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SARS-CoV-2 N del31-33 突变检测试剂盒试剂盒-Wako富士胶片和光

发表于由

SARS-CoV-2 N del31-33 突变检测试剂盒试剂盒-Wako富士胶片和光

供货周期 一个月以上    

本产品是一步法RT-qPCR检测新-型-冠-状-病毒（SARS-CoV-2）Omicron毒株（B.1.1.529）中N区存在的特征性突变del31-33的试剂盒。del31-33 是指N区第31~33位中E、R 和 S三个氨基酸缺失的突变。Omicron毒株是在南非shǒu次发现的变异株，在刺突蛋白中含有30多个突变。它比传统的变异株具有更高的传染性，因而被世界卫生组织（WHO）列为“关切变异株

SARS-CoV-2 N del31-33 Mutation Detection KitSARS-CoV-2 N del31-33 突变检测试剂盒试剂盒-Wako富士胶片和光

SARS-CoV-2 N del31-33 突变检测试剂盒


本产品是一步法RT-qPCR检测新-型-冠-状-病毒（SARS-CoV-2）Omicron毒株（B.1.1.529）中N区存在的特征性突变del31-33的试剂盒。del31-33 是指N区第31~33位中E、R 和 S三个氨基酸缺失的突变。Omicron毒株是在南非shǒu次发现的变异株，在刺突蛋白中含有30多个突变。它比传统的变异株具有更高的传染性，因而被世界卫生组织（WHO）列为“关切变异株”（Variant of Concern；VOC）。

本产品针对的是突变位点少的N区突变，并非突变位点多的S区。因此引物探针不会与其他突变位点产生反应、干扰测试，即可特异性、高灵敏度检测Omicron。

经证实，本产品不与Alpha变异株、Beta变异株、Gamma变异株产生反应，只与Omicron毒株产生特异性反应。


SARS-CoV-2 N del31-33 突变检测试剂盒试剂盒-Wako富士胶片和光

SARS-CoV-2 N del31-33 突变检测试剂盒【281-37703】

◆试剂盒组成

20 Reactions

 RT 酶混合物（20×）

20 μL×1

 一步反应混合物（2×）

200 μL×1
野生型引物＆探针混合物（Wild Type Primer & Probe Mixture） 10 μL×1
N del31-33突变型引物＆探针混合物（N del31-33 Mutant Type Primer & Probe Mixture） 10 μL×1

◆特点


●　容易判断

●　使用突变型和传统型的引物/探针套装时，可通过比较Ct值进行判断

●　一步法RT-qPCR法快速检测突变

●　约70 min 即可完成

●　使用独立研发的引物探针进行高灵敏突变检测

●　当与其他突变体检测试剂盒组合使用时，所有变异株均可于同一反应条件下在1块96孔板上进行检测

●　N501Y、E484K、L452R、E484Q、del247-253、N del31-33试剂盒的所有PCR反应条件相同，因此可在

●　1块96孔板上进行检测

◆检测原理


采用TaqMan® 探针的1-step RT-qPCR。

 ▼使用前

在病毒RNA量多的情况下，使用传统（非突变）型检测用的Wild Type Primer / Probe，也能在变异株中观察到扩增信号。

请务必使用传统（非突变）型检测用的Wild Type Primer/Probe 和突变型检测用的Mutant Type  Primer/Probe两种进行检测。比较两种Ct值，若突变型检测用Mutant Type  Primer/Probe的Ct值较小，则判断该病毒为变异株。

◆实验案例


变异株检测的应用数据


用以下5种新-型-冠-状-毒株的纯化RNA对本试剂盒进行测试：

●　Omicron毒株（B.1.1.529）：TY38-873P1，由日本国立传染病研究所提供

●　alpha毒株（B.1.1.7）：QHN001，N501Y突变，由日本国立传染病研究所提供

●　Beta毒株（B.1.351）：TY8-612，N501Y突变，E484K突变，由日本国立传染病研究所提供

●　gamma毒株（P.1）：TY7-501，N501Y突变，E484K突变，由日本国立传染病研究所提供

●　传统毒株（VR-1986HK）：从ATCC购买的热灭活新-型-冠-状-病毒株

样本拷贝数：5000拷贝/孔

循环数：45

① Omicron株（B.1.1.529）：TY38-873P1


SARS-CoV-2 N del31-33 突变检测试剂盒试剂盒-Wako富士胶片和光

Omicron毒株在N区含有del31-33突变，因此N del31-33 Mutant type Primer / Prob的扩增曲线（红色）比Wild type Primer / Probe的扩增曲线（蓝色）更早起峰。

② alpha株（B.1.1.7）：QHN001

SARS-CoV-2 N del31-33 突变检测试剂盒试剂盒-Wako富士胶片和光

alpha毒株在N区中不含del31-33突变，因此Wild type Primer / Probe（蓝色）的扩增曲线比 N del31-33 Mutant type Primer / Probe（红色）的扩增曲线更早起峰。虽然alpha毒株与Omicron毒株均含有N501Y突变，但经确认本产品不与alpha毒株产生反应。

③ Beta株（B.1.351）：TY8-612

SARS-CoV-2 N del31-33 突变检测试剂盒试剂盒-Wako富士胶片和光

Beta毒株在N区中不含有del31-33突变，因此Wild type Primer / Probe的扩增曲线（蓝色）比N del31-33 Mutant type Primer / Probe的扩增曲线（红色）更早起峰。虽然Beta毒株与Omicron毒株均含有N501Y突变，但经确认本产品不与Beta毒株产生反应。

④ gamma毒株（P.1）：TY7-501

SARS-CoV-2 N del31-33 突变检测试剂盒试剂盒-Wako富士胶片和光

gamma毒株在N区中不含del31-33，因此Wild type Primer / Probe的扩增曲线（蓝色）比N del31-33 Mutant type Primer / Probe的扩增曲线更早起峰。虽然gamma毒株与Omicron毒株均有N501Y突变，但经确认本产品不与gamma毒株产生反应。

⑤ 传统毒株（VR-1986HK）：从ATCC购买的热灭活新-型-冠-状-病毒株

SARS-CoV-2 N del31-33 突变检测试剂盒试剂盒-Wako富士胶片和光

传统毒株在N区中不含del31-33突变，因此Wild type Primer / Probe的扩增曲线（蓝色）比N del31-33 Mutant type Primer / Probe的扩增曲线（红色）更早起峰。

对照RNA的检测数据


使用本试剂盒测定合成Omicron菌株的对照ssRNA。

SARS-CoV-2 N del31-33 突变检测试剂盒试剂盒-Wako富士胶片和光

在不含N del31-33突变的对照ssRNA（Wild Type Control RNA）中，Wild type Primer / Probe的扩增曲线（蓝色）比N del31-33 Mutant type Primer / Probe的扩增曲线（红色）更早起峰。

在含N del31-33突变的对照ssRNA（N del31-33 Mutant Type Control RNA）中，N del31-33 Mutant type Primer / Probe的扩增曲线（红色）比Wild type Primer / Probe的扩增曲线（蓝色）更早起峰。

