热疗法对抗人类乳突病毒相关恶性肿瘤之机制基础

人类乳突瘤病毒 (Human Papillomavirus, HPV) 是造成子宫颈癌的主要病因，同时也是许多肛门与生殖器系统瘤样病变的原因之一。虽然HPV的疫苗已经研发问世，但仍迫切需要更有效率的治疗方法。今年Wang等科学家发表在「细胞报导」期刊中的一篇科研文章提供了一个相当迷人又有趣的方法。

在受HPV感染的细胞中，具有致癌能力的病毒早期蛋白7 (early protein 7, E7)的mRNA会受到N6-腺苷甲基转移酶复合体 (甲基转移酶样蛋白3与14)的修饰。这个N6-甲基腺苷（N6-Methyladenosine, m6A）修饰能够被m6A读取蛋白的胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1 (IGF2BP1)辨认，并结合形成稳定的致癌复合物(E7 mRNA-IGF2BP1 complex)。在小鼠与斑马鱼模式中同样也发现，当受到热压力刺激时，这些复合物会迅速的产生不正常的堆积并形成无法溶解的聚集物；尔后，聚集物会透过泛素蛋白酶体系统降解，进而抑制了这些受到HPV感染的细胞的癌变。

过往许多文献都提及了热疗法对于某些癌症医治的应用，这篇科研文章除了验证了其中的可行性之外，也揭露了构筑此机制的重要分子基础：N6-甲基腺苷修饰的早期蛋白7 mRNA和m6A读取蛋白IGF2BP1之间相互调控的作用。

GeneTex为不同生医科研领域提供了多样化且经充分验证的抗体与试剂，其中也包括了Wang于研究中所使用的HPV type 18 E7 antibody (GTX133412)。欲了解GeneTex 癌症研究与病毒感染领域的相关产品，请咨询我们的代理商上海金畔生物或访问我们的网站www.genetex.com以获取更多信息。

重点产品

Human Papillomavirus type 18 E7 antibody [GT881] (GTX634337)	Human Papillomavirus type 16 E7 antibody (GTX133411)
IGF2BP1 antibody (GTX134816)	METTL14 antibody [HL1816] (GTX637541)
Hsp70 antibody [HL1580] (GTX637059)	Ubiquitin antibody [GT7811] (GTX630148)

重点产品

查看相关内容

(1) 小册 – 病毒学研究用抗体

(2) 单页 – 病毒宿主交互作用

(3) 挂图 – 癌症信号

(4) 小册 – 肿瘤标记

参考文献

Cell Rep. 2022 Oct 25;41(4):111546. doi: 10.1016/j.celrep.2022.111546.

更多详细信息，请咨询GeneTex代理商-上海金畔生物

非洲猪瘟病毒研究

非洲猪瘟病毒：对全球养猪业的持续威胁

非洲猪瘟病毒(ASFV)是一种致命的（95-100% 死亡率）和高度传染性病原体，主要感染家猪和野猪，非洲猪瘟起源于非洲的撒哈拉以南，已在非洲、欧洲和亚洲的 50 多个国家被报导，并已蔓延到加勒比地区，虽然它不会感染人类，但它对养猪业产生了严重的经济影响，2018-2019 年全球近 25% 的猪群死于非洲猪瘟。

非洲猪瘟的传播是通过直接接触受感染的猪以及接触它们的血液、体液、粪便和尸体而发生的，迄今为止，尚未开发出有效的治疗方法或有效的疫苗，目前实施的减缓非洲猪瘟传播的措施在很大程度上依赖于早期检测、农场生物安全措施、猪群扑杀和移动控制，所有这些都需要可靠的诊断分析，以促进早期预警、及时干预和监测传播。

