测序。对所有文库的总 Reads 数进行合计，并测定每个文库贡献的总 Reads 数的比例（每个文库的预期比例 = 0.26%）。所有 384 个文库都能实现一致的聚类效率，并在测序平台上实现预期频率。