PCR反应条件


将板置于qPCR仪板，按以下流程设定。

SARS-CoV-2 N del31-33 突变检测试剂盒试剂盒-Wako富士胶片和光

◆变异株一览表

变异株

N501Y突变

E484K突变

L452R突变

E484Q突变

del247-253

突变

N del31-33

突变

传统毒株

－

－

－

－

－

－

Alpha毒株

（B.1.1.7）

＋

－

－

－

－

－

Beta毒株

（B.1.351）

＋

＋

－

－

－

－

Gamma毒株

（P.1）

＋

＋

－

－

－

－

Epsilon毒株（B.1.427/B.1.429）

－

－

＋

－

－

－

Kappa毒株（B.1.617.1）

－

－

＋

＋

－

－

Delta毒株 （B.1.617.2）

－

－

＋

－

－

－

Lambda毒株 （C.37）

－

－

－

－

＋

－

Omicron毒株（B.1.1.529）

＋

－※

－

－※

－

＋

※含E484A突变

产品编号 产品名称 产品规格
281-37703 SARS-CoV-2 N del31-33 Mutation Detection Kit
SARS-CoV-2 N del31-33 突变检测试剂盒		 20 Reactions

※ 本页面产品仅供研究用，研究以外不可使用。


SARS-CoV-2 N del31-33 Mutation Detection Kit

SARS-CoV-2 N del31-33 突变检测试剂盒

SARS-COV-2中和抗体检测试剂盒疾病研究-Wako富士胶片和光

发表于由

SARS-COV-2中和抗体检测试剂盒疾病研究-Wako富士胶片和光

供货周期 一个月 应用领域 生物产业,制药

AdipoGen研发了针对突变体B.1.1.7、P.1、B.1.351的SARS-CoV-2中和抗体ELISA检测试剂盒。以下这些试剂盒含有检出人体血浆或血清中针对 SARS-CoV-2 突变体的功能性中和抗体所必要的关键试剂，基于比色法，能简单快捷地替代使用 Vero E6 细胞进行的经典的中和试验法。

AdipoGen再推出SARS-CoV-2研究中和抗体试剂盒，逐一识破SARS-CoV-2突变体！SARS-COV-2中和抗体检测试剂盒疾病研究-Wako富士胶片和光

SARS-COV-2中和抗体检测试剂盒

 

 

2020年至今，COVID-nineteen在全球肆虐，在世界范围内造成严重的公共健康危机和无可估量的经济损失。AdipoGen在疫情发展初期就投入到COVID-nineteen研究工具的开发中，此前推出的SARS-CoV-2 Neutralizing Antibodies DetectionKit (货号：AG-48B-0002-KI01)经过严密的科研验证，精确度高达98.3%，是用于定性SARS-CoV-2中和抗体的有效工具1。

然而随着疫症的大规模流行，多种SARS-CoV-2冠状病毒的突变毒株陆续在世界各地被发现，使得病毒更捉摸不定，疫情的发展更不明朗、更难以受控。其中以高传染性为特征的英国突变株B.1.1.7、巴西突变株P.1、南非突变株B.1.351以及印度突变株B.1.617为重点关注、最需要引起警惕的突变体。为更好地研究这些突变毒株，AdipoGen研发了针对突变体B.1.1.7、P.1、B.1.351的SARS-CoV-2中和抗体ELISA检测试剂盒。以下这些试剂盒含有检出人体血浆或血清中针对 SARS-CoV-2 突变体的功能性中和抗体所必要的关键试剂，基于比色法，能简单快捷地替代使用 Vero E6 细胞进行的经典的中和试验法。

 

◆SARS-CoV-2的B.1.1.7 突变体

 

SARS-COV-2中和抗体检测试剂盒疾病研究-Wako富士胶片和光

 

B.1.1.7 （也称作20I/501Y.V1、 VOC 202012/01）突变体在英国初次被发现，并于2020年12月开始在美国大范围传播，逐渐成为最常见的病毒2,7。突变产生于棘突蛋白的受体结合域（receptor binding domain，缩写RBD） 的 501 位（N501Y）7，并且相比以往的突变体，B.1.1.7的传播性高出40~70%。今年1月，广州亦报告一例从英国输入的B.1.1.7阳性个例，所幸在入境闭环隔离管理经核酸筛查及时发现，因此没有发生大规模传播及社区感染3。今年5月深圳市盐田区在国际货轮登轮作业人员例行检测中发现1例COVID-nineteen无症状感染者，随后发现多关联病例，病毒高度同源，亦均属于英国变异株B.1.1.74。

 

 

名称

 SARS-CoV-2 Neutralizing Antibodies Detection Kit (B.1.1.7 Variant, UK)

规格

 1 kit (96 tests)

应用

 定性ELISA（比色法）

物种交叉性

 鸟类、牛、山羊、豚鼠、人、猴、小鼠、猪、兔、大鼠

样品类型

 血浆、血清

 

 

◆SARS-CoV-2的P.1 突变体

 

P.1 （也称作20J/501Y.V3）突变体在巴西初次检测出，于棘突蛋白RBD 的417、 484 和 501 (K417T、E484K、N501Y）携带三个突变7。P.1或巴西突变体是 SARS-CoV-2 冠状病毒的一种形式，可能是导致巴西北部城市Manaus的病例激增的原因。研究指出，P.1 的传染性或高出以往的SARS-CoV-2病毒株1.7~2.4倍，并且患过COVID-nineteen的人群依然有可能被P.1突变体再度感染5。2021年4月，广东省从两例境外输入病例样本中初次检测到属于P.1, 20J/501Y.V3的突变毒株6。

 

名称

 SARS-CoV-2 Neutralizing Antibodies Detection Kit (P.1 Variant, BR)

规格

 1 kit (96 tests)

应用

 定性ELISA（比色法）

物种交叉性

 鸟类、牛、山羊、豚鼠、人、猴、小鼠、猪、兔、大鼠

样品类型

 血浆、血清

 

 

◆SARS-CoV-2的B.1.351 突变体

 

在南非发现的 SARS-CoV-2 的突变体称为 B.1.351（别名20H/501Y.V2）。该突变体在棘突蛋白RBD 的第 417、484 和 501 位（K417N、E484K、N501Y）携带三个突变8，并且B.1.351与更高的病毒载量相关，这可能意味着传染性有上升的趋势。2021年3月16日从菲律宾入境青岛的无症状感染者中，采集检测到基因序列属于B.1.351分支的病毒样本7。

 

SARS-COV-2中和抗体检测试剂盒疾病研究-Wako富士胶片和光

 

名称

 SARS-CoV-2 Neutralizing Antibodies Detection Kit (B.1.351 Variant, SA)

规格

 1 kit (96 tests)

应用

 定性ELISA（比色法）

物种交叉性

 鸟类、牛、山羊、豚鼠、人、猴、小鼠、猪、兔、大鼠

样品类型

 血浆、血清

 

 

◆产品列表

 

产品编号

产品名称

包装

AG-48B-0003-KI01

SARS-CoV-2   Neutralizing Antibodies Detection Kit(B.1.1.7 Variant, UK)

96 wells

AG-48B-0004-KI01

SARS-CoV-2   Neutralizing Antibodies Detection Kit(P.1 Variant, BR)

AG-48B-0005-KI01

SARS-CoV-2   Neutralizing Antibodies Detection Kit(B.1.351 Variant, SA)

 

 

相关产品

 

各种突变体的SARS-CoV-2重组棘突蛋白

 

产品编号

产品名称

包装

AG-40B-0202-3050

SARS-CoV-2   Spike Protein S1 (RBD):Fc (human)(rec.)(B.1.1.7 Variant, UK)

3 x 50 µg

AG-40B-0202-C050

50 µg

AG-40B-0204-3050

SARS-CoV-2   Spike Protein S1 (RBD):Fc (human)(rec.)(P.1 Variant, BR)

3 x 50 µg

AG-40B-0204-C050

50 µg

AG-40B-0203-3050

SARS-CoV-2   Spike Protein S1 (RBD):Fc (human)(rec.)(B.1.351 Variant, SA)

3 x 50 µg

AG-40B-0203-C050

50 µg

 

※以上所有产品仅供实验研究用，不可用于人体，不可用作医药品、食品、临床诊断等。

 

 

◆参考资料

 

1.