目前的诊断方法包括用常规和即时 PCR检测病毒 DNA、ELISA 和侧向流动层析检测非洲猪瘟病毒抗原或抗体，以及更明确但耗时的病毒分离和血液吸附。

GeneTex 为各种应用提供了一个多样的高质量验证目录，包括蛋白质印迹 (WB)、ICC/IF、IHC-P、ELISA、夹心 ELISA 和侧向流动层析。请参阅下面突出显示的产品或访问 www.genetex.cn 了解详细信息。

用于非洲猪瘟病毒研究的 GeneTex 抗体

ASFV p54 antibody [HL1287]

 (GTX636701) 

侧向流动层析

Capture: ASFV p54 antibody [HL1287] (GTX636701) 

Detection: ASFV p54 antibody [GT1075] (GTX635691)

N: Lysis buffer

P: Recombinant ASFV p54 protein

夹心 ELISA

Capture: ASFV p54 antibody [HL1287] (GTX636701) 

Detection: HRP-conjugated ASFV p54 antibody [HL1286] (GTX636700)

ASFV p54 antibody [HL1289] 

(GTX636703)

侧向流动层析

Capture: ASFV p54 antibody [HL1289] (GTX636703) 

Detection: ASFV p54 antibody [GT1075] (GTX635691) 

N: Lysis buffer

P: Recombinant ASFV p54 protein

夹心 ELISA

Capture: ASFV p54 antibody [HL1287] (GTX636701) 

Detection: HRP-conjugated ASFV p54 antibody [HL1289] (GTX636703) 

更多病毒学研究相关信息

小冊 – Antibodies For Virology Research

临床前研究和早期临床实验中大规模生产重组腺相关病毒/慢病毒的理想工具

Mirus公司最新推出的适用于临床前研究和早期临床实验中大规模生产重组腺相关病毒和慢病毒转染试剂TransIT-VirusGEN®SELECT Transfection Reagent面世了，TransIT-VirusGEN®系列转染试剂旨在提高载体DNA转染到悬浮和贴壁HEK293细胞的转染效率，并增加重组腺相关病毒和慢病毒的产量。并可提供BSE TSE Statement 和质量控制的相关文件，以简化辅助材料的资质认证过程，节省时间和成本，确保从研发到大规模生产的无缝衔接，成为临床前研究和早期临床实验中大规模生产重组腺相关病毒/慢病毒的理想工具。