Comparison of two commercial surrogate ELISAs to detect a neutralising antibody response to SARS-CoV-2.

adipogen.com/pub/media/wysiwyg/Landing-Pages/COVID-19/Comparison_of_two_commercial_surrogate_ELISAs_to_detect_a_neutralizing_antibody_response_to_SARS-CoV-2.pdf

2.

CDC says there's no evidence of a 'USA variant' of the coronavirus, dismissing rumors stoked by the White House task force. 

laptrinhx.com/cdc-says-there-s-no-evidence-of-a-usa-variant-of-the-coronavirus-dismissing-rumors-stoked-by-the-white-house-task-force-196506208/

3.

广东：从一例英国输入确诊病例中发现B.1.1.7突变株 

www.chinanews.coｍ/gn/2021/01-03/9377470.shtml

4.

深圳：11例无症状感染者基因组溯源已完成，均为同一英国变异株 

new.qq.com/omn/20210531/20210531A06A0500.html

5.

The P.1 coronavirus variant is twice as transmissible as earlier strains 

www.sciencenews。。ｏｒｇ/article/covid-coronavirus-p1-variant-brazil-strain-transmission-immunity

6.

广东省发现两例巴西变异毒株 

www.sohu.coｍ/a/465595558_359980

7.

山东报告1例COVID-nineteen南非变异株无症状感染 

m.news.cctv.com/2021/03/28/ARTIDcKiz7RLxiQBkcAN8jcp210328.shtml

8.

Science Brief: Emerging SARS-CoV-2 Variants 

https://bit.ly/2SCVop1​

 

Luna® SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒 #E3019L 480 rnxs-NEB酶试剂 New England Biolabs

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – qPCR & RT-qPCR

Luna® SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒                              收藏

货 号
规 格
价 格(元)
北京库存
上海库存
广州库存
成都库存
苏州库存
武汉库存

#E3019L
480 rnxs
16,219.00
无
无
无
无
无
无

#E3019S
96 rxns
3,719.00
无
无
无
无
无
无

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特性

Luna® SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒用于 SARS-CoV-2 的实时 RT-PCR 检测

Ÿ   对 2019-nCoV_N1 和 2019-nCoV_N2 靶标以及人源 RNase P 基因进行多重检测，支持高通量检测流程

Ÿ   通过将 RNase P 内标的反向引物设计为跨外显子序列，降低基因组 DNA 的扩增背景

Ÿ   4X 浓度的 RT-qPCR 预混液支持更大的上样量，提高检测灵敏度

Ÿ   Luna 温启动反转录酶和热启动 Taq 酶共同提升反应特异性和功效，可在室温条件下建立体系

Ÿ   预混液中包含热敏 UDG 和 dUTP，防止残留污染

Ÿ   支持混合样品池检测，且不影响灵敏度

Ÿ   欲了解 NEB 如何支持 COVID-19 研究，请点击 COVID-19 research，其中详述了多种 RT-qPCR 病毒检测方案

产品说明

 Luna® SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒 #E3019L 480 rnxs

使用 Luna SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒，在 96 孔板上检测 94 个不同的样本。结果通过荧光通道显示。 

Luna® SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒经过优化，适用于水解探针法的 SARS-CoV-2 实时 RT-PCR 检测。在同一管中，RNA 首先由反转录酶转化为 cDNA，然后使用 DNA 依赖型 DNA 聚合酶扩增 cDNA，从而可以进行 qPCR 定量。基于探针法的 qPCR / RT-qPCR 原理是利用聚合酶的 5´ → 3´ 外切酶活性，将淬灭的目标特异性探针切断发出荧光，并实时监测荧光值的增加，以测量 PCR 每个循环中的 DNA 扩增。在荧光信号显著超过背景荧光的位置，可以确定 Cq 值。Cq 值可用于评估两个或多个样品的靶基因相对丰度。

图 1：Luna® SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒组分

Luna® SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒 #E3019L 480 rnxs

图 2：Luna SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒可在一个反应中同时检测两个 N 基因位点和人源 RNase P 基因

Luna® SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒 #E3019L 480 rnxs

A. SARS-CoV-2 的两组引物探针序列源于 CDC 提供，其中探针改为两种荧光标记（N1: HEX, N2: FAM）。

B. RNase P 内标包含 Cy5 标记的探针和重新设计的反向引物。该引物的跨外显子设计，避免了人基因组 DNA（含有 2.4 kb 内含子）的扩增干扰。


SARS-CoV-2 引物/探针混合物包含 SARS-CoV-2 病毒中 N 基因两个区域的引物和探针 [基于美国疾病控制与预防中心（CDC）提供的序列]。两条探针带有不同的荧光标记（N1: HEX;N2: FAM），可在 qPCR 仪器的两个不同通道中同时观测。为了确保检测样品的完整性和无抑制物，还包含一套用于扩增人源 RNase P 基因的内标（IC）引物和探针。该靶基因的反向引物与 CDC 的设计不同，修改为跨外显子序列，以降低残留基因组 DNA 的扩增背景。IC 的扩增可在 Cy5 通道观测。产品同时还提供阳性对照（PC）（含有 SARS-CoV-2 N 基因的质粒）。


该试剂盒包含 Luna 通用探针一步法 RT-qPCR 4X 预混液，含 UDG（NEB #M3019），支持更大的上样量和混合样品池检测，对灵敏度和特异性的影响极小。该预混液包含一步法 RT-qPCR 的所有组分，和独特校对参比染料，可与多种 qPCR 仪器兼容，包括需要高 ROX 或低 ROX 参比信号的仪器。独具特色的是：预混液还包含防止残留污染的热敏 UDG 和 dUTP，以及有助于体系建立的无荧光可见示踪染料。该示踪染料与 qPCR 常用荧光基团的光谱没有重叠，因此不会干扰实时检测。

 

图 3：Luna SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒的检测下限比 TaqPath™1-Step RT-qPCR Master Mix, CG 更低

 Luna® SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒 #E3019L 480 rnxs

将下述两种试剂盒进行检测下限（LOD）比较：使用 Luna SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒对 2019-nCoV_N1（HEX）和 2019-nCoV_N2（FAM）进行多重 RT-qPCR 检测，实验设置参照 E3019 产品说明书；使用 TaqPath 1-Step RT-qPCR Master Mix, CG 对 2019-nCoV_ N1（FAM）和 2019-nCoV_N2（FAM）进行单重 RT-qPCR 检测，实验设置参照美国疾控中心 2019-nCoV 实时 RT-PCR 诊断指南。实验样品：将 Twist 公司合成的 SARS-CoV-2 RNA 对照 2 掺入到 10 ng Jurkat 总 RNA 中。实验仪器为 Applied Biosystems® 7500 Fast 实时荧光定量仪 （96 孔板，20 µl 反应体系）。结果显示 Luna 试剂盒对两个靶标的检测下限为 5 拷贝/反应，而 TaqPath 为 10 拷贝/反应。

 

图 4：Luna SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒适用于纯化 RNA 的混合样品池检测

Luna® SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒 #E3019L 480 rnxs

通过将一份 2 µl 的模拟阳性样品（10 拷贝的 Twist 合成 SARS-CoV-2 RNA 对照 2 掺入到 10 ng Jurkat 总 RNA）与四份 2 µl 的模拟阴性样品（仅含 10 ng Jurkat 总 RNA）混合，制备出包含五份样品的混合样品池。将混合样品池（10 µl）与单独样品（2 µl，含 10 拷贝 N 基因和 10 ng Jurkat 总 RNA）进行性能比较。实验仪器为 Applied Biosystems® 7500 Fast 实时荧光定量仪（96 孔板，20 µl 反应体系）。N1 和 N2 靶标的扩增曲线显示，单独和掺入混合样品池的阳性样品 Cq 值相似。由于混合样品池中人源总 RNA 量是单独样品的 5 倍，因此正如预期，混合样品池 RNase P 基因的 Cq 值更小。

图 5：Luna SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒的检测下限（LOD）

Luna® SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒 #E3019L 480 rnxs 

 通过 Luna SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒对多种 SARS-CoV-2 RNA 对照样品中的 2019-nCoV_N1（HEX）和 2019-nCoV_N2（FAM）靶标进行多重 RT-qPCR 检测，获得该试剂盒的检测下限（LOD）。实验样品：将 Twist 公司合成的 SARS-CoV-2 RNA 对照 2 掺入到 10 ng Jurkat 总 RNA 中（图 A）。两位实验人员同时使用三种仪器进行平行测试（96 孔板，20 µl 反应体系）：Applied Biosystems（ABI）7500 Fast Real-Time instrument、ABI QuantStudio™ 6 Flex Real-Time PCR system，以及 Bio-Rad CFX instrument。结果显示：Twist RNA 的检测下限均为 5 拷贝/反应。此外还测试了其它样品类型（图 B）：SARS-CoV-2 基因组 RNA 源自 ATCC（ATCC® VR-1986D™）、NIST（Fragment 1 – Includes SARS-CoV-2 sequence: 25949-29698 of isolate USA-WA1/2020），以及 SeraCare AccuPlex™ SARS-CoV-2 Verification Panel V2（0505-0132）。上述 RNA 均由 Monarch 总 RNA 小量提取试剂盒（NEB# T2010）提取。所有 RNA 样品均掺入到 10 ng Jurkat 总 RNA，使用 ABI 7500 Fast Real-Time instrument 检测。假设 RNA 提取的回收率为 100%，则各样品检测下限为：ATCC 的 SARS-CoV-2 基因组 RNA 为 2.5 GE（genomic copy equivalent）、NIST SARS-CoV-2 测试样品为 1×107 倍稀释、SeraCare AccuPlex 样品为 15 拷贝。


图 6：与 TaqPath 1-Step RT-qPCR Master Mix CG相比，Luna 通用探针一步法 RT-qPCR 4X 预混液，含 UDG 对 SARS-CoV-2 N2 靶标的检测性能更好

Luna® SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒 #E3019L 480 rnxs 

 

A. 使用 Luna 通用探针一步法 RT-qPCR 4X 预混液，含 UDG 对 2019-nCoV_1（HEX）和 2019-nCoV_N2（FAM）进行单重 RT-qPCR，实验设置参照 E3019 产品说明书。B. 使用 TaqPath 1-Step RT-qPCR Master Mix, CG 对 2019-nCoV_N1（FAM）和 2019-nCoV_N2（FAM）进行单重 RT-qPCR，实验设置参照美国疾控中心 2019-nCoV 实时 RT-PCR 诊断指南。实验样品：将 Twist 公司合成的 SARS-CoV-2 RNA 对照 2 掺入到 10 ng Jurkat 总 RNA 中，实验评估了样品 5-log 浓度范围扩增结果。实验仪器为 Applied Biosystems® 7500 Fast 实时荧光定量仪（96 孔板，20 µl 反应体系）。在上述条件下，Luna 和 TaqPath 对 N1 靶标的扩增结果都很好。对于 N2 靶标，尽管 TaqPath 可检测 10 个拷贝样品，但线性度并不理想，而 Luna 线性度更好，且 Cq 值出现更早。

 


Luna 通用探针一步法 RT-qPCR 4X 预混液，含 UDG 结合了热启动 Taq DNA 聚合酶和具有新型温启动活性的反转录酶，可通过基于适配体的可逆抑制来双重控制酶的活性，这种温控活化机制可避免热循环前的非特异引物结合和扩增，从而让室温建立体系更安全。经改造的 Luna 温启动反转录酶具有更高的热稳定性，最佳反应温度为 55°C。


图 7：Luna RT-qPCR 预混液的室温稳定性让实验流程更灵活

 

Luna® SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒 #E3019L 480 rnxs

使用 Luna 通用探针一步法 RT-qPCR 4X 预混液，含 UDG 对2019-nCoV_N1（HEX）和 2019-nCoV_N2（FAM）进行单重（SP）和多重（MP）RT-qPCR，实验设置参照 E3019 产品说明书。使用 TaqPath 1-Step RT-qPCR Master Mix, CG 对 2019-nCoV_N1（FAM）和 2019-nCoV_N2（FAM）进行单重 RT-qPCR，实验设置参照美国疾控中心 2019-nCoV 实时 RT-PCR 诊断指南。实验样品：将 Twist 公司合成的 SARS-CoV-2 RNA 对照 2 掺入到 10 ng Jurkat 总 RNA 中，实验评估了样品 5-log 浓度范围（100,000-10 拷贝）的扩增结果。上机前，将 RT-qPCR 反应体系分别室温孵育 0、2、5、24 小时。实验仪器为 Applied Biosystems® 7500 Fast 实时荧光定量仪（96 孔板，20 µl 反应体系）。结果显示 Luna 通用探针一步法 RT-qPCR 预混液孵育 0-24 小时的实验结果一致，而 TaqPath 孵育 2 小时后，Cq值延迟≥1，实验效果随孵育时间的延长而下降。

慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统酶试剂盒Takara Clontech

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慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Clontech 632668 Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (WT Spike, Full Length) 12 Rxns ￥13,301 慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统 慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统 慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统
Clontech 632669 Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (D614G Spike, Full Length) 12 Rxns ￥13,301 慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统 慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统 慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统
Clontech 631292 Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (B.1.351 Spike, Full Length) 12 Rxns ￥13,529 慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统 慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统 慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统
Clontech 632670 Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (WT Spike, Truncated) 12 Rxns ￥13,301 慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统 慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统 慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统
Clontech 632671 Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (D614G Spike, Truncated) 12 Rxns ￥13,301 慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统 慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统 慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统
Clontech 631293 Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (B.1.351 Spike, Truncated) 12 Rxns ￥13,529 慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统 慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统 慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统
Clontech 631295 Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (Universal) 16 Rxns ￥13,404 慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统 慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统 慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统
Clontech 632672 Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Mix (WT Spike, Full Length) 12 Rxns ￥10,686 慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统 慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统 慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统
Clontech 632673 Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Mix (D614G Spike, Full Length) 12 Rxns ￥10,686 慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统 慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统 慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统
Clontech 631290 Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Mix (B.1.351 Spike, Full Length) 12 Rxns ￥10,916 慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统 慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统 慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统
Clontech 632674 Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Mix (WT Spike, Truncated) 12 Rxns ￥10,686 慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统 慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统 慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统
Clontech 632675 Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Mix (D614G Spike, Truncated) 12 Rxns ￥10,686 慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统 慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统 慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统
Clontech 631291 Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Mix (B.1.351 Spike, Truncated) 12 Rxns ￥10,916 慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统 慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统 慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统
Clontech 632676 Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Mix (No-Envelope Control) 6 Rxns ￥5,182 慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统 慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统 慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统
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开发COVID-19疗法的一个共同目标就是要证明对SARS-CoV-2病毒的感染具有抑制作用。基于安全措施考虑，目前研究人员大多使用带有SARS-CoV-2刺突蛋白（spike protein）的假病毒（Ni et al. 2020, Shang et al. 2020）替代SARS-CoV-2活病毒开展研究。我们对Lenti-X包装系统进行了优化，这样可以很方便地制备高滴度的spike-假慢病毒，为这些研究工作提供支持。
 