产品特点：

高效转染DNA，适用于临床前研究和早期临床实验中重组腺相关病毒

和慢病毒的大规模生产；

质控严格，包括产品性能、批次重复性、无菌性、内毒素及支原体含

量测试；

灵活性好，兼容不同的病毒生产平台并且允许重复过滤；

无动物源成分，保证全合成制剂成分清晰。

验证实例：

图1. TransIT-VirusGEN® Reagent和 VirusGEN® AAV Transfection Kit能产生更高的AAV滴度。 A.在Expi293 Expression Media(Thermo Fisher)中生长的Expi293F细胞(Thermo Fisher)使用TransIT-VirusGEN®转染试剂(1.5:1 reagent-to-DNA ratio (vol:wt), Mirus Bio LLC)，VirusGEN®AAV转染试剂盒(Mirus Bio LLC)，PEIpro (1:1，Polyplus)和FectoVIR®-AAV (1:1, Polyplus)的瞬时 转 染 来 产 生 重 组 AAV2。AAV2是 通 过 转 染 pAAV-hrGFP、pAAV-RC和 pAAV-Helper质 粒(1:1:1的DNA比例，每瓶2 μg/ml-2 mg，Agilent Technologies)产生的。1L的2×106细胞/ml密度在2.8L 的Thomson shake flask中转染。在转染后72小时使用化学裂解收获AAV2。通过转导HT1080细胞来测定功能性滴度，并在转导后48小时使用Guava®easyCyte 5HT流式细胞仪测量绿色荧光蛋白的表达。用少于20% GFP阳性细胞的病毒稀释液测量AAV功能滴度。基因组拷贝通过使用引物和靶向CMV启动子的 探针的ddPCR测 定 。B. 使 用 AAV2 Titration ELISA Kit(Progen)测定总组装衣壳，通过将基因组拷贝数除以每种条件下的总组装衣壳来确定GC/capsid ratio。误差线代表duplicate flasks的范围。	图2. 在不同的悬浮细胞类型和培养基配方中TransIT-VirusGEN® Reagen和VirusGEN®AAV Transfection Kit在AAV生产中的表现优于基于PEI的试剂。(A) Expi293F细胞(ThermoFisher)或(B)病毒生产细胞(ThermoFisher)在转染前适应或生长在Expi293培养基 (Thermofisher)、LV-MAX (Thermofisher)、FreeStyle™ F17 (ThermoFisher)或BalanCD HEK293 (Irvine Scientific)培养基。使用TransIT-VirusGEN®转染试剂(2:1reagent-to-DNA ratio (vol:wt)(体 积 :重 量 )， Mirus Bio LLC)，VirusGEN® AAV Transfection Kit(Mirus Bio LLC)的 AAV生 产 与 PEIpro (1:1reagent-to-DNA ratio(vol:wt)，Polyplus)和PEI MAX (2:1reagent-to-DNA ratio (vol:wt)，Polysciences)进行比较。AAV2是通过转染pAAV-hrGFP、pAAV-RC和pAAV-Helper质粒(1:1:1 DNA比例，1.5μg/ml = 3μg/孔，Agilent Technologies)产生的。细胞以200万细胞/ml的细胞密度转染。收获的病毒用于转导HT1080细胞，并在转导后48小时使用Guava® easyCyte™5HT流式细胞仪测量绿色荧光蛋白的表达。用少于20% GFP阳性细胞的病毒稀释液测量AAV功能滴度。误差线代表重复孔的范围。
	图3. TransIT-VirusGEN® Reagent和VirusGEN® LV Transfection Kit在多种慢病毒包装系统方面优于基于PEI的试剂。使用TransIT-VirusGEN®转染试剂 +/-将 VirusGEN® LV Enhancer与 PEIpro (2:12:1 reagent-to-DNA ratio，Polyplus)和PEI MAX (4:12:1 reagent-to-DNA ratio，Polysciences)进行比较。慢病毒是通过用两种不同的LV载体混合物(1μg/ml，2μg/ml)转染在Expi293表达培养基(Thermo Fisher)中生长的Expi293细胞而产生的，包括:(A)第三代载体pALD-LentiEGFP-A转移载体和pALD-VSV-G-A、pALDRev-A、pALD-GagPol-A包 装 载 体 (3:0.5:0.5:2 DNA比 例 ， Aldevron)或(B)第 三 代 载 体 pLKO.1-puro-CMV-TurboGFP™ transfer vector(MilliporeSigma) 和 ViraSafe™ Pantropic Packaging mix (pRSV-Rev,pCMV-VSV-G, pCgpV, CellBio Labs) 以 3:0.5:0.5:2 DNA比例转染。在转染后18小时，将VirusGEN® LV Enhancer加入到TransIT-VirusGEN®中。含病毒的上清液用于转导293T/17细胞，并在转导后72小时使用Guava®easyCyte™ 5HT流式细胞仪测量绿色荧光蛋白的表达。慢病毒功能滴度是从含有少于20%GFP阳性细胞的病毒稀释液中测定的。误差线代表重复孔的范围。
图4. TransIT-VirusGEN® Reagent和VirusGEN® LV Transfection Kit可与多种细胞系和培养基配方兼容，用于在悬浮293细胞中生产慢病毒。在LV-MAX生产培养基(ThermoFisher)中生长的病毒生产细胞(293-VP)、在Expi293表达培养基(ThermoFisher)中生长的Expi293细胞或在FreeStyle™F17 (ThermoFisher)中生长的FreeStyle™ 293-F细胞在转染前以4×10^6细胞/ml接种(2ml/未处理的6孔 板 )。使用 TransIT-VirusGEN 转 染 试 剂 +/- VirusGEN LV Enhancer(Mirus Bio，3:1 reagent-to-DNA ratio(wt:vol))生产慢病毒。通过以3:0.5:0.5:2的DNA比例(Aldevron，25μg/瓶(1μg/ml最终浓度 ))转染第三代载体 ALD-LentiEGFP-A转移载体和 pALD-VSV-G-A、pALD-RevA、pALD-GagPol-A包装载体来生产慢病毒。转染后18小时加入 VirusGEN® LV Enhancer。在转导 293T/17细胞后，测量含病毒上清液的功能滴度，并在转导后72小时，使用Guava easyCyte™5HT流式细胞仪测量绿色荧光蛋白的表达。慢病毒功能滴度是从含有少于 20% GFP阳性细胞的病毒稀释液中测定的。误差条代表三个孔的标准偏差。	图5. TransIT-VirusGEN转染试剂可以多次过滤且对试剂性能没有影响。 (A)使用在FreeStyle™ F17培养基中生长的悬浮FreeStyle™ 293-F细胞生产慢病毒，并用第三代载体pLKO.1-puro-CMV-TurboGFP转移载体(Sigma)和ViraSafe™ Pantropic Packaging mix (pRSV-Rev, pCMV-VSV-G, pCgpV, Cell Bio Labs)以 3:0.5:0.5:2的DNA比例转染，总质粒1ug/ml，使用TransIT-VirusGEN转染试剂(3:1，体积:重量)，TransIT-VirusGEN® Transfection Reagent (3:1, vol:wt)通 过 0.22 um polyethersulfone(PES)过滤装置(Millipore Sigma)过滤指定次数。使用通过含病毒的上清液转导 ® 293T/17细胞，并在转导后72小时使用Guava easyCyte™ 5HT流式细胞仪测量绿色荧光蛋白的表达。 (B)AAV2是通过在FreeStyle™ F17培养基中生长的悬浮FreeStyle™ 293-F细胞产生的，使用TransIT-VirusGEN® Transfection Reagent (2:1, vol:wt)转 染 pAAVhrGFP、pAAV-RC和 pAAV-Helper质 粒 (1:1:1DNA ratio，1.5u g/ml，AgilentT ® echnologies)。收获的病毒用于转导HT1080细胞，并在转导后48小时使用Guava easyCyte™ 5HT Flow Cytometer.流式细胞仪测量绿色荧光蛋白的表达。对于慢病毒和AAV病毒，功能滴度都是从含有少于20% GFP阳性细胞的病毒稀释液中测定的。误差条代表三个孔的标准偏差。