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots是一种假型慢病毒包装系统，用于简便制备具有SARS-CoV-2刺突蛋白作为包膜蛋白的假型慢病毒，有两种类型产品可供选择。
 
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (Universal)使您能够轻松灵活地制备任何所需要的SARS-CoV-2刺突蛋白变体的高滴度假型慢病毒。只需将任意所需的SARS-CoV-2刺突蛋白变体序列克隆到所提供的表达载体中，用灭菌水稀释所选择的表达载体，然后将混合物添加到试剂盒中提供的单次反应管中。然后，将重组后的转染混合物添加至10 cm培养皿培养的包装细胞中。为方便使用，我们提供分别编码截短的SARS-CoV-2刺突蛋白变体D614G、B.1.1.7和B.1.351的三个质粒。使用提供的刺突蛋白变体序列作为模板和pEmpty载体，通过简便的一步In-Fusion Snap Assembly反应可以轻松构建所需要的SARS-CoV-2刺突蛋白变体。
 
其它Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots试剂盒包括：含有Xfect转染试剂和慢病毒包装质粒的冻干混合物，慢病毒包装质粒携带四种不同刺突蛋白变体中的其中一种；表达绿色荧光蛋白质ZsGreen1和荧光素酶报告基因的转移载体；制备缺少包膜蛋白慢病毒粒子的转染混合物（通常用作阴性对照）。使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots试剂盒，通过简便的一步法即可获得高滴度SARS-CoV-2假病毒：只需将含有您选择的转移载体的水溶液添加至单管中，然后使用重组后的转染混合物转染培养在10厘米培养皿中的包装细胞Lenti-X 293T Cell Line（Code No. 632180）。转染后48–72小时收集病毒上清液。
 
有多种包装系统可供选择，可制备带有6种不同SARS-CoV-2刺突蛋白变体的病毒粒子：

· WT Spike, Full Length—野生型（全长），来源于新型冠状病毒SARS-CoV-2 Wuhan-Hu-1分离株 (NC_045512.2) , 我们对密码子进行了优化，可以在哺乳动物细胞中表达
· D614G Spike, Full length—D614G变异型（全长），刺突蛋白编码序列包含D614G突变; 自COVID-19爆发以来，这种变异型的流行性迅速上升 (Isabel et al. 2020)
· B.1.351 Spike，Full Length—B.1.351变异型（全长），最初在南非确定的变异株，WHO划分为β型。
· WT Spike, Truncated—野生型（Truncated）
· D614G Spike，Truncated—D614G变异型（Truncated）
· B.1.351 Spike，Truncated—B.1.351变异型（Truncated）
截短的野生型和D614G、B.1.351变异型刺突蛋白编码序列，去除了C-端19个氨基酸。这种截短处理，提高了所制备病毒粒子上刺突蛋白的丰度，提高了病毒粒子的感染性 (Johnson et al. 2020)。

为方便起见，Lenti-X SARS-CoV-2 packaging mixes也可以单独购买。
也可以提供需要配套使用的宿主细胞Human ACE2 293T Cell Line（Code No.631289）。

 
■ 概述
· 高性能包装系统有助于始终获得高病毒滴度：避免在试剂优化上花费时间，让您可以专注于下游分析
· 便捷的单管形式可大大减少动手时间和出错的可能性：操作简便，只需要将含有所选择转移质粒的水溶液，添加至包装细胞培养液中即可
· 包装混合物可以单独购买，也可以打包购买：节约资源，按需购买
· 提供中和试验对照：可使用试剂盒中的包装混合物，制备缺少包膜蛋白的慢病毒粒子，用作阴性对照
· 提供配套宿主细胞ACE2 cell line
 
 
■ 实验例
慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统
图1. 使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots制备假病毒操作流程。
 
慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统
图2. Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (Universal)操作流程。
 
慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统
图3. 使用SARS-CoV-2假病毒转导ACE2-阳性细胞。Panel A. 使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots制备表达WT (Wuhan-Hu-1) 或者D614G变体刺突蛋白，同时也表达ZsGreen1绿色荧光蛋白质的假慢病毒粒子。每种病毒制剂取100 μl，转导稳定表达人ACE2受体的HEK293T细胞，HEK293T细胞培养在含有6 μg/ml polybrene 的48孔板中。转导后6天通过流式细胞术测定每个样品的转导效率。Panel B. 使用表达萤火虫荧光素酶的假病毒分别转导ACE2-阳性和不表达ACE2的HEK293T细胞（用于提供荧光素酶活性分析背景信号）。转导后6天测定荧光素酶活性。
 
慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统
图4. 测定使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots获得的功能滴度。Panel A.使用SARS-CoV-2假病毒转导ACE2-阳性HEK293T细胞，通过分析ZsGreen1荧光标记的表达情况测定功能滴度。Panel B. 感染后72小时，ACE2-阳性细胞的显微图像。
 
 
慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统
图5. 可溶性ACE2蛋白对携带SARS-CoV-2刺突蛋白变体假病毒的中和活性。Panels A and B. 梯度稀释融合IgG Fc结构域的可溶性ACE2蛋白（ACE2-Fc），与SARS-CoV-2假病毒作用于ACE2 HEK293T细胞。感染后3天检测荧光素酶表达水平，作为病毒感染性读数。数据以相对于仅病毒对照感染的中和作用百分比表示。数值为平均值±标准差，每个实验重复三次。
 
慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统
图6. 使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots制备D614G和B.1.351变异型SARS-CoV-2假病毒，测定其转导效率和感染滴度。使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots（B.1.351或D614G，全长或截短）制备表达ZsGreen1绿色荧光蛋白质的SARS-CoV-2假病毒。按照标准操作指导，使用Lenti-X Concentrator将病毒液浓缩50倍（B.1.351全长）或20倍（B.1.351截短和D614G），取不同体积病毒液转导HEK293T细胞，此细胞在48孔板中培养，含有6 μg/ml聚凝胺，能稳定表达人ACE2受体。在转导后6天通过流式细胞仪测定每个样品的转导效率（Panel A），并计算功能滴度（Panel B）。
 
慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统
图7. 使用Lenti-X Packaging Single Shots (Universal)制备的SARS-CoV-2假病毒转导ACE2-阳性细胞。使用Lenti-X Packaging Single Shots (Universal)制备表达截短的B.1.1.7 SARS-CoV-2刺突蛋白，同时也表达ZsGreen1绿色荧光蛋白质(Panel A)或者萤火虫荧光素酶(Panel B)的假型慢病毒粒子。Panel A. 使用浓缩后的病毒上清液(20X; 30 or 10 μl)转导稳定表达人ACE2受体的HEK293T细胞，HEK293T细胞培养在48孔板中，polybrene含量为6 μg/ml。转导后6天通过流式细胞术测定每个样品的转导效率。Panel B. 使用浓缩后的病毒上清液(20X; 30, 20, or 10 μl)分别转导稳定表达人ACE2受体的HEK293T细胞，HEK293T细胞培养在48孔板中，polybrene含量为6 μg/ml。转导缺少ACE2转基因的HEK293T细胞，以测定背景发光水平（NC，阴性对照）。转导后6天测定每个样品的发光值。
 