验证实例

更多详细信息，请联系Mirusbio国内代理商-上海金畔生物

呼吸道合胞病毒研究

人类呼吸道合胞病毒 (Human Respiratory Syncytial Virus (RSV))是一种不容易检出的呼吸道病原体。经常导致婴儿、小孩、老人等免疫力较为低下或是需要长期照护的人群的死亡。RSV主要透过气溶胶或是近距离接触感染。一般人大多在出生后的两年内受到首次RSV感染，尔后在小孩与成人时期经常会发生再次感染。虽然与流行感冒病毒相比，RSV在临床上的症状没那么严重，但依然造成了全球每年约250,000名大人与60,000名儿童的死亡。

RSV属于肺炎病毒科(Pneumoviridae family)，和同科病毒一样，外观型态多样(可能是长条型或球型)且外层包覆有套膜。其15.2kb的基因体搭载于负链单股RNA上，包含可翻译为11个蛋白质的10个基因(1)，包括: 位于外层套膜上的用于附着的G蛋白(attachment glycoprotein，附着糖蛋白)、协助与宿主细胞膜进行融合的F蛋白(fusion glycoprotein，融合糖蛋白)以及SH蛋白(small hydrophobic protein，小疏水蛋白)；位于内层套膜上的M蛋白(matrix protein, 基质蛋白)；组成核壳体(ribonucleocapsid) 的N蛋白(nucleoprotein, 核蛋白)、P蛋白(phosphoprotein, 磷酸蛋白)与L蛋白(large protein, 大蛋白)、M2-1转录因子蛋白；另外还有M2-2调控蛋白以及非结构蛋白NS-1与NS-2。