慢病毒包装系统 SARS-CoV-2假病毒包装系统
图8. 表达萤火虫荧光素酶的B.1.351 SARS-CoV-2假病毒转导ACE2 HEK293T细胞。使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (B.1.351 spike, 全长或截短)制备表达萤火虫荧光素酶的假病毒。按照标准操作指导，使用Lenti-X Concentrator将病毒液浓缩20倍，取不同体积病毒液转导HEK293T细胞，此细胞在48孔板中培养，含有6 μg/ml聚凝胺，能稳定表达人ACE2受体。同时平行转导不表达ACE2受体的HEK293T细胞以确定背景发光水平，因为在缺乏ACE2受体的情况下，SARS-CoV-2假病毒无法感染HEK293T细胞。在转导3天后测定每个样品的发光值。
 
■ 制品内容
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (WT Spike, Full Length)（Code No. 632668）
·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (WT Spike, Full Length) （Code No. 632672）
·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix（No-Envelope Control) （Code No. 632676）
·Lenti-X Reporter Vector Set＊1＊2
 
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (D614G Spike, Full Length)（Code No. 632669）
·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (D614G Spike, Full Length) （Code No. 632673）
·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (No-Envelope Control) （Code No. 632676）
·Lenti-X Reporter Vector Set＊1＊2
 
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (B.1.351 Spike, Full Length)（Code No. 631292）
·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (B.1.351 Spike, Full Length) (Code No. 631290)
·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (No-Envelope Control) (Code No. 632676)
·Lenti-X Reporter Vector Set＊1＊2
 
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (WT Spike, Truncated)（Code No. 632670）
·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (WT Spike, Truncated) （Code No. 632674)
·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (No-Envelope Control) (Code No. 632676)
·Lenti-X Reporter Vector Set＊1＊2
 
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (D614G Spike, Truncated)（Code No. 632671）
·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (D614G Spike, Truncated) （Code No. 632675)
·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (No-Envelope Control) (Code No. 632676)
·Lenti-X Reporter Vector Set＊1＊2
 
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (B.1.351 Spike, Truncated)（Code No. 631293）
·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (B.1.351 Spike, Truncated) (Code No. 631291)
·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (No-Envelope Control) (Code No. 632676)
·Lenti-X Reporter Vector Set＊1＊2
 
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (Universal)（Code No. 631295）＊3
·Lenti-X Packaging Single Shots (Envelope-Free)＊1
·pEmpty Vector＊1（500 ng/μl） 20 μl
·Lenti-X Reporter Vector Set＊1 *2
·Lenti-X SARS-CoV-2 Spike Vector Set＊1
  pSpike D614G Truncated Vector（500 ng/μl） 20 μl
  pSpike B.1.1.7 Truncated Vector（500 ng/μl） 20 μl
  pSpike B.1.351 Truncated Vector（500 ng/μl） 20 μl
 
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (WT Spike, Full Length) （Code No. 632672）
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (D614G Spike, Full Length) （Code No. 632673）
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (B.1.351 Spike, Full Length) (Code No. 631290)
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (WT Spike, Truncated) （Code No. 632674）
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (D614G Spike, Truncated) （Code No. 632675）
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (B.1.351 Spike, Truncated) (Code No. 631291)
  各12管（冷冻干燥品）
  ※1管用于1个10 cm培养皿病毒包装使用
 
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (No-Envelope Control) （Code No. 632676）
  6管（冷冻干燥品）
  ※1管用于1个10 cm培养皿病毒包装使用
 
＊1 不单独销售。
＊2 Lenti-X Reporter Vector Set
  pEmpty Vector＊1（500 ng/μl） 20 μl
  pLVXS-Luciferase-Puro Vector（500 ng/μl） 20 μl
  不单独销售。请使用大肠杆菌扩增以获得充足数量的质粒。
＊3 我们还提供不包含Lenti-X SARS-CoV-2 Spike Vector Set的产品。在不需要Lenti-X SARS-CoV-2 Spike Vector Set的场合下，请选择Lenti-X Packaging Single Shots (Envelope-Free)（Code No. 631294）。
 
■ 保存
－20℃
（各Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix保存在装有干燥剂的箔袋内）
 
参考文献
1. Detection of SARS-CoV-2-Specific Humoral and Cellular Immunity in COVID-19 Convalescent Individuals. Ni, L. et al. Immunity. (2020) 52, 971–977.
2. Cell entry mechanisms of SARS-CoV-2. Shang, J. et al. Proc Natl Acad Sci USA. (2020) 117, 11727–11734.
3. Evolutionary and structural analyses of SARS-CoV-2 D614G spike protein mutation now documented worldwide. Isabel, S. et al. Sci Rep. (2020) 10, 14031.
4. Optimized Pseudotyping Conditions for the SARS-COV-2 Spike Glycoprotein. Johnson, MC. et al. J Virol. (2020) 94, e01062-20.
 
 
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SARS-CoV-2假病毒宿主细胞酶试剂盒Takara Clontech

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SARS-CoV-2假病毒宿主细胞
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Clontech 631289 Human ACE2 293T Cell Line 1 ml ￥28,727 SARS-CoV-2假病毒宿主细胞 SARS-CoV-2假病毒宿主细胞 SARS-CoV-2假病毒宿主细胞
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SARS-CoV-2进入宿主细胞是由刺突蛋白与ACE2受体之间的相互作用所介导的。为了助力病毒与受体相互作用研究和COVID-19疗法开发，我们开发了在CMV启动子控制下稳定表达ACE2的HEK细胞。已证实，经过多次传代该细胞依然可持续高水平表达ACE2，并可被使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots制备的SARS-CoV-2假病毒高效转导。
 
ACE2是一种含锌金属酶，位于内皮细胞和其他类型细胞的表面。这种跨膜蛋白可将血管紧张素I转化为血管紧张素1-9(一种在心肌细胞中起抗肥厚作用的9-氨基酸肽)，并将血管紧张素II转化为血管紧张素1-7，这是一种有益的血管扩张剂和防扩散剂。
 
Human ACE2 293T Cell Line由编码ACE2的慢病毒转导HEK细胞构建而成。通过RT-qPCR方法证实，该细胞经亚克隆能高效表达ACE2。
 
■ 概述
· 由CMV启动子控制，组成型表达ACE2的HEK细胞
· 经多次传代证实，ACE2可持续高效表达
· 可被SARS-CoV-2假病毒
(e.g., 使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots制备)高效转导
 
■ 应用
· SARS-CoV-2假病毒中和研究
· 病毒-受体相互作用和病毒侵入分析
 
■ 实验例
 
SARS-CoV-2假病毒宿主细胞
图1 通过流式细胞术分析ACE2表达情况。使用与Alexa Fluor 488共轭抗ACE2抗体(R&D Systems, Code No. FAB9332G)检测表达在人ACE2 293T细胞表面的ACE2，未被标记的细胞作为阴性对照。
 
SARS-CoV-2假病毒宿主细胞
图2 不同代次细胞中ACE2稳定表达的情况。使用One Step PrimeScript RT-PCR Kit (Perfect Real Time) (Code No. RR064A)通过RT-qPCR方法，测定人ACE2 293T连续细胞代次中ACE2 mRNA相对表达水平。以三个重复测定的管家基因ACTB Ct值为标准对ACE2表达的Ct值进行归一化处理。通过计算2^(-ΔΔCt)，确定相对于293T细胞，稳转细胞中ACE2的表达情况。
 
SARS-CoV-2假病毒宿主细胞
图3 使用表达ZsGreen1绿色荧光蛋白质的SARS-CoV-2假病毒转导人ACE2 293T细胞。使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots制备携带野生型或者D614G变异型刺突蛋白（截短形式）并表达ZsGreen1绿色荧光蛋白质的慢病毒粒子。Panel A为感染72小时后被转导细胞的显微图像。Panel B为在转导6天后，通过流式细胞仪测定的每个样品的转导效率。
 
SARS-CoV-2假病毒宿主细胞
图4 使用表达荧光素酶的SARS-CoV-2假病毒转导人ACE2 293T细胞。使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots制备携带野生型或者D614G变异型刺突蛋白（全长或者截短形式）并表达萤火虫荧光素酶的慢病毒粒子。取10 μl 浓缩病毒液（21倍）转导人ACE2 293T细胞。转导6天后测定荧光素酶活性，以不表达包膜蛋白的病毒作为对照，测定荧光素酶活性背景值。
 
SARS-CoV-2假病毒宿主细胞
图5 使用人ACE2 293T细胞进行中和试验，以非人灵长类动物恢复期混合血清作为阻断剂。野生型（截短形式）SARS-CoV-2假病毒与梯度稀释的恢复期血清(BEI Resources，Code. NR-52401)孵育后转导人ACE2 293T细胞。感染3天后测定荧光素酶水平，作为病毒感染读数。图示数据为中和作用相对于仅病毒控制感染的百分比。数值为平均值±标准偏差，实验设置3个平行重复。阴性对照组添加健康猕猴血清作为阻断剂。
 
SARS-CoV-2假病毒宿主细胞
图6 使用人ACE2 293T细胞进行中和试验，以可溶性ACE2蛋白作为阻断剂。Panels A和B梯度稀释与IgG (ACE2-Fc)Fc结构域相融合的可溶性ACE2蛋白，和SARS-CoV-2假病毒一起转导人ACE2 293T细胞。图示数据为中和作用相对于仅病毒控制感染的百分比。数值为平均值±标准偏差，实验设置3个平行重复。
 
 
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SARS-CoV-2 阳性对照（N 基因） #N2117S 50 ul-NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – 阳性对照品

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产品特点

·包含完整的核衣壳蛋白基因（N gene）
·含有 T7 RNA 启动子序列，可产生 RNA 转录本
·质粒骨架为 pUC19，可在大肠杆菌中增殖
·为 Luna® SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 检测试剂盒（NEB #E3019）的组分之一
 

产品描述

 SARS-CoV-2 阳性对照（N 基因）以质粒形式提供，其中含 SARS-CoV-2 N-基因（GenBank：MN908947.3），以及 T7 RNA 启动子序列，如有需要可生成 RNA 转录本。该产品用于靶向 N 基因的 SARS-CoV-2 检测方法（如：RT-qPCR、LAMP 等）的验证。浓度为 1,000,000 拷贝/μl。

注意：在绝对定量实验中，不建议将该阳性对照的浓度作为绝对拷贝数。

LAMP SARS-CoV-2 引物预混液（N/E） #S1883S 85 reactions-NEB酶试剂 New England Biolabs

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上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – 等温扩增和链置换

LAMP SARS-CoV-2 引物预混液（N/E）                              收藏

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产品特性

 

· 新型 SARS-CoV-2 突变体对本套引物有何影响？登陆 Primer Monitor 在线工具（更多信息），查看突变体图谱与引物匹配的最新信息。 

·  以 10X 浓度提供

·  靶向 SARS-CoV-2 基因组中的 N 基因和 E 基因区域

·  优化形成 2 组引物混合物，提升了 SARS-CoV-2 病毒 RNA 检测的速度和灵敏度

·  为 SARS-CoV-2 快速变色 LAMP 检测试剂盒（NEB #E2019）的组分之一

·  点击如下链接，查看如何使用本套引物和 WarmStart® LAMP（含UDG）试剂检测 SARS-CoV-2 病毒 RNA。https://international.neb.com/-/media/nebus/files/application-notes/appnote_optimizing_rapid_isothermal-workflow_for_sars-cov-2_with_warmstart_lamp_with_udg.pdf?rev=1972ec224ec54ce38f58669cd791e63d 

  ·  如需自己设计 LAMP 引物，请使用 NEB LAMP Primer Design Tool

·了解 LAMP 和其它等温扩增方法，请点击https://international.neb.com/applications/dna-amplification-pcr-and-qpcr/isothermal-amplification

·  全球 LAMP（gLAMP）联盟发表了一篇综述文献，全面回顾了 LAMP 及其在 COVID-19 疫情中的作用。https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC8802757/

 

概述

 LAMP SARS-CoV-2 引物预混液（N/E）是一套靶向两个基因的混合引物，可识别 SARS-CoV-2 基因组中的核衣壳蛋白基因（N）和包膜蛋白基因（E）区域。包含分别靶向两个区域的 2 组 LAMP 引物（F3、B3、FIP、BIP、LF、LB），能提高对 SARS-CoV-2 的检测能力。

 

LAMP SARS-CoV-2 引物序列（5´→ 3´）

Gene N2 Primer Set

Sequence

E1-F3

TGAGTACGAACTTATGTACTCAT

E1-B3

TTCAGATTTTTAACACGAGAGT

E1-FIP

ACCACGAAAGCAAGAAAAAGAAGTTCGTTTCGGAAGAGACAG

E1-BIP

TTGCTAGTTACACTAGCCATCCTTAGGTTTTACAAGACTCACGT

E1-LF

CGCTATTAACTATTAACG

E1-LB

GCGCTTCGATTGTGTGCGT

 

Gene N2 Primer Set

Sequence

N2-F3

ACCAGGAACTAATCAGACAAG

N2-B3

GACTTGATCTTTGAAATTTGGATCT

N2-FIP

TTCCGAAGAACGCTGAAGCGGAACTGATTACAAACATTGGCC

N2-BIP

CGCATTGGCATGGAAGTCACAATTTGATGGCACCTGTGTA

N2-LF

GGGGGCAAATTGTGCAATTTG

N2-LB

CTTCGGGAACGTGGTTGACC

NEBNext®ARTIC SARS-CoV-2 FS 文库制备试剂盒（适用于 Illumina 平台） #E7658L 96 次反应-NEB酶试剂 New England Biolabs

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上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品资料 – 用于二代测序的 NEBNext® 试剂 – 适用于 Illumina 测序平台/Ultra II DNA & RNA

NEBNext®ARTIC SARS-CoV-2 FS 文库制备试剂盒（适用于 Illumina 平台）                              收藏

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#E7658L
96 次反应
19,979.00
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#E7658S
24 次反应
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相关产品

NEBNext® ARTIC SARS-CoV-2 配套试剂盒（Oxford Nanopore Technologies）

NEBNext® ARTIC SARS-CoV-2 文库制备试剂盒（适用于 Illumina 平台）

产品特点

• 简化、高效的操作流程

• 病毒基因组起始范围广：10 – 10000 个拷贝
• 提高 SARS-CoV-2 基因组覆盖度的均一性
• 文库制备前无需进行扩增子标准化
• 文库插入片段约 150 bp
• 适用于 2 x 75 Illumina 测序
• 可选用人类对照引物
• 提供 NEBNext 样品纯化磁珠（SPRIselect®）
• 接头引物可单独提供
 

概述

 目前对 SARS-CoV-2 测序的可靠性和准确性的要求日益增长，为了满足上述需求，NEB 推出 NEBNext® ARTIC 文库制备试剂盒。这些试剂盒根据 ARTIC Network（1）原始流程开发，可分别用于长片段和短片段测序。ARTIC SARS-CoV-2 测序是基于多重扩增子技术的病毒全基因组测序。

 
ARTIC SARS-CoV-2 操作流程是一种可覆盖整个病毒基因组的多重扩增子测序方法。基于此方法，NEB 开发了 NEBNext ARTIC SARS-CoV-2 文库制备试剂盒，并优化和创新了相关试剂。
 