RSV可分为A、B两个主要的抗原群体，两群体在蛋白质的表现上多有差异，其中主要用来定义抗原群体分类的是帮助附着宿主用的G蛋白。有趣的是，在激活中和抗体与制造有效疫苗对抗A和B两种RSV的试验中，反倒是融合前型态的F蛋白的theta位点被证明是最佳的RSV免疫抗原因子(2)。虽然价格高昂且半衰期短，但能对抗F蛋白的palivizuma是当下唯一获得核可上市的RSV治疗用单株抗体，主要施打对象为具有感染高风险性的婴幼儿。为了弥补当下治疗方法的不足，有许多直接对抗融合前型态F蛋白的单株抗体也加入了研发试验的行列中。

除了治疗方法之外，RSV检验方法也是临床科研的重点之一。尽管目前有数个用于检出RSV的方法，其中最值得信赖的还是相对耗时的鼻腔黏膜样本核酸测试(RT-PCR)。利用抗体测试进行实时检验，除了可以更快速的帮助诊断之外，未来也能协助进行更有效率的早期干预。因此，为了支持RSV基础科研，GeneTex开拓了一系列对抗G蛋白、F蛋白、N蛋白与M2蛋白的单克隆与多克隆抗体清单。另外，为了优化整体项目并增强未来RSV检出功效，GeneTex更进一步研发相关的重组兔单克隆抗体，如N蛋白抗体。这些N蛋白抗体不只具有优异的抗原亲和力，而且也通过了酶联免疫吸附测定(ELISA)、夹心法酶联免疫吸附测定(sandwich ELISA)以及侧向层析(lateral flow assay)的验证。此外，这些抗体还适用于Western blot、免疫沉淀(immunoprecipitation)与免疫组化(immunocytochemistry)等实验应用。

详情请参见下方重点产品与信息，也欢迎联系我们或代理商上海金畔生物。

精选呼吸道合胞病毒抗体

精选重组呼吸道合胞病毒抗体

推荐使用于夹心酶联吸附分析之呼吸道合胞病毒抗体配对

GeneTex重组呼吸道合胞病毒抗体与他牌高引用克隆抗体之比较

使用间接酶联吸附分析演示不同抗体对于A型 (图A) 与B型 (图B) 呼吸道合胞病毒核衣壳蛋白敏感度的比较: (1)蓝色系线条: GeneTex重组呼吸道合胞病毒核衣壳蛋白抗体GTX636648、 GTX636649以及GTX636650。(2)红色系线条: 他牌呼吸道合胞病毒高引用克隆抗体。

推荐使用于夹心酶联吸附分析之呼吸道合胞病毒抗体配对

Capture Antibody :

GTX636649 [HL1247]

Detection Antibody :

GTX636648 [HL1246]

Capture Antibody :

GTX636650 [HL1248]

Detection Antibody : 

GTX636648 [HL1246]

重组呼吸道合胞病毒抗体之结合亲和力

* GTX636711为A型呼吸道合胞病毒核衣壳蛋白之专一抗体

呼吸道合胞病毒重组核衣壳蛋白

 重点产品

Respiratory Syncytial Virus type A Nucleoprotein, DDDDK tag (GTX136751-pro)

Respiratory Syncytial Virus type BNucleoprotein, DDDDK tag (GTX136931-pro)

Respiratory Syncytial Virus Nucleoprotein antibody [HL1248] (GTX636650)

Respiratory Syncytial Virus type A Nucleoprotein antibody [HL1297] (GTX636711)

参考文献

Nat Rev Microbiol. 2019 Apr;17(4):233-245.

Pathogens. 2022 Nov 11;11(11):1324.

更多详细信息，请咨询GeneTex代理-上海金畔生物