NEBNext ARTIC 试剂盒包含用于 SARS-CoV-2 gRNA 的 RT-PCR 引物和试剂，以及用于下游 Illumina® 和 Oxford Nanopore Technologies® 测序的文库制备相关试剂。使用 NEB 基于测序经验数据开发的方法平衡 V3 ARTIC 引物。结合优化的 RT-PCR 试剂，该试剂盒可在较宽的拷贝数范围内提高 gRNA 扩增子的均一性。
 
无论起始量多少（10 – 10,000 个病毒基因组拷贝）都可使用同一个 RT 方案，并且在靶向扩增前无需进行标准化。使用 NEB 基于测序经验数据开发的方法平衡 V3 ARTIC 引物，以提高整个病毒基因组的扩增子覆盖度均一性。文库制备使用 NEBNext FS 试剂和工作流程，包含 cDNA 酶切打断，同时试剂量已根据 ARTIC 应用进行了调整。请注意，文库制备的接头引物需要单独购买。使用全新的 NEBNext Library PCR Master Mix 时，无论初始起始量多少，都可用相同的 PCR 循环数扩增所有的文库。
 
NEBNext ARTIC SARS-CoV-2 FS 文库制备试剂盒（适用于 Illumina 平台）包含 cDNA 酶切打断过程，可制备约 150 bp 插入片段的文库，适用于 2 x 75 bp 测序。如需制备更长的插入片段，选用 NEBNext ARTIC SARS-CoV-2 文库制备试剂盒（适用于 Illumina 平台）（NEB #E7650）可制备约 400 bp 插入片段的文库，适用于 2 x 75 bp 测序。
 
1.(Josh Quick 2020. nCoV-2019 sequencing protocol v2 (GunIt). protocols.io https://dx.doi.org/10.17504/protocols.io.bdp7i5rn).
 

产品描述

NEBNext®ARTIC SARS-CoV-2 FS 文库制备试剂盒（适用于 Illumina 平台） #E7658L 96 次反应

使用 NEBNext ARTIC SARS-CoV-2 FS 文库制备试剂盒（适用于 Illumina 平台），提高基因组覆盖度。基因组数据可视化图（IGV）显示了 SARS-CoV-2 基因组的覆盖度。起始样本是 100 ng 人类通用参考 RNA（ThermoFisher QS0639）中的 1,000 份 SARS-CoV-2 病毒 gRNA 拷贝（ATCC VR-1986 和 VR-1991）。分别使用两种引物对起始样本进行多重扩增子扩增：IDT ARTIC nCoV-2019 V3 Panel（“Standard”）和 NEBNext 已平衡的 ARTIC SARS-CoV-2 引物池，两种引物中添加或不添加 NEBNext ARTIC 人类对照引物。建库试剂为 NEBNext ARTIC SARS-CoV-2 FS 文库制备试剂盒（适用于 Illumina 平台）。使用 MiSeq® （2 x 75 bp）测序。测定每个碱基的覆盖深度，向下抽样（seqtk）Reads 数，使用 Bowtie 2 比对至 SARS-CoV-2 参考基因组（NCBI, NC_045512）。

NEBNext®ARTIC SARS-CoV-2 FS 文库制备试剂盒（适用于 Illumina 平台） #E7658L 96 次反应

使用 NEBNext ARTIC SARS-CoV-2 FS 文库制备试剂盒（适用于 Illumina 平台），提高每个碱基的覆盖深度。起始样本是 100 ng 人类通用参考 RNA（ThermoFisher QS0639）中的 10 – 1,000 份 SARS-CoV-2 病毒 gRNA 拷贝（ATCC VR-1986 和 VR-1991）。分别使用两种引物对起始样本进行多重扩增子扩增：IDT ARTIC nCoV-2019 V3 Panel（“Standard”）或 NEBNext 已平衡的 ARTIC SARS-CoV-2 引物池。建库试剂为 NEBNext ARTIC SARS-CoV-2 FS 文库制备试剂盒（适用于 Illumina 平台）。使用 MiSeq® （2 x 250 bp）测序。测定每个碱基的覆盖深度，向下抽样（seqtk）Reads 数，使用 Bowtie 2 比对至 SARS-CoV-2 参考基因组（NCBI, NC_045512）。
 
NEBNext®ARTIC SARS-CoV-2 FS 文库制备试剂盒（适用于 Illumina 平台） #E7658L 96 次反应
添加人类对照引物不会降低基因组覆盖度。起始样本是 100 ng 人类通用参考 RNA（ThermoFisher QS0639）中的 1,000 份 SARS-CoV-2 病毒 gRNA 拷贝（ATCC VR-1986 和 VR-1991）。使用 NEBNext 已平衡的 ARTIC SARS-CoV-2 引物池对起始样本进行多重扩增子扩增，引物中添加或不添加 NEBNext ARTIC 人类对照引物。建库试剂为 NEBNext ARTIC SARS-CoV-2 FS 文库制备试剂盒（适用于 Illumina 平台）。使用 MiSeq® （2 x 75 bp）测序。基因组部分的各覆盖深度由起始量和 Reads 向下抽样至 10,000、100,000、500,000 和 1,000,000 确定。
 
NEBNext®ARTIC SARS-CoV-2 FS 文库制备试剂盒（适用于 Illumina 平台） #E7658L 96 次反应

使用 NEBNext ARTIC SARS-CoV-2 FS 文库制备试剂盒（适用于 Illumina 平台），提高基因组覆盖度。基因组数据可视化图（IGV）显示了 SARS-CoV-2 基因组的覆盖度。起始样本是 100 ng 人类通用参考 RNA（ThermoFisher QS0639）中的 1,000 份 SARS-CoV-2 病毒 gRNA 拷贝（ATCC VR-1986 和 VR-1991）。分别使用两种引物对起始样本进行多重扩增子扩增：QIAseq SARS-CoV-2 Primer Panel 和 NEBNext 已平衡的 ARTIC SARS-CoV-2 引物池。建库试剂为 QIAseqFX kit 或 NEBNext ARTIC SARS-CoV-2 FS 文库制备试剂盒（适用于 Illumina 平台）。使用 MiSeq® （2 x 75 bp）测序。测定每个碱基的覆盖深度，向下抽样（seqtk）Reads 数，使用 Bowtie 2 比对至 SARS-CoV-2 参考基因组（NCBI, NC_045512）。

NEBNext®ARTIC SARS-CoV-2 FS 文库制备试剂盒（适用于 Illumina 平台） #E7658L 96 次反应

使用 NEBNext ARTIC SARS-CoV-2 FS 文库制备试剂盒（适用于 Illumina 平台），提高基因组覆盖度。起始样本是 100 ng 人类通用参考 RNA（ThermoFisher QS0639）中的 1,000 份 SARS-CoV-2 病毒 gRNA 拷贝（ATCC VR-1986 和 VR-1991）。分别使用两种引物对起始样本进行多重扩增子扩增：QIAseq SARS-CoV-2 Primer Panel 和 NEBNext 已平衡的 ARTIC SARS-CoV-2 引物池。建库试剂为 QIAseqFX kit 或 NEBNext ARTIC SARS-CoV-2 FS 文库制备试剂盒（适用于 Illumina 平台）。使用 MiSeq® （2 x 75 bp）测序。基因组部分的各覆盖深度由起始量和 Reads 向下抽样至 10,000、100,000、500,000 和 1,000,000 确定。

NEBNext ARTIC SARS-CoV-2 FS 文库制备试剂盒（适用于 Illumina 平台）工作流程
 NEBNext®ARTIC SARS-CoV-2 FS 文库制备试剂盒（适用于 Illumina 平台） #E7658L 96 次反